一种抗尿液成分干扰的单羟酚类物质尿检试剂盒及其制备方法、操作方法和应用技术

本发明专利技术涉及一种抗尿液成分干扰的单羟酚类物质尿检试剂盒及其制备方法、操作方法和应用，属于生物医学检验领域。本发明专利技术的试剂盒，由主瓶(安瓿瓶)试剂和副瓶(塑料瓶)试剂构成，其中：所述主瓶试剂由汞、浓硝酸、硫酸铜和蒸馏水为原料制得，所述副瓶试剂由亚硝酸钠和蒸馏水组成。本发明专利技术的试剂盒是以汞、浓硝酸、硫酸铜和亚硝酸钠为原料，经化学反应和溶液配制而成。本发明专利技术的尿检试剂盒具有抵抗临床尿样成分物质尿素和蛋白质干扰的功能，稳定性高，且显色反应时间短，显色灵敏度高，使尿检试剂对各种临床尿样的适用程度增大，提高了尿检的有效性和客观性，可避免临床阳性样品因尿样成分尿素和蛋白质干扰的漏检。

A urine detection kit of monohydroxybenzenes with anti-interference of urine components and its preparation method, operation method and Application

The invention relates to a urine detection kit for anti-interference of urine components, a preparation method, an operation method and an application thereof, belonging to the field of biomedical examination. The kit of the invention consists of a main bottle reagent (ampoule bottle) and a secondary bottle reagent (plastic bottle). The main bottle reagent is prepared from mercury, concentrated nitric acid, copper sulfate and distilled water. The secondary bottle reagent is composed of sodium nitrite and distilled water. The kit is prepared from mercury, concentrated nitric acid, copper sulfate and sodium nitrite by chemical reaction and solution. The urine detection kit of the invention has the function of resisting interference of urea and protein in clinical urine sample, high stability, short reaction time and high color sensitivity, which enhances the applicability of urine detection reagent to various clinical urine samples, improves the effectiveness and objectivity of urine examination, and avoids missed detection of clinical positive samples due to interference of urea and protein in urine sample.

