作为前列腺癌检测生物标志物的尿多胺制造技术

提供了使用镧系配合物或DNA加帽的金纳米颗粒检测并量化尿多胺的新的高灵敏度、高特异性的方法。

Urinary polyamines as a biomarker for prostate cancer detection

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】作为前列腺癌检测生物标志物的尿多胺对相关申请的交叉引用本申请要求2016年10月17日提交的美国临时专利申请序列号62/409,361和2017年3月16日提交的美国临时专利申请序列号62/471,989的优先权，其公开内容通过引用并入。
本公开涉及用于检测和量化尿多胺的方法和用于其中的组合物。本文所述的方法和组合物可用于诊断患者的前列腺癌。
技术介绍
前列腺癌(PCa)是男性中第二大常见癌症，并且是死亡的主要原因之一，其在包括许多西欧国家和美国在内的许多发达国家中造成了重大的公共卫生影响。PCa是一种在全世界范围内越来越具有重要意义的疾病。香港在这个公共卫生问题上也不例外。根据香港特别行政区(HKSAR)医院管理局的香港癌症资料统计中心的统计数据，PCa在男性最常见的癌症中排名第3，在致命最严重的癌症中排名第5。鉴于早期可治疗PCa的潜伏期及其晚期可辨别阶段的致死性，迫切需要更加灵敏、精确的诊断方法来检测早期PCa，从而可以显著改善治疗效果，同时挽救更多生命。目前对PCa的诊断依赖于直肠指检(DRE)和血清前列腺特异性抗原(PSA)测试，随后进行经直肠超声前列腺活检(TRUSPB)确认。虽然DRE是一个简单的程序，但它会给患者带来不适。DRE也是一项对研究者依赖性强的技术，导致PCa诊断的精确性较差。特别是，DRE不是用于PCa早期检测的好工具，因为大多数DRE阳性PCa结果都是晚分期的。虽然PSA测试在检测早期PCa方面表现出良好的灵敏性，但在患有良性前列腺增生(BPH)和前列腺炎等患者中也观察到PSA水平升高，这降低了PSA对PCa的特异性。在PSA测试的灰色区域内，阳性预测值的平均值较小，为21％。已经开发了多种PSA方法，例如移行区的PSA密度、游离/总PSA比、p2PSA和前列腺健康指数，以提高PSA测量的性能。经直肠超声引导的前列腺活检(TRUSPB)是目前最常见的用于组织学确认PCa诊断的诊断方法。然而，该手术非常耗费人力并且导致患者的明显不适和并发症。由于血清PSA测试的特异性较差，许多未患有PCa的患者会进行TRUSPB，从而遭受其潜在的并发症。因此，必须开发一种更有效的检测试剂盒，用于对PCa进行精确早期筛查。本公开的目的是提供用于诊断患者的PCa的方法，包括检测一种或多种尿多胺(例如，腐胺(Put)、亚精胺(Spd)和/或精胺(Spm))。尿多胺可用作PCa检测的生物标志物。通过比较诊断为PCa的患者、诊断为良性前列腺增生(BPH)的患者和健康对照(HC)的尿多胺浓度来确定尿多胺的诊断能力。本文还提供了用于检测和量化患者中尿多胺的量的组合物和方法。专利技术概述因此，本公开的目的是通过使用镧系配合物或AuNP开发新的高灵敏性和特异性的变色多胺示踪剂，并检查来自不同年龄组和前列腺癌阶段的患者的平均多胺尿浓度，以验证多胺作为早期前列腺癌筛查的值得信赖的生物标志物。在本公开的第一方面，提供了式(1)的化合物：其中，Ln是镧系金属；且每个M都独立地选自Na、Li和K；或两个M一起表示Mg或Ca。在本公开第一方面的第一实施方案中，提供了式(1)的化合物，其中镧系元素是铕。在本公开第一方面的第二实施方案中，提供了式(1)的化合物，其中M是Li。在本公开的第二方面，提供了检测一种或多种尿多胺的方法，包括以下步骤：a.提供尿样；b.使尿样与式(1)的化合物接触，从而形成测试样品；以及c.检测测试样品中一种或多种尿多胺的存在。在本公开第二方面的第一实施方案中，提供了一种方法，其中从人获得尿样。在本公开第二方面的第二实施方案中，提供了一种方法，其中从人获得尿样，并且一种或多种尿多胺的浓度用于确定人是否患有前列腺癌。在本公开的第三方面，提供了检测一种或多种尿多胺的方法，包括以下步骤：d.提供尿样；e.使尿样与包含金纳米颗粒和至少两种配体的纳米颗粒接触，从而形成测试样品，所述至少两种配体包含柠檬酸盐和单链DNA，其中单链DNA与金纳米颗粒的摩尔比为约4:1至约3:1；f.检测测试样品中一种或多种尿多胺的存在。在本公开第三方面的第一实施方案中，提供了一种方法，其中单链DNA与金纳米颗粒的摩尔比为约3.2:1至约3.0:1。在本公开第三方面的第二实施方案中，提供了一种方法，其中单链DNA与金纳米颗粒的摩尔比为约3.2:1至约3.0:1，且纳米颗粒的平均直径为约1nm至约100nm。在本公开第三方面的第三实施方案中，提供了一种方法，其中单链DNA与金纳米颗粒的摩尔比为约3.2:1至约3.0:1，且纳米颗粒的平均直径为约2nm至约10nm。在本公开第三方面的第四实施方案中，提供了一种方法，其中单链DNA具有约5至约50个核苷酸。在本公开第三方面的第五实施方案中，提供了一种方法，其中在使尿样与纳米颗粒接触的步骤之前，已经使尿样经历了纯化步骤，以除去蛋白质或盐。在本公开第三方面的第六实施方案中，提供了一种方法，其中在检测一种或多种尿多胺的存在的步骤中测试样品的pH为约2至约8。在本公开第三方面的第七实施方案中，提供了一种方法，其中检测一种或多种尿多胺的存在的步骤还包括测定一种或多种尿多胺的浓度。在本公开第三方面的第八实施方案中，提供了一种方法，其中检测一种或多种尿多胺的存在的步骤还包括测定一种或多种尿多胺的浓度，且确定浓度的步骤包括将测试样品的颜色与参考比色图表进行视觉比较或光谱方法。在本公开第三方面的第九实施方案中，提供了一种方法，其中从人获得尿样。在本公开第三方面的第十实施方案中，提供了一种方法，其中一种或多种尿多胺的浓度用来确定人是否患有前列腺癌。在本公开第三方面的第十一实施方案中，提供了一种方法，其中，在测试样品中，单链DNA的浓度为约200nM至约300nM，并且金纳米颗粒的浓度为约50nM至约100nM。在本公开第三方面的第十二实施方案中，提供了一种方法，其中在测试样品中，单链DNA的浓度为约240nM至约260nM，并且金纳米颗粒的浓度为约75nM至约87nM。在本公开的第四方面，提供了包含纳米颗粒和用于实施第三方面的方法的说明书的试剂盒，其中纳米颗粒包含金纳米颗粒和至少两种配体，所述至少两种配体包含柠檬酸盐和单链DNA，其中单链DNA与金纳米颗粒的摩尔比为约4:1至约3:1。本领域技术人员应当理解，除了具体描述的那些之外，本文描述的专利技术可进行变化和修改。本专利技术包括所有这样的变化和修改。本专利技术还包括本说明书单独或共同提及或指出的所有步骤和特征，以及所述步骤或特征的任何和所有组合或任何两个或更多个所述步骤或特征。通过审阅随后的描述，本专利技术的其他方面和优点对于本领域技术人员而言将是显而易见的。附图简要说明通过以下对本文描述的各种实施方案的描述，结合附图，本公开的上述目的和特征以及其他目的和特征将变得显而易见，在所述附图中：图1显示了1000ppb混合多胺标准品的重叠UPLC-MS/MSSRM的色谱图(显示了0-10min(分钟))。Put(大峰，tR＝4.3min)、Put-d8(小峰，tR＝4.3min)、Spd(大峰，tR＝6.6min)、Spd-d8(小峰，tR＝6.6min)、Spm(大峰，tR＝7.8min)和Spm-d8(小峰，tR＝7.8min)。图2A显示了PCa、BPH以及本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种式(1)的化合物：

