细菌制造技术

本发明专利技术涉及能够结合至A、B和/或O血型抗原或是酸和/或胆汁耐受性的细菌或其代谢物，其在益生菌组合物和食物产品中的用途及其选择方法。本发明专利技术还涉及所述细菌和代谢物用于预防和/或治疗胃肠道疾病的用途。

Bacteria

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】细菌
本专利技术涉及新颖细菌及其代谢物，其在益生菌组合物和食物产品中的用途、选择益生菌的方法以及个性化益生菌组合物或食物产品的方法。本专利技术还涉及所述细菌、代谢物和组合物用于预防和/或治疗胃肠道疾病的用途。
技术介绍
人体被无数的微生物所定殖，这些微生物代表了超过1000种细菌物种。微生物群的组成和密度对每个身体部位都是特定的。大多数细菌生命体存在于胃肠道(GIT)中，特别是在大肠的肠腔中，其中存在两个群体，即肠腔和黏膜相关的群体，它们彼此之间存在差异。微生物群在人类健康中起着重要的作用。微生物群促进肠组织成熟、宿主营养、病原体耐受性、上皮细胞增殖、宿主能量代谢和免疫应答。GIT微生物群的组成和多样性的改变与若干疾病相关联，例如炎症性肠病(IBD)、肠易激综合征(IBS)、类风湿性关节炎、特应性湿疹、哮喘和1型糖尿病。成人的微生物群随着时间的推移是相当稳定的，且在个体中是独特的。同卵双胞胎中优势微生物群体的相似性高于无亲缘关系的受试者，说明宿主遗传因素对微生物群组成有影响。一些动物研究表明，主要组织相容性复合物参与肠道微生物群的遗传调节。然而，人们对究竟是哪些基因或其他因素决定或调节了微生物组成谱知之甚少。覆盖肠道上皮的黏膜层作为宿主防御的第一层起着重要的作用，但它也使肠微生物群与宿主之间能够发生接触。黏液主要由黏蛋白、含有蛋白质核心的大型糖蛋白和附着的低聚糖组成。尽管黏液层阻止了细菌与结肠上皮细胞的直接接触，但它为GIT细菌提供了黏附位点，因此在细菌定殖中起着重要作用。分泌的黏液除了为细菌提供黏附位点外，还提供了内源性底物。在碳水化合物来源有限的情况下，黏液可能是主要的营养来源。血型抗原附着在红细胞膜的各种成分上，在红细胞上表达的抗原决定个体的血型。主要的两种血型称为ABO(血型为A、B、AB和O)和Rh(血型为RhD-阳性或RhD-阴性)。ABO血型抗原在个体的分泌型(约占西方人群的80％)黏液中表达。ABO抗原的表达是位点特异性的。例如，在GIT中，包括ABO血型抗原在内的岩藻糖多糖的表达向肠的远部减少。一些微生物，例如幽门螺杆菌和一些其他致病菌和病毒，已经被证明使用ABO血型抗原作为黏附受体(Boren等人1993，Imberty和Varrot2008)。ABO抗原结合能力也被报道用于乳杆菌属物种，后者倾向于以菌株特定的方式黏附(Uchida等人2006)。例如，双歧杆菌和多形拟杆菌也能够特异性利用血型抗原，例如ABO抗原的多糖结构(Martens等人2008、Xiao等人2010)。个体ABO血型的状态也会影响宿主微生物群的相对比例(等人2012)。许多目前可商购的益生菌补充剂和微生物群调节产品对于在促进每个个体所希望的健康效果方面是无效的，而且效果通常因人而异。因此，对能够更有效地介导健康效果的更具特异性的或个人定制的产品存在持续需求。
技术实现思路