【技术实现步骤摘要】
一种抗尿液成分干扰的单羟酚类物质尿检试剂盒及其制备方法、操作方法和应用
本专利技术属于生物医学检验领域，更具体地说，本专利技术涉及一种抗尿液成分干扰的单羟酚类物质尿检试剂盒及其制备方法、操作方法和应用。
技术介绍
肿瘤早期诊断和早期治疗是提高肿瘤治愈率的关键。恶性肿瘤患者普遍存在氨基酸代谢异常的现象，即蛋白质分解为氨基酸的过程增强，而氨基酸的分解代谢则减弱，多余而无法利用的氨基酸则排出体外。氨基酸代谢异常在肿瘤发生早期就存在，其中一个重要表现是尿液中对羟基苯丙氨酸(酪氨酸)的含量升高。肿瘤细胞代谢越活跃，氨基酸代谢异常越显著，酪氨酸含量升高越明显。临床研究表明，几乎所有恶性肿瘤病人尿液中的酪氨酸含量明显升高的结果。因此，基于单羟酚类物质的尿液检测试剂在原发肿瘤的发现、肿瘤高危人群的筛选、肿瘤治疗效果的观察和评价等方面具有重要的临床参考价值。中国专利《对羟基苯丙氨酸尿液检测试剂及其制备方法》(ZL201310247724.1)、《一种恶性乳腺疾病筛查尿检试剂及其应用》(ZL200710049244.9)中都有这方面的报道。目前，含单羟酚类物质的尿液检测试剂的制备都是以米伦(Millon)反应原理为基础。米伦试剂是用浓硝酸与汞反应来制备，在反应中生成硝酸汞、亚硝酸汞、硝酸和少量的亚硝酸等物质。它可与含酚羟基氨基酸衍生物产生颜色反应。一般认为，米伦显色反应是由一系列较为复杂的反应构成，其中主要有汞盐参与的酚的亚硝基化反应、经互变异构后成为颜色更深的邻醌肟物质的反应和形成红色稳定含汞配合物的反应等，如下式一所示。米伦(Millon)试剂对单羟酚类物质的检测有着很高的灵敏度，故在生物医学检测领域具有重要的应用价值。但米伦试剂在临床上的应用也存在非常明显的缺陷，这就是临床尿样成分物质中的尿素和蛋白质量均可干扰米伦反应，可以造成临床阳性尿液的漏检，而且这个问题未被人们注意到。众所周知，尿液成分物质除了大量的水之外，主要是尿素和蛋白质，而其中的尿素可与亚硝酸反应生成氮气，消耗米伦试剂中的亚硝酸；蛋白质可与汞盐生成沉淀，而汞盐是催化和显色反应的必须物质。由于尿样的复杂性，其成分含量是波动起伏的。当尿样中尿素含量较低时，它的影响小或不影响单羟酚类物质的亚硝基化反应，显色反应基本正常或正常，可获得正确的阳性检测结果；但当尿样中尿素含量较高时，即可影响酚类物质的亚硝基化反应，使米伦反应不正常甚至不显色，造成阳性样品的漏检。同样，蛋白质含量较高时，也可因消耗汞盐而干扰米伦反应，影响催化反应和显色反应，也可以造成临床阳性尿液的漏检。米伦试剂的制备较为繁琐和存在着污染，一般难以“现制现用”。目前主要采用尿检试剂方式，即预先制备、装入安瓿瓶保存、待临床检测时开瓶使用的方式。这样以来，除了上述尿样中干扰物质影响外，还增加了尿检试剂因制备、放置分解的新问题，即因其中的亚硝酸极不稳定，只能存在于稀溶液中，且易于分解，使试剂不稳定的问题。因此，当前临床尿检试剂存在明显的不足，因不能抵抗尿液成分物质的干扰和试剂不稳定，而造成临床阳性尿液的漏检，使尿检的临床意义大大降低。基于上述理由，提出本申请。
技术实现思路
本专利技术针对现有技术存在的缺点和不足，提供一种抗尿液成分干扰的单羟酚类物质的尿检试剂盒及其制备方法、操作方法和应用。本专利技术提出了抗尿液成分物质干扰的尿检试剂新思路，通过添加新物质CuSO4、NaNO2和相应的操作，分别排除了尿液中蛋白质、尿素对米伦反应的干扰，保证了米伦反应(系列)的正常进行，并提高了显色反应的色度和速度，保证了尿检试剂对含酚羟基氨基酸衍生物检测的有效性和客观性。同时，减少了医学检验废弃物的毒性及污染。为了实现本专利技术的第一个目的，本专利技术采用的技术方案具体如下：一种抗尿液成分干扰的单羟酚类物质尿检试剂盒，所述试剂盒由主瓶(安瓿瓶)试剂和副瓶(塑料瓶)试剂构成，其中：所述主瓶试剂由汞、浓硝酸、硫酸铜和蒸馏水为原料制得，所述副瓶试剂由亚硝酸钠和蒸馏水组成。进一步，上述技术方案，所述主瓶试剂由如下质量份的各原料制得：按质量份数计，汞1份，浓硝酸2.4～3.6份，蒸馏水12～16份，硫酸铜1.5份。优选地，上述技术方案，所述硫酸铜优选为五水硫酸铜。进一步，上述技术方案，所述副瓶试剂按质量份数计，由1份亚硝酸钠、6～8份蒸馏水组成。进一步，上述技术方案，所述主瓶试剂与副瓶试剂的体积比为1：0.2～1，更优选为1：0.5～0.7。本专利技术的第二个目的在于提供上述所述抗尿液成分干扰的单羟酚类物质尿检试剂盒的制备方法，所述方法包括如下步骤：(1)A溶液的制备：按质量份数，称取1份汞和2.4～3.6份浓硝酸，搅拌混合均匀后升温至30～50℃恒温反应50～120min；反应结束后冷却至室温，然后向反应体系中加入12～16份蒸馏水和1.5份硫酸铜，继续搅拌至充分溶解，即配制成A溶液；(2)B溶液的配制：按质量份数，称取1份亚硝酸钠，完全溶解于6～8份蒸馏水中，即配制成B溶液；(3)将步骤(1)所得A溶液分装到灭菌过的安瓿瓶中，每瓶1mL，压盖密封，获得主瓶试剂；将步骤(2)所得B溶液分装到灭菌过的塑料瓶中，每瓶0.5～0.7mL，压盖密封，获得副瓶试剂。本专利技术的第三个目的在于提供上述所述抗尿液成分干扰的单羟酚类物质尿检试剂盒的操作方法，具体如下：打开主瓶，向主瓶试剂中滴入1～3mL尿液样品，摇匀；然后打开副瓶，将副瓶试剂滴入到主瓶内，继续混合摇均后静置15～25min，观察沉淀和上清液颜色，对照色标卡判定结果。进一步，上述技术方案，所述尿液样品加入量优选为2mL。本专利技术的第四个目的在于提供上述所述抗尿液成分干扰的单羟酚类物质尿检试剂盒的应用。本专利技术上述所述的抗尿液成分干扰的单羟酚类物质尿检试剂盒可用于制备肿瘤或癌症早期筛查检测试剂。本专利技术以汞、浓硝酸、硫酸铜和亚硝酸钠为原料，经化学反应和溶液配制，制得抗尿液成分物质干扰的单羟酚类物质尿检试剂盒。本专利技术原理如下：本专利技术提出了通过新的化学物质配合米伦试剂，改变米伦显色反应机制和保障显色反应关键条件，排除尿液成分物质尿素和蛋白质干扰的新方法。在新方法中，通过新物质CuSO4改变了显色反应机制，利用Cu2+能与邻醌肟物质形成更稳定、砖红色更深的含铜配位化合物来发生显色反应，替代了汞盐参与的显色反应，使汞盐主要在米伦反应中发挥其催化作用，降低了后续显色反应对汞盐含量的依赖，避免了因蛋白质消耗使汞盐量不足而导致的弱显色或不显色，即阳性漏检结果；还因含铜配位化合物颜色的加深及显色加快(本试剂在～20℃下，5min即可明显显色)而提高了显色反应的显示度及效率。由于汞盐主要仅发挥其催化作用，故其用量可相对减少，降低了医疗废弃物的毒性和污染。同时，通过副瓶中的新物质NaNO2与主瓶试剂中强酸生成的HNO2补充了尿液中尿素对试剂中关键物质HNO2的消耗，使单羟酚类物质的亚硝化反应充分完全，确保了后续显色反应的顺利进行；副瓶分装NaNO2的方法避免了HNO2的挥发和分解，保证了本试剂盒的稳定性。本专利技术丰富了米伦反应原理在医学检验中应用的理论基础，从根本上解决了米伦试剂在临床应用中易于受到尿液成分干扰的难题。与现有技术相比，本专利技术涉及的一种抗尿液成分干扰的单羟酚类物质的尿检试剂盒及其制备方法、操作方法和应用具有以下优点和有本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种抗尿液成分干扰的单羟酚类物质尿检试剂盒，其特征在于：所述试剂盒由主瓶试剂和副瓶试剂构成，其中：所述主瓶试剂由汞、浓硝酸、硫酸铜和蒸馏水为原料制得，所述副瓶试剂由亚硝酸钠和蒸馏水组成。

