一种基于顶端分生组织转分化的林木芽再生方法技术

本发明专利技术公开了一种基于顶端分生组织转分化的林木芽再生方法，包括以下步骤：(1)取林木组培苗的根为外植体，将外植体在含有生长素NAA的B5培养基中培养20‑26h；(2)将步骤(1)培养后的外植体转入含有细胞分裂素2‑IP的B5培养基中培养10‑14天；(3)将步骤(2)培养后的外植体转入含有细胞分裂素6‑BA的MS培养基中培养14‑18天，获得再生芽。本发明专利技术的林木芽再生方法不经过愈伤组织阶段直接形成茎端分生组织，从而产生再生芽，因此适用于建立研究植物细胞命运决定、谱系转变等科学问题的实验体系，适用于难以形成具有再生能力愈伤组织的物种建立芽再生体系，进而进行离体快繁、遗传转化或其他生物技术操作。

A method of bud regeneration based on apical meristem transdifferentiation

The invention discloses a method of forest bud regeneration based on apical meristem transdifferentiation, which comprises the following steps: (1) taking the roots of tissue-cultured seedlings of trees as explants, and culturing explants in B5 medium containing auxin NAA for 20 26h; (2) transferring the cultured explants into B5 medium containing cytokinin 2 IP for 10 14 days; (3) taking the roots of tissue-cultured seedlings as explants; (2) culturing the explants after culturing. The plantlets were transferred into MS medium containing cytokinin 6 BA for 14 18 days and regenerated buds were obtained. The method of bud regeneration of the present invention can directly form meristem at the stem end without the callus stage, thus producing regenerated buds. Therefore, it is suitable for establishing an experimental system for studying scientific problems such as fate determination of plant cells, genealogical transformation, etc., and for establishing a bud regeneration system for species that are difficult to form regenerative callus, and then for in vitro rapid propagation, genetic transformation or other purposes. Biotechnology operation.

【技术实现步骤摘要】
一种基于顶端分生组织转分化的林木芽再生方法
本专利技术涉及植物再生
，具体涉及一种基于顶端分生组织转分化的林木芽再生方法。
技术介绍
被子植物的茎端分生组织位于茎的顶端，呈突起的穹顶结构，其细胞分裂和分化活动形成了整个地上部分。根据其内部细胞的结构特征可以将茎端分生组织分为三个不同的区域，即中心区域、周围区域和肋状区域(Meyerowitz,Cell,1997,88,299-308)。中心区域处在穹顶顶端的中心位置，包含一团分裂较慢的多能干细胞。干细胞分裂产生的子代细胞一方面进入四周毗邻的周围区域，参与包括花、叶在内的侧生器官的分化；另一方向下进入肋状区域，分化成茎的组成部分(Soyarsetal.,CurrOpinPlantBiol2016,29,163-168)。干细胞下方有一团被称为组织中心的细胞，发挥了调控干细胞维持的作用。茎端分生组织受到严密而精确的分子遗传调控，关键基因的时空特异性表达、细胞分裂与分化的动态平衡共同维持其特定的结构和功能(Aichingeretal.,AnnuRevPlantBiol,2012,63,615-636)。在离体培养条件下，成熟的组织器官本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种基于顶端分生组织转分化的林木芽再生方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)取林木组培苗的根为外植体，将外植体在含有生长素NAA的B5培养基中培养20‑26h；(2)将步骤(1)培养后的外植体转入含有细胞分裂素2‑IP的B5培养基中培养10‑14天；(3)将步骤(2)培养后的外植体转入含有细胞分裂素6‑BA的MS培养基中培养14‑18天，获得再生芽。

【技术特征摘要】
1.一种基于顶端分生组织转分化的林木芽再生方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)取林木组培苗的根为外植体，将外植体在含有生长素NAA的B5培养基中培养20-26h；(2)将步骤(1)培养后的外植体转入含有细胞分裂素2-IP的B5培养基中培养10-14天；(3)将步骤(2)培养后的外植体转入含有细胞分裂素6-BA的MS培养基中培养14-18天，获得再生芽。2.根据权利要求1所述的林木芽再生方法，其特征在于，步骤(1)中，取林木组培苗的根，从根的近端起截取长度为2-4cm的根段作为外植体；优选的，从根的近端起截取长度为2cm的根段作为外植体。3.根据权利要求1所述的林木芽再生方法，其特征在于，步骤(1)中，所述林木组培苗由如下方法制备而成：1)选取林木枝条及叶片，依次用体积分数为75％的乙醇溶液、无菌水、氧化汞溶液和无菌水浸泡处理；2)吸干步骤1)处理后的林木枝条及叶片表面的水，移入分化培养基中，置于25℃光照培养箱中进行培养；3)培养至再生芽长度为2-3cm时，切下再生芽并移入生根培养基中，在光照周期为光照16h/黑暗8h、25℃条件下进行生根培养，获得组培苗。4.根据权利要求3所述的林木芽再生方法，其特征在于，步骤2)中，所述分化培养基为含有0.002mg/LTDZ、0.5mg/L6-BA和...

【专利技术属性】
技术研发人员：桑亚林，张宪省，程志娟，费芳芳，左芸，孟文静，
申请(专利权)人：山东农业大学，
类型：发明
国别省市：山东,37