组织或牛奶中快速诊断牛结核病的PCR检测试剂盒及其检测方法技术

本发明专利技术涉及兽医微生物学诊断技术领域，尤其是组织或牛奶中快速诊断牛结核病的PCR检测试剂盒及其检测方法。该试剂盒包括盒体，所述盒体内的试剂包括：含有PCR引物对、2倍的PCR核心试剂预混物、阳性对照、阴性对照、DL2000分子量标准溶液。本发明专利技术提供了一种组织或牛奶中快速诊断牛结核病的PCR检测试剂盒及其检测方法，通过选用经比对特异性的序列zlqG片段作为扩增目的片段，具有直接确诊的效果。本试剂盒选择特异性的扩增zlqG片段引物，并优化了退火温度和反应条件，具有灵敏度高、特异性强的优点，适合临床牛样本检测。

【技术实现步骤摘要】
组织或牛奶中快速诊断牛结核病的PCR检测试剂盒及其检测方法
本专利技术涉及兽医微生物学诊断
，尤其是组织或牛奶中快速诊断牛结核病的PCR检测试剂盒及其检测方法。
技术介绍
牛结核病(BovineTuberculosis)是以渐进性消瘦、咳嗽、多种组织器官形成干酪样坏死或钙化结节为特征，主要感染动物淋巴结和肺脏的一种人兽共患慢性肉芽肿性传染病。该病主要病原是牛分支杆菌，部分由结核分支杆菌(主要引起人结核病)引起，其他分支杆菌可感染但一般不致病。在基因组水平上，牛分支杆菌和结核分支杆菌同源性达到99.95％。患病奶牛是结核病的重要传染源，牛主要通过患病呼吸道分泌物和咳嗽所产生的气溶胶感染；人则主要通过食用未经高温处理病牛的奶肉或牛奶感染。而屠宰场的检疫是防治感染牛肉进入市场的最后环节，是防止该病及其畜产品扩散、蔓延最后的关口。因此对疑似患病牛的牛奶或屠宰组织样品快速检验确诊，具有非常重要的公共卫生意义。当前，牛结核病的防控主要采取“检疫-淘汰”方法。国内外用于诊断牛结核病的检测方法,大体上可分为三大类。第一类是细菌学检查法,如涂片镜检、细菌培养及生化实验等。抗酸染色敏感性差，检出率本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种组织或牛奶中快速诊断牛结核病的PCR检测试剂盒，包括盒体，其特征是，所述盒体内的试剂包括：含有PCR引物对、2倍的PCR核心试剂预混物、阳性对照、阴性对照、DL2000分子量标准溶液。

【技术特征摘要】
1.一种组织或牛奶中快速诊断牛结核病的PCR检测试剂盒，包括盒体，其特征是，所述盒体内的试剂包括：含有PCR引物对、2倍的PCR核心试剂预混物、阳性对照、阴性对照、DL2000分子量标准溶液。2.根据权利要求1所述的组织或牛奶中快速诊断牛结核病的PCR检测试剂盒，其特征在于：所述含有PCR引物对的引物序列为：5’-ATGGCACACGGCAACGTCAG-3’；5’-AGTCAAACAGTGCAACAGGCG-3’。3.根据权利要求1所述的组织或牛奶中快速诊断牛结核病的PCR检测试剂盒，其特征在于：所述含有PCR引物对的工作浓度为10pmol/μL。4.根据权利要求1所述的组织或牛奶中快速诊断牛结核病的PCR检测试剂盒，其特征在于：所述阳性对照为牛结核参考菌株CVCC68001基因组DNA，阴性对照为ddH2O。5.根据权利要求1-4中任一项所述的组织或牛奶中快速诊断牛结核病的PCR检测试剂盒的检测方法，其特征在于：包括以下步骤：a.取牛身上的病变组织，组织包括肝、脾、肺、肠，将取下的病变组织上的脂肪、被膜剔除后剪碎；b.将柠檬酸钠-磷酸缓冲液与剪碎的病变组织按照比例混合后，按每1g病变组织加入5mL柠檬酸钠-磷酸缓冲液进行研磨；c.再在上述组织研磨液上加入浓度为4％的NaOH溶液，NaOH溶液与步骤b中研磨后的物质等量，继续研磨或作用5min～10min，使病变组织液化；d.将液化的病变组织移入离心管振荡混匀，75℃温浴0.5h～1h之后取出上清液，然后将液化的病变组织以15000g离心10min，弃上清液；e.取组织沉淀后，加入与上清液等量的0.01mol/LpH7.6PBS，悬浮并再次振荡混匀，随后混匀液以15000g离心1...

【专利技术属性】
技术研发人员：朱良全，丁家波，张春燕，许冠龙，秦玉明，杨劲松，冯宇，蒋卉，彭小薇，范学政，沈青春，
申请(专利权)人：中国兽医药品监察所，
类型：发明
国别省市：北京,11