一种菠萝泛菌及其菌剂和应用制造技术

本发明专利技术属于植保领域，公开了一种菠萝泛菌，为菠萝泛菌H2(Pantoea ananatis H2),保藏于中国典型培养物保藏中心(CCTCC)，保藏编号为M2018844，本发明专利技术还提供了上述菠萝泛菌在制备预防或治疗由胶胞炭疽病病原菌引起的植物病害药物以及由尖孢镰刀菌引起的植物枯萎病药物中的应用。本发明专利技术还提供了一种含有上述菠萝泛菌的微生物菌剂以及微生物菌剂的制备方法，并提供了上述微生物菌剂在制备预防或治疗由胶胞炭疽病病原菌引起的植物病害药物以及由尖孢镰刀菌引起的植物枯萎病药物中的应用。本发明专利技术的菠萝泛菌P.ananatis H2能够同时对枯萎病和炭疽病具有很强的抑菌作用，且对尖孢镰刀菌的抑菌率达到92.7％，具有优良的抑菌效果，其具有良好的开发应用前景。

A Panbacteria of Pineapple and Its Microbial Agent and Application

The invention belongs to the field of plant protection, and discloses a kind of pineapple pan-bacteria, Pantoea ananatis H2, which is stored in the CCTCC, and the storage number is M2018844. The invention also provides the pan-bacteria of pineapple in the preparation of medicines for preventing or treating plant diseases caused by the pathogen of colloidal anthracnose and plant wilt caused by Fusarium oxysporum. The application of the substance. The invention also provides a microbial agent containing the pan-bacteria of pineapple and a preparation method of the microbial agent, and provides the application of the microbial agent in the preparation of plant disease drugs for preventing or treating the pathogen of colloidal anthracnose and plant Fusarium wilt drugs caused by Fusarium oxysporum. The pineapple panbacteria P.ananatis H2 of the invention has strong bacteriostatic effect on both Fusarium Wilt and anthrax, and the bacteriostatic rate of Fusarium oxysporum reaches 92.7%, which has excellent bacteriostatic effect, and has good development and application prospect.