本专利技术基于专利技术人的以下惊人发现：某些菌株在体外对ABO血型抗原的一种或多种显示增强的黏附性。这一发现使选择ABO血型特异性细菌用于益生菌组合物并治疗或预防胃肠道疾病成为可能。尽管不希望受理论的束缚，据信由于ABO血型的多糖结构在黏膜中很丰富，并作为细菌黏附位点和营养来源，所以益生菌与一种或多种ABO抗原的更强的结合将通过增强所述益生菌与黏膜的相互作用改善其在胃肠道的定殖。益生菌还可以显示出通过阻断某些也与ABO抗原结合的致病微生物的黏附和侵袭而增强的健康效果。附着在ABO抗原上的益生菌还可以通过提供宿主细胞与益生菌之间更紧密和更持久的接触来增强益生菌的应答。当益生菌定殖得更紧密且更持久时，可进一步使宿主更容易获得益生菌产生的任何有益代谢物。诸位专利技术人进一步证明某些益生菌对酸和/或胆汁有更强的耐受性。这些特性可能有助于细菌或其代谢物在胃和胃肠道的条件下生存，因此是对益生菌有利的特性。如果该菌株在酸奶等产品中发酵，那么酸耐受性也可能是有益的。因此，本专利技术提供了一种细菌或其代谢物，其特征在于：a)与卷曲乳杆菌LMG18199相比，A抗原的平均黏附率超过100％；和/或b)与卷曲乳杆菌LMG18199相比，B抗原的平均黏附率超过100％；和/或c)与卷曲乳杆菌LMG18199相比，O抗原的平均黏附率超过100％；和/或d)如在酸耐受性测定中定义的，当在pH2.5测量1.5小时时，以对数变化表示的平均酸耐受性大于-2.6；和/或e)如在胆汁耐受性测定中定义的，以在0.9％脱水新鲜胆汁中的生长与无胆汁MRS中的生长的百分比表示的平均胆汁耐受性超过40％。本专利技术的细菌能以DSM32111、DSM32108、DSM32107、DSM32098、DSM32104、DSM32112、DSM32109、DSM32105、DSM32110、DSM32103、DSM32099、DSM32106、DSM32097、DSM32114、DSM32115或其突变体、变体和/或子代保藏。根据本专利技术的另一个方面，提供了一种益生菌组合物，该组合物包含根据本专利技术的细菌或其代谢物以及合适的载体。本专利技术的益生菌组合物可以包含根据本专利技术的2、3、4、5或6种细菌菌株或其代谢物的组合，任选地与一种或多种另外的细菌菌株组合。该益生菌组合物可进一步包含益生元组分。本专利技术还提供了生产本专利技术的益生菌组合物的方法，该方法包括将所选的细菌或其代谢物与合适的载体组合。本专利技术进一步提供了包含根据本专利技术的益生菌组合物的食物产品。根据本专利技术的另一个方面，提供了选择细菌或其代谢物的方法，该方法包括：a)将A抗原、B抗原、O抗原或其组合与一种或多种测试细菌混合；b)将A抗原、B抗原、O抗原或其组合与一种或多种罗伊氏乳杆菌RC-14对照细菌混合；c)孵育步骤a)和步骤b)的所述混合物；d)对比所述测试细菌和罗伊氏乳杆菌RC-14与所述A抗原、B抗原、O抗原或其组合的黏附亲和力；以及e)选择相比于罗伊氏乳杆菌RC-14与所述A抗原、B抗原、O抗原或其组合具有更高的黏附亲和力的细菌。在一个实施例中，步骤(b)中的混合物在单独小瓶中孵育。在另一个实施例中，该方法是基于荧光的方法。在另外的实施例中，选择如下细菌，所述细菌具有：a)A抗原的平均荧光黏附强度超过549；b)B抗原的平均荧光黏附强度超过519；和/或c)O抗原的平均荧光黏附强度超过746。本专利技术仅一步提供了通过本专利技术的方法选择的细菌或其代谢物。在另一方面，本专利技术提供了本专利技术的细菌或代谢物或通过本专利技术的方法选择的细菌或代谢物、或本专利技术的益生菌组合物用于制造预防和/或治疗胃肠道疾病的制剂的用途。本专利技术还提供了本专利技术的细菌或代谢物或通过本专利技术的方法选择的细菌或代谢物、或本专利技术的益生菌组合物，用于预防和/或治疗胃肠道疾病。