人尿液中游离儿茶酚胺及其代谢物的高效液相色谱串联质谱检测方法技术

本发明专利技术公开了一种人尿液中游离儿茶酚胺及其代谢物的高效液相色谱串联质谱检测方法，包括如下步骤：(1)样品预处理，尿液样品依次加入内标工作液和磷酸溶液，涡旋混合；(2)弱阳离子交换固相萃取96孔板(SPE96孔板)活化；(3)固相萃取处理，步骤(1)处理后样品上样至步骤(2)活化后的SPE 96孔板，甲酸甲醇溶液洗脱，洗脱液用氮气吹干；(4)复溶，高效液相色谱串联质谱法进行分析检测。本发明专利技术方法具有高准确度、高重现性、高灵敏度、高专属性、高效率、高通量、低成本、操作简便快速等优点。

Determination of free catecholamines and their metabolites in human urine by high performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry

The invention discloses a method for detecting free catecholamines and their metabolites in human urine by high performance liquid chromatography tandem mass spectrometry, which comprises the following steps: (1) sample pretreatment, urine samples are added into internal standard working fluid and phosphoric acid solution in turn, and mixed by vortices; (2) weak cation exchange solid phase extraction 96-well plate (SPE96-well plate) activation; (3) solid phase extraction treatment, step (1) sample loading after treatment. To step (2) after activation, SPE 96-well plate was eluted with methanol formate solution, and the eluent was dried with nitrogen; (4) Re-dissolution was analyzed by high performance liquid chromatography tandem mass spectrometry. The method has the advantages of high accuracy, high reproducibility, high sensitivity, high specificity, high efficiency, high throughput, low cost, simple and fast operation, etc.

【技术实现步骤摘要】
人尿液中游离儿茶酚胺及其代谢物的高效液相色谱串联质谱检测方法
本专利技术涉及分析检测
，特别涉及一种高准确度、高重现性、高灵敏度、高专属性、高效率、高通量、低成本、操作简便快速的人尿液中游离儿茶酚胺及其代谢物的高效液相色谱串联质谱检测方法。
技术介绍
儿茶酚胺即有邻苯二酚(即儿茶酚)的胺类化合物，包括多巴胺、去甲肾上腺素，肾上腺素及它们的衍生物。去甲肾上腺素和肾上腺素既是肾上腺髓质所分泌的激素，又是交感神经和中枢神经系统中去甲肾上腺素能纤维的神经介质。去甲肾上腺素在中枢神经系统内分布广泛，含量较多，而肾上腺素含量则较少。多巴胺主要集中在锥体外系部位，也是一种神经介质。以上儿茶酚胺类物质都是重要的典型肾上腺素受体激动剂。儿茶酚胺类物质在体内调节基本生理功能，传递生理信号，是正常生理过程中重要的信号介质，同时在病理过程中其含量也会出现明显的变化。因此它们可以用于临床辅助诊断高血压、甲亢、嗜铬细胞瘤和神经母细胞瘤等内分泌相关疾病，其代谢物甲氧基肾上腺素(MN)以及甲氧基去甲肾上腺素(NMN)对诊断嗜铬细胞瘤和神经母细胞瘤有极高的敏感度与准确度，是内分泌指南推荐的首选检测指标。血检和尿本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.人尿液中游离儿茶酚胺及其代谢物的高效液相色谱串联质谱检测方法，其特征在于，包含人尿液中游离去甲肾上腺素(NE)、肾上腺素(E)、多巴胺(DA)、甲氧基去甲肾上腺素(NMN)以及甲氧基肾上腺素(MN)的高效液相色谱串联质谱检测方法，包括以下步骤：(1)样本预处理：取100～500μL人尿液，依次加入10～50μL内标工作液和0.1～1mL磷酸溶液，涡旋混匀；(2)SPE96孔板活化：取弱阳离子交换固相萃取96孔板，依次加入1mL甲醇与水，待其自然流干；(3)固相萃取：将步骤(1)处理后的样品转移到步骤(2)活化后的SPE96孔板上，用氮气正压装置压干，依次加入0.1～1mL水与甲醇进行淋洗；...

【技术特征摘要】
1.人尿液中游离儿茶酚胺及其代谢物的高效液相色谱串联质谱检测方法，其特征在于，包含人尿液中游离去甲肾上腺素(NE)、肾上腺素(E)、多巴胺(DA)、甲氧基去甲肾上腺素(NMN)以及甲氧基肾上腺素(MN)的高效液相色谱串联质谱检测方法，包括以下步骤：(1)样本预处理：取100～500μL人尿液，依次加入10～50μL内标工作液和0.1～1mL磷酸溶液，涡旋混匀；(2)SPE96孔板活化：取弱阳离子交换固相萃取96孔板，依次加入1mL甲醇与水，待其自然流干；(3)固相萃取：将步骤(1)处理后的样品转移到步骤(2)活化后的SPE96孔板上，用氮气正压装置压干，依次加入0.1～1mL水与甲醇进行淋洗；再加入0.5～2mL2％甲酸甲醇溶液洗脱，用96孔接收板收集洗脱液，通25～60℃氮气直至干燥；(4)将步骤(3)得到的残渣，进一步用50～200μL复溶液复溶，涡旋使充分溶解，上高效液相色谱串联质谱系统进样5～50μL分析检测。2.根据权利要求1所述的人尿液中游离儿茶酚胺及其代谢物的高效液相色谱串联质谱检测方法，其特征在于，所述步骤(1)中内标工作液的配置方法如下：精密称取5种内标标准品，用0.5％焦亚硫酸钠溶液溶解得到1mg/mL的氘代去甲肾上腺素(NE-d6)、氘代肾上腺素(E-d3)、氘代多巴胺(DA-d4)、氘代甲氧基去甲肾上腺素(NMN-d3)以及氘代甲氧基肾上腺素(MN-d3)的内标储备液，然后用0.1％甲酸溶液进一步稀释混合得到NE-d6浓度为5μg/mL、E-d3浓度为500ng/mL、DA-d4浓度为200ng/mL、NMN-d3浓度为250ng/mL，MN-d3浓度为100ng/mL的内标工作液。3.根据权利要求1所述的人尿液中游离儿茶酚胺及其代谢物的高效液相色谱串联质谱检测方法，其特征在于，所述步骤(1)中磷酸溶液质量比浓度为1～10％。4.根据权利要求1所述的人尿液中游离儿茶酚胺及其代谢物的高效液相色谱串联质谱检测方法，其特征在于，所述步骤(1)中当检测项目包含甲氧基去甲肾上腺素(NMN)以及甲氧基肾上腺素(MN)时，步骤(1)还包括加入磷酸溶液后加热10～60分钟的操作。5.根据权利要求1所述的人尿液中游离儿茶酚胺及其代谢物的高效液相色谱串联质谱检测方法，其特征在于，所述步骤(4)中的复溶溶液为甲酸和醋酸铵溶液的混合物，其体积比为1:1000；其中醋酸铵溶液的浓度为5mmol/L。6.根据权利要求1所述的人尿液中游离儿茶酚胺及其代谢物的高效液相色谱串联质谱检测方法，其特征在于，所述步骤(4)所述的高效液相色谱串联质谱为...

【专利技术属性】
技术研发人员：马金飞，冯加翼，康洲阳，刘华芬，
申请(专利权)人：杭州凯莱谱精准医疗检测技术有限公司，
类型：发明
国别省市：浙江,33