【技术实现步骤摘要】
一种菠萝泛菌及其菌剂和应用
本专利技术涉及植保领域，具体涉及一种菠萝泛菌及其菌剂和其在制备预防或治疗由胶胞炭疽病病原菌引起的植物病害药物以及由灰葡萄孢引起的植物灰霉病药物中的应用。
技术介绍
尖孢镰刀菌(F.oxysporum)是一种世界性分布的土传病原真菌，寄主范围广泛，可引起瓜类、茄科、香蕉、棉、豆科及花卉等100多种植物枯萎病的发生。尖孢镰刀菌属半知菌类(Imperfectifungi)、从梗孢目(Moniliales)、瘤座孢科(Tuberculariaceae)、镰刀菌属(Fusarium)。胶胞炭疽病病原菌也是农业生产上较为常见的一种真菌病原菌，它引起的梨树上的病害在黄河故道梨产区普遍发生，尤其对砀山酥梨危害明显，2008年，砀山地区暴发梨炭疽病，病果率达到70％以上，造成严重的经济损失，该病原菌同样能引起油茶叶和凤梨叶上的炭疽病等。然而，目前以上病害防治仍以化学农药为主，而化学农药有污染环境、对人畜不安全、破坏生态环境等弊端。生物防治具有环境友好、易降解、对人畜无害等优点，是防治植物病害的可行方案。其中芽胞杆菌(Bacilus)是一类较常见的生防菌筛选对象，对其展开的生防研究较多。有研究报道，泛菌属菠萝泛菌PantoeaananatisP-Y2-2对半夏软腐病具有很好的拮抗作用，该研究结果表明了菠萝泛菌对细菌性病原菌的生防潜力；王志刚等报道了菠萝泛菌HYL01菌株及其在促进西瓜根系生长中的应用，该申请表明菠萝泛菌对植物有一定的促生作用。然而，目前关于菠萝泛菌在多种植物真菌病害上的防治研究报道很少。
技术实现思路
本专利技术为解决上述问题，提供了一种菠萝泛菌PantoeaananatisH2及其菌剂以及其在制备预防或治疗由胶胞炭疽病病原菌引起的植物病害药物以及由尖孢镰刀菌引起的植物枯萎病药物中的应用。本专利技术解决上述技术问题的技术方案如下：一种菠萝泛菌，该菠萝泛菌PantoeaananatisH2为自患病的兰花根际土壤筛选得到的，结合生理生化特征和分子特征鉴定为菠萝泛菌，并命名为PantoeaananatisH2，其于2018年11月30日保藏于中国典型培养物保藏中心(CCTCC)，地址为湖北省武汉市武昌珞珈山，保藏编号为M2018844。经试验证明，上述菠萝泛菌对胶胞炭疽病病原菌具有拮抗作用，本专利技术提供了上述菠萝泛菌在抑制胶胞炭疽病病原菌中的应用。经试验证明，上述菠萝泛菌对尖孢镰刀菌具有抑制效果，本专利技术提供了上述菠萝泛菌在抑制尖孢镰刀菌中的应用。本专利技术还提供了上述菠萝泛菌在制备预防或治疗由胶胞炭疽病病原菌引起的植物病害药物中的应用，所述植物病害为油茶炭疽病、梨炭疽病和凤梨炭疽病。本专利技术还提供了上述菠萝泛菌在制备预防或治疗由尖孢镰刀菌引起的植物枯萎病药物中的应用，所述植物为百合、大花蕙兰、蝴蝶兰、葡萄和金线莲。本专利技术还提供了一种微生物菌剂，包含上述菠萝泛菌。本专利技术还提供了上述微生物菌剂的制备方法，将上述菠萝泛菌接种于LB培养基中培养得到所述微生物菌剂。该微生物菌剂制备方法简单，生长速度快，培养时间短，生产成本低。本专利技术还提供了上述微生物菌剂在制备预防或治疗由胶胞炭疽病病原菌引起的植物病害药物中的应用，其特征在于，所述植物病害为油茶炭疽病、梨炭疽病和凤梨炭疽病。本专利技术还提供了上述微生物菌剂在制备预防或治疗由尖孢镰刀菌引起的植物枯萎病药物中的应用，其特征在于，所述植物为百合、大花蕙兰、蝴蝶兰、葡萄和金线莲。本专利技术与现有技术相比，具有以下优点和效果：1、本专利技术的菠萝泛菌P.ananatisH2分离自兰花植株根际土壤，具有稳定的生态环境和生防作用；2、本专利技术的菠萝泛菌P.ananatisH2能够同时对尖孢镰刀菌和胶胞炭疽病原菌具有很强的拮抗作用，且对尖孢镰刀菌的抑菌率达到92.7％，具有优良的抑菌效果，其具有良好的开发应用前景；3、本专利技术的微生物菌剂制作容易，生长速度快，液体培养代谢产物只需要在液体培养基中培养10-24h即可获得很好的拮抗效果，相比一般细菌、真菌大大缩短了培养时间，降低了生产成本；4、本专利技术的菠萝泛菌P.ananatisH2具有溶磷固氮、分泌植酸酶的能力，能够促进植物的生产，在农业生产上有较大的应用价值。