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2016.10.17 US 62/409,361;2017.03.16 US 62/471,989;1.一种式(1)的化合物：其中，Ln是镧系金属；且每个M独立地选自由以下各项组成的组：Na、Li和K；或两个M一起表示Mg或Ca。2.根据权利要求1所述的化合物，其中所述镧系元素是铕。3.根据权利要求1所述的化合物，其中M是Li。4.一种检测一种或多种尿多胺的方法，所述方法包括以下步骤：a.提供尿样；b.使所述尿样与权利要求1所述的化合物接触，从而形成测试样品；和c.检测所述测试样品中一种或多种尿多胺的存在。5.根据权利要求4所述的方法，其中从人获得所述尿样。6.根据权利要求5所述的方法，其中所述一种或多种尿多胺的浓度被用于确定所述人是否患有前列腺癌。7.一种检测一种或多种尿多胺的方法，所述方法包括以下步骤：a.提供尿样；b.使所述尿样与纳米颗粒接触，从而形成测试样品，其中所述纳米颗粒包含金纳米颗粒和至少两种包含柠檬酸盐和单链DNA的配体，其中单链DNA与金纳米颗粒的摩尔比为约4:1至约3:1；c.检测所述测试样品中一种或多种尿多胺的存在。8.根据权利要求7所述的方法，其中所述单链DNA与所述金纳米颗粒的摩尔比为约3.2:1至约3.0:1。9.根据权利要求8所述的方法，其中所述纳米颗粒的平均直径为约1nm至约100nm。10.根据权利要求8...

【专利技术属性】
技术研发人员：黄嘉良，
申请(专利权)人：新生命医药科技有限公司，
类型：发明
国别省市：中国香港,81