一种在固相载体特定区域选择性固定蛋白质的方法技术

本发明专利技术涉及一种在固相载体特定区域选择性固定蛋白质的方法，包括：步骤一：在硅衬底上光刻SU‑8模具；将PDMS溶液混合均匀，抽真空除干净气泡；将PDMS混合液倒在SU‑8模具上，加热固化，形成PDMS固化块，该PDMS固化块中心位置形成有凹坑；在凹坑的左右两端分别打一个进样口与出气口；进样口和出气口均与凹坑相连通；清洗玻璃片和该PDMS模具后，使玻璃载体与该PDMS模具贴合，用夹具将两者固定；在进样口、出气口加入PL溶液，清洗后得到表面附着有PL的玻璃载体；步骤二：对玻璃片进行ELISA实验。本发明专利技术操作简易且成本低廉，通过PDMS模具实现了固相载体特定区域的化学处理，实现荧光增强，大大提高了蛋白质芯片的检测灵敏度，对疾病的早期检测与诊断具有重要意义。

A method for selective immobilization of proteins on solid-phase carriers

The present invention relates to a method for selectively immobilizing proteins on a specific region of solid phase carrier, including: step 1: photolithography SU_8 mold on silicon substrate; homogeneous mixing of PDMS solution and vacuum cleaning of bubbles; pouring PDMS mixture onto SU_8 mold, heating and curing to form PDMS curing block, which has pits at the center of the curing block; left and right ends of the pit respectively. Put a sample inlet and an air outlet; both the sample inlet and the air outlet are connected with the pit; after cleaning the glass sheet and the PDMS mold, make the glass carrier fit with the PDMS mold and fix them with fixture; add PL solution to the sample inlet and the air outlet, and then get the glass carrier with PL on the surface after cleaning; Step 2: ELISA experiment on the glass sheet. The method has the advantages of simple operation and low cost, realizes chemical treatment of specific area of solid phase carrier through PDMS mould, realizes fluorescence enhancement, greatly improves the detection sensitivity of protein chip, and has important significance for early detection and diagnosis of diseases.

【技术实现步骤摘要】
一种在固相载体特定区域选择性固定蛋白质的方法
本专利技术属于生物医学
，具体涉及一种在固相载体特定区域选择性固定蛋白质的方法。
技术介绍
蛋白质芯片是一种高通量的蛋白功能分析技术，可用于蛋白质表达谱分析，研究蛋白质与蛋白质的相互作用，以及DNA-蛋白质、RNA-蛋白质的相互作用、筛选药物作用的蛋白靶点等。传统的蛋白质芯片检测分析操作一般是对固相载体整体进行特殊的化学处理，再将已知的蛋白分子固定其上捕获能与之特异性结合的待测蛋白从而实现生物分子检测与分析，为抗原抗体检测和药物筛选等领域提供有力的技术支持。然而，传统蛋白质芯片固相载体检测区域大，捕获不均匀且蛋白质浓度较低时荧光检测信号很弱，蛋白质芯片的检测灵敏度低。
技术实现思路
针对上述现有技术中存在的问题，本专利技术的目的在于提供一种可避免出现上述技术缺陷的在固相载体特定区域选择性固定蛋白质的方法。为了实现上述专利技术目的，本专利技术提供的技术方案如下：一种在固相载体特定区域选择性固定蛋白质的方法，包括：步骤一：用PDMS模具在玻璃片表面用PL处理；步骤二：对玻璃片进行ELISA实验。进一步地，步骤一包括：步骤1)使用光刻技术在硅本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种在固相载体特定区域选择性固定蛋白质的方法，其特征在于，包括：步骤一：用PDMS模具在玻璃片表面用PL处理；步骤二：对玻璃片进行ELISA实验。

【技术特征摘要】
1.一种在固相载体特定区域选择性固定蛋白质的方法，其特征在于，包括：步骤一：用PDMS模具在玻璃片表面用PL处理；步骤二：对玻璃片进行ELISA实验。2.根据权利要求1所述的在固相载体区域选择性固定蛋白质的方法，其特征在于，步骤一包括：步骤1)在硅衬底上光刻SU-8模具；步骤2)通过脱模剂浸没SU-8模具室温下反应10min，流水清洗并用氮气吹干；步骤3)使用热板120℃加热5min，105℃加热2h，60℃加热3h，实现SU-8模具表面键合单分子疏水层；步骤4)使用玻璃棒将10:1比例配置的PDMS溶液混合均匀，再抽真空除干净气泡；步骤5)将PDMS混合液倒在SU-8模具上，加热实现固化，形成PDMS固化块，该PDMS固化块中心位置形成有一个长方体形状的凹坑；步骤6)将PDMS固化块切割所需要的尺寸，然后在其长方体凹坑的左右两端分别打一个进样口与出气口；进样口和出气口均与该长方体凹坑相连通，形成沟道，得到PDMS模具；步骤7)使用丙酮、异丙醇和去离子水依次超声清洗玻璃片和该PDMS模具；步骤8)使用氮气吹干玻璃片及该PDMS模具后，使玻璃载体与该PDMS模具贴合，再用夹具将两者机械固定；步骤9)在进样口加入10μL0.1％的PL溶液，使之流满所述沟道后在出气口加入10μL0.1％的PL溶液，室温下与玻璃片表面反应2h，清洗干净后得到表面附着有PL的玻璃载体。3.根据权利要求1-2所述的在固相载体区域选择性固定蛋白质的方法，其特征在于，所述SU-8模具为一长度为12mm，宽度为300μm，厚度为150μm的矩形板。4....

【专利技术属性】
技术研发人员：杨文婷，曹臻，陈亮，
申请(专利权)人：江苏医联生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：江苏,32