观察细胞迁移极化分子分布的方法技术

本发明专利技术提出了一种观察细胞迁移极化分子分布的方法，细胞可在特定趋化物的作用下定向运动，可用于对不同细胞在特定趋化物作用下的趋化运动观察，并基于此对细胞迁移极化中的特定子分布进行观察；另外，本发明专利技术中细胞迁移过程排除自身重力因素影响，可对细胞迁移极化过程及相关极化分子进行观察。

A Method for Observing the Distribution of Polarized Molecules in Cell Migration

The present invention provides a method for observing the distribution of polarized molecules in cell migration. Cells can move directionally under the action of specific chemoattractants, and can be used for observing the chemotaxis of different cells under the action of specific chemoattractants. Based on this method, the distribution of specific molecules in cell migration polarization can be observed. The polarization process of cell migration and related polarization molecules were observed.

【技术实现步骤摘要】
观察细胞迁移极化分子分布的方法
：本专利技术涉及一种细胞实验用装置，特别是一种观察细胞迁移极化分子分布的方法。
技术介绍
：细胞迁移是细胞在接收到迁移信号，通过一系列的粘附去粘附的过程，在基质表面产生的细胞位移，是细胞运动的重要现象。细胞迁移过程中涉及到细胞骨架和其结合蛋白及细胞外基质蛋白的变化，在迁移信号浓度及细胞外基质密度的刺激下，细胞内外的信号分子和细胞骨架调节分子产生不对称的分布和/或激活，导致细胞骨架的形态、分布和细胞器的定位在即将发生迁移的方向上表现出前后不对称型，这一过程被称作迁移细胞的极性化。在极化过程中涉及多个信号通路和分子，而不同信号通路及分子的相互作用保证了细胞极化及迁移过程的正确完成。在细胞迁移极化过程中，这些细胞分子分布状态的改变，在细胞迁移过程中发挥了重要的作用。目前在细胞实验中，用于细胞运动迁移观察和测定的方法如细胞伤口愈合、Boyden小室、Transwell小室等模型已在细胞迁移研究中取得了显著的成果，然而，对于细胞运动迁移极化的观察，这些模型还存在其局限性。细胞伤口愈合类细胞迁移运动，现有的技术中通常采用物理划痕方式，对于细胞的迁移运动缺乏方向性，本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种观察细胞迁移极化过程中分子分布的方法，其特征在于：所述观察细胞迁移极化过程中分子分布的装置，包括：在圆形培养皿2中装有3ml琼脂糖1，在琼脂糖中有两个圆孔3，4，即为细胞用孔和趋化物用孔，在连接圆孔3，4之间的区域为观察细胞迁移的区域5；所述的观察细胞迁移极化过程中分子分布装置的制备方法，包括：（1）玻璃组织培养片的准备：利用100%甲醇清洗玻片并晾干，将干燥后的玻片放置于培养皿中，加入10%的胎牛血清FBS并于室温静置30分钟；去除FBS，使用PBS洗涤两遍；（2）配置A液：在50ml离心管内依次加入RPMI1640培养液18ml、胎牛血清2ml、含钙镁的10*HBSS2ml、无菌双...

【技术特征摘要】
1.一种观察细胞迁移极化过程中分子分布的方法，其特征在于：所述观察细胞迁移极化过程中分子分布的装置，包括：在圆形培养皿2中装有3ml琼脂糖1，在琼脂糖中有两个圆孔3，4，即为细胞用孔和趋化物用孔，在连接圆孔3，4之间的区域为观察细胞迁移的区域5；所述的观察细胞迁移极化过程中分子分布装置的制备方法，包括：（1）玻璃组织培养片的准备：利用100%甲醇清洗玻片并晾干，将干燥后的玻片放置于培养皿中，加入10%的胎牛血清FBS并于室温静置30分钟；去除FBS，使用PBS洗涤两遍；（2）配置A液：在50ml离心管内依次加入RPMI1640培养液18ml、胎牛血清2ml、含钙镁的10*HBSS2ml、无菌双蒸水8ml，充分混匀，置于68℃水浴箱中，水浴35分钟；（3）配置B液：50ml离心管称取0.48g低熔点超纯去热源琼脂糖，加入10ml无菌双蒸水，涡旋振荡器上剧烈震荡15秒，充分混匀；（4）配置A,B混合液：使用微波炉加热至B液沸腾，将A液移至B液中，充分混匀A、B液；（5）制作琼脂糖凝胶：吸取AB混合液3ml加入至含步骤（1）所述玻片的培养皿中，室温冷却1小时，再放置于4冰箱中冷却1小时，即为琼脂糖凝胶；（6）制作细胞及趋化用孔：在培养皿的琼脂糖凝胶上制作孔间距为2.4mm，孔径大小为3.5mm的小孔，使用负压吸引器吸除小孔内的凝胶室温静置30分钟，再次使用负压吸引器吸除小孔内的液体；两个小孔，左侧为细胞用孔，右侧为趋化物用孔；所述观察方法包括：（1）向上述制备的观察细胞迁移极化过程中分子分布的装置中分别加入细胞、趋化物：在右侧趋化物用孔中加入10ul的趋化物，浓度为0....

【专利技术属性】
技术研发人员：张志刚，秦魏婷，王旭，
申请(专利权)人：上海市肿瘤研究所，
类型：发明
国别省市：上海,31