The invention discloses an affinity chromatography medium suitable for antibody purification and its application. The affinity chromatography medium provided by the invention comprises a solid phase carrier and an amino acid sequence coupled with the solid phase carrier such as the recombinant protein A shown in SEQ ID NO:1. The affinity chromatography medium provided by the invention has strong protein binding specificity and high affinity, and is very suitable for the separation and purification of antibodies.
【技术实现步骤摘要】
一种适于抗体纯化的亲和层析介质及应用
本专利技术属于生物
，具体地说涉及一种亲和层析介质及应用。
技术介绍
葡萄球菌蛋白A(StaphylococcusaureusproteinA，SPA，蛋白A)为金黄色葡萄球菌细胞壁相关蛋白，为单链多肽结构，具有与人类和其它哺乳动物血液中免疫球蛋白分子的Fc段特异性结合的能力，主要吸附IgG和含IgG的免疫复合物。1940年，Vevwey发现在某些金黄色葡萄球菌中，含有一种物质，在双向扩散试验中，能与正常人血清形成沉淀。1959年，Jensen也发现了类似的现象，将其命名为A抗原。1960年Grov将其命名为葡萄球菌蛋白A，简称SPA蛋白A，1963年Lofkvist等分离了A抗原，并证明它是一种蛋白质。由于SPA具有吸附蛋白的特性，蛋白A制备的亲和层析柱已成为生物
广泛应用的纯化抗体的亲和柱，通常在制备蛋白A亲和层析介质时，所用到的环氧氯丙烷活化琼脂糖都以水为反应介质，环氧氯丙烷在水中的溶解度约为6.58％左右，因此该反应是一个复杂的油(环氧氯丙烷)-水-固(凝胶)三相反应体系，反应速率较慢；同时环氧化过程中环氧...
【技术保护点】
1.一种重组蛋白A，其特征在于，所述蛋白A的氨基酸序列如SEQ ID NO：1所示。
【技术特征摘要】
1.一种重组蛋白A，其特征在于，所述蛋白A的氨基酸序列如SEQIDNO：1所示。2.一种亲和层析介质，其特征在于，所述亲和层析介质包含上述权利要求1所述的重组蛋白A和固相载体，所述固相载体与重组蛋白A偶联。3.根据权利要求2所述的亲和层析介质，其特征在于，所述固相载体是琼脂糖凝胶、葡聚糖、纤维素、硅胶或带羟基的高分子聚合物。4.根据权利要求3所述的亲和层析介质，其特征在于，所述固相载体是琼脂糖或葡聚糖凝胶。5.一种制备权利要求1-4任一所述的亲和层析介质的方法，所述方法包括以下步骤：(1)通过化学合成的方法设计合成重组蛋白A基因单体，5‘端Ala-Asp突变成Asn-Val，以形成AclI酶切位点，各重组蛋白A基因单体间以AclI酶切位点相连，第一个重组蛋白A基因单体前端加入与表达载体相连的NcoI酶切位点，6个His和EK酶切位点，最后一个重组蛋白A基因单体末端加入中止密码子TAA和与表达载体pET32a相连的BamHI酶切位点；(2)将步骤(1)的重组蛋白A基因单体酶切后接入载体pET32a的相应酶切位点之间，再以AclI内切酶酶切，筛选具有氨苄青霉素抗性的转...
【专利技术属性】
技术研发人员：黎健荣，张彦，胡湘丽，路玲玉，耿妍，
申请(专利权)人：三生国健药业上海股份有限公司，
类型：发明
国别省市：上海,31
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