附图说明图1为本专利技术菠萝泛菌P.ananatisH2菌落和革兰氏染色后显微形态示意图；图2为本专利技术菠萝泛菌P.ananatisH2溶磷作用示意图；图3为本专利技术菠萝泛菌P.ananatisH2固氮作用示意图；图4为本菠萝泛菌P.ananatisH2产植酸酶能力示意图；图5为本专利技术菠萝泛菌P.ananatisH2的无菌滤液对胶胞炭疽病病原菌(Colletotrichum.Gloeosporioides)的抑菌效果图；图6为本专利技术菠萝泛菌P.ananatisH2的无菌滤液对尖孢镰刀菌(F.oxysporum)的抑菌效果图。具体实施方式以下结合附图及具体实施例对本专利技术的原理和特征进行描述，所举实例只用于解释本专利技术，并非用于限定本专利技术的范围。实施例1胶胞炭疽病病原菌和尖孢镰刀菌拮抗菌的筛选和鉴定1、拮抗菌的筛选a.拮抗菌的分离纯化取患病的兰花植株根际土样10g加入到盛有90mL无菌水和30～50颗玻璃珠的三角瓶中，制成1:10浓度的悬浮液，在28℃，180rpm摇床中震荡20～30min后，将菌液放置在75～85℃的水浴锅中保持12～18min。将1mL土壤悬浮液移入盛有9mL无菌水的试管中，制成10-2的菌悬液，依次稀释，制成10-3、10-4、10-5、10-6的菌悬液。梯度稀释后，分别吸取100μL稀释倍数为10-3-10-6的菌悬液均匀涂布在分离培养基-牛肉膏蛋白胨培养基上，培养基配方如下：牛肉膏3.0g，蛋白胨10.0g，NaCl5.0g，琼脂15.0g，蒸馏水1000mL，pH为7.2～7.4。将涂布有菌悬液的平板置于30℃培养箱中1周，24h后随即观察分离培养基上菌落状态，用三步划线法进行分离纯化，统一编号登记。菌种保藏：接种斜面后，可在4℃短暂保藏，用50％(V/V)甘油作为保护剂，可在-80℃长久保藏。b.拮抗菌的初筛采用点接法初筛，先筛选出能拮抗胶胞炭疽病病原菌(Colletotrichum.Gloeosporioides)的细菌，将打好直径为7mm的胶胞炭疽病病原菌菌饼放置在PDA平板中心，然后用无菌牙签蘸取待测菌等距离(距平板中央1.5cm)点接拮抗细菌(依次选择H1、H2、H3…H15中的4个菌株)，置于28℃恒温培养箱培养，5天后观察抑菌带有无及大小，每个处理重复三次。然后进一步筛选出能拮抗尖孢镰刀菌(F.oxysporum)的拮抗细菌，将打好直径为7mm的病原菌并放置PDA平板中心，然后用无菌亚恰蘸取待测菌等距离(距平板中央1.5cm)点接拮抗菌，置于25℃恒温培养箱中培养，5天后观察抑菌带有无及其大小，每个处理重复3次，进一步筛选抑菌直径大于5mm的菌株。c.拮抗菌的复筛采用培养法复筛：分别将初筛筛得的拮抗菌滤液与约50℃的PDA固体培养基按照1:19混匀后倒入培养皿，冷却后在平板中央分别放入直径为7mm的胶胞炭疽病病原菌菌饼和尖孢镰刀菌饼，以无菌水为对照，每个处理重复三次。5天后测量病原菌菌落直径，筛选出同时对胶胞炭疽病病原菌和尖孢镰刀菌具有拮抗作用的菌株本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种菠萝泛菌，其特征在于，为菠萝泛菌H2(PantoeaananatisH2),保藏于中国典型培养物保藏中心(CCTCC)，保藏编号为M2018844。

【技术特征摘要】
1.一种菠萝泛菌，其特征在于，为菠萝泛菌H2(PantoeaananatisH2),保藏于中国典型培养物保藏中心(CCTCC)，保藏编号为M2018844。2.一种如权利要求1所述的菠萝泛菌在抑制胶胞炭疽病病原菌中的应用。3.一种如权利要求1所述的菠萝泛菌在抑制尖孢镰刀菌中的应用。4.一种如权利要求1所述的菠萝泛菌在制备预防或治疗由胶胞炭疽病病原菌引起的植物病害药物中的应用，其特征在于，所述植物病害为油茶炭疽病、梨炭疽病和凤梨炭疽病。5.一种如权利要求1所述的菠萝泛菌在制备预防或治疗由尖孢镰刀菌引起的植物枯萎病病药物中的应用，其特征在...

【专利技术属性】
技术研发人员：魏蜜，陈嘉敏，