【技术特征摘要】
1.一种抗尿液成分干扰的单羟酚类物质尿检试剂盒，其特征在于：所述试剂盒由主瓶试剂和副瓶试剂构成，其中：所述主瓶试剂由汞、浓硝酸、硫酸铜和蒸馏水为原料制得，所述副瓶试剂由亚硝酸钠和蒸馏水组成。2.根据权利要求1所述的抗尿液成分干扰的单羟酚类物质尿检试剂盒，其特征在于：所述主瓶试剂由如下质量份的各原料制得：按质量份数计，汞1份，浓硝酸2.4～3.6份，蒸馏水12～16份，硫酸铜1.5份。3.根据权利要求2所述的抗尿液成分干扰的单羟酚类物质尿检试剂盒，其特征在于：所述硫酸铜优选为五水硫酸铜。4.根据权利要求1或2所述的抗尿液成分干扰的单羟酚类物质尿检试剂盒，其特征在于：所述副瓶试剂按质量份数计，由1份亚硝酸钠、6～8份蒸馏水组成。5.根据权利要求1或2所述的抗尿液成分干扰的单羟酚类物质尿检试剂盒，其特征在于：所述主瓶试剂与副瓶试剂的体积比为1：0.2～1。6.权利要求4所述的抗尿液成分干扰的单羟酚类物质尿检试剂盒的制备方法，其特征在于：所述方法包括如下步骤：(1)A溶液的制备：按质量份数，称取1份汞和2.4～3.6份...

【专利技术属性】
技术研发人员：谭秋萍，吴建国，杨小钢，刘卫，程浩，张文，于国荣，黄玉卉，
申请(专利权)人：武汉福朗科技发展有限公司，广东龙帆生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：湖北,42