在另一个方面，本专利技术提供了预防和/或治疗胃肠道疾病的方法，该方法包括给予受试者药学有效量的根据本专利技术的细菌或其代谢物或通过本专利技术的方法选择的细菌或其代谢物，或本专利技术的益生菌组合物。具体实施方式除非另外定义，本文所用的全部技术术语和科学术语具有与本公开所属领域的普通技术人员通常所理解的相同意义。Singleton等人，DICTIONARYOFMICROBIOLOGYANDMOLECULARBIOLOGY[微生物学和分子生物学词典]，第20版，JohnW本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种细菌或其代谢物，其特征在于：a)与卷曲乳杆菌(L.crispatus)LMG18199相比，A抗原的平均黏附率超过100％；和/或b)与卷曲乳杆菌LMG18199相比，B抗原的平均黏附率超过100％；和/或c)与卷曲乳杆菌LMG18199相比，O抗原的平均黏附率超过100％和/或d)如在酸耐受性测定中定义的，当在pH 2.5测量1.5小时时，以对数变化表示的平均酸耐受性大于‑2.6；和/或e)如在胆汁耐受性测定中定义的，以在0.9％脱水新鲜胆汁中的生长与无胆汁MRS中的生长的百分比表示的平均胆汁耐受性超过40％。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2016.09.16 EP 16189291.41.一种细菌或其代谢物，其特征在于：a)与卷曲乳杆菌(L.crispatus)LMG18199相比，A抗原的平均黏附率超过100％；和/或b)与卷曲乳杆菌LMG18199相比，B抗原的平均黏附率超过100％；和/或c)与卷曲乳杆菌LMG18199相比，O抗原的平均黏附率超过100％和/或d)如在酸耐受性测定中定义的，当在pH2.5测量1.5小时时，以对数变化表示的平均酸耐受性大于-2.6；和/或e)如在胆汁耐受性测定中定义的，以在0.9％脱水新鲜胆汁中的生长与无胆汁MRS中的生长的百分比表示的平均胆汁耐受性超过40％。2.根据权利要求1所述的细菌，其中所述细菌保藏为DSM32111、DSM32108、DSM32107、DSM32098、DSM32104、DSM32112、DSM32109、DSM32105、DSM32110、DSM32103、DSM32099、DSM32106、DSM32097、DSM32114、DSM32115或其突变体、变体和/或子代。3.一种益生菌组合物，其包含根据权利要求1或2中所述的细菌或其代谢物，以及合适的载体。4.根据权利要求3所述的益生菌组合物，其包含2、3、4、5或6种如在权利要求1或2中定义的细菌菌株或其代谢物的组合，任选地与一种或多种另外的菌株组合。5.根据权利要求4所述的益生菌组合物，其中所述一种或多种另外的细菌菌株选自：嗜酸乳杆菌(Lactobacillusacidophilus)NCFM；乳酸双歧杆菌(Bifidobacteriumlactis)BL-04；副干酪乳杆菌(Lactobacillusparacasei)LPC37；乳酸双歧杆菌HN019、和/或乳酸双歧杆菌Bi-07。6.根据权利要求5所述的益生菌组合物，其包含DSM32109、嗜酸乳杆菌NCFM；乳酸双歧杆菌BL-04；副干酪乳杆菌LPC37；乳酸双歧杆菌HN019、和乳酸双歧杆菌Bi-07。7.一种生产根据权利要求3至6中任一项所述的益生菌组合物的方法，该方法包...

【专利技术属性】
技术研发人员：H普塔拉，S佛斯坦，S拉丁嫩，A乌维汉，J马托，H马基乌科，J尼基拉，
申请(专利权)人：杜邦营养生物科学有限公司，
类型：发明
国别省市：丹麦,DK