The invention discloses a preparation method of M2 macrophage derived extracellular matrix, which belongs to the field of tissue engineering technology, including three steps: macrophage isolation, culture, macrophage continuous culture and preparation of macrophage derived extracellular matrix. The matrix material prepared by the method of the present invention can be used as a scaffold material for subsequent research on the effect of stem cell behavior, and provides a new choice for tissue engineering biomaterials.
【技术实现步骤摘要】
巨噬细胞衍生细胞外基质的制备方法
本专利技术属于组织工程
，具体涉及一种M2型巨噬细胞衍生细胞外基质的制备方法。
技术介绍
近年来随着组织工程的发展，使用细胞和支架材料来修复或替代病损的组织和器官的方法越来越受到研究者的重视。组织工程包括种子细胞、支架材料、生长调节因子三要素，其中合适的支架材料是成功修复组织的前提条件。在过去的几年里，组织工程的一项热门研究就是制造由组织或器官脱细胞衍生而来的细胞外基质(extracellularmatrix，ECM)生物支架。从供体组织提取的脱细胞细胞外基质的方法已经应用于皮肤、膀胱、心脏瓣膜和小肠粘膜下层等部位。尽管非自体组织来源的生物支架已经用于临床，但是有关组织工程的研究表明，自体组织的生物支架要优于非自体组织来源的支架。为了寻找自体组织的生物支架，用细胞衍生的细胞外基质作为支架是近年来的一种崭新的方法。组织衍生的细胞外基质由于不同组织的功能不同，造成在不同的组织成分有很大不同，其天然结构非常复杂。而用细胞衍生的细胞外基质来制作支架，与组织衍生的细胞外基质支架相比，具有极强的仿生结构、可塑性、无免疫源性等特点。综上所...
【技术保护点】
1.一种M2型巨噬细胞衍生细胞外基质的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：S1：巨噬细胞的分离、培养：提取骨髓细胞，制成单细胞混悬液，离心弃去上清液，加入红细胞裂解液混匀，静置裂解，加入1640培养基终止反应；再次离心，弃上清，将下层细胞沉淀用培养基重悬，然后铺板入无菌细胞培养皿培养6‑10天得到成熟的骨髓源性巨噬细胞；S2：巨噬细胞继续培养：弃去S1步骤中所用的培养基，更换为继续培养基，培养24h，得到M2型巨噬细胞；S3:巨噬细胞衍生细胞外基质的制备：将巨噬细胞在继续培养基中继续培养5天，预处理液浸泡1小时后PBS彻底冲洗，得到衍生细胞外基质。
【技术特征摘要】
1.一种M2型巨噬细胞衍生细胞外基质的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：S1：巨噬细胞的分离、培养：提取骨髓细胞，制成单细胞混悬液，离心弃去上清液，加入红细胞裂解液混匀，静置裂解，加入1640培养基终止反应；再次离心，弃上清，将下层细胞沉淀用培养基重悬，然后铺板入无菌细胞培养皿培养6-10天得到成熟的骨髓源性巨噬细胞；S2：巨噬细胞继续培养：弃去S1步骤中所用的培养基，更换为继续培养基，培养24h，得到M2型巨噬细胞；S3:巨噬细胞衍生细胞外基质的制备：将巨噬细胞在继续培养基中继续培养5天，预处理液浸泡1小时后PBS彻底冲洗，得到衍生细胞外基质。2.根据权利要求1所述M2巨噬细胞衍生细胞外基质的制备方法，其特征在于,步骤S1中所述提取骨髓细胞的方法为：颈髓离断处死实验动物，75%乙醇浸泡5min，无菌条件下取双侧股骨、胫骨，剥离肌肉，将分离干净的股...
【专利技术属性】
技术研发人员：王常勇，原芳芳，周瑾，刘伟，王春兰，
申请(专利权)人：中国人民解放军军事科学院军事医学研究院，
类型：发明
国别省市：北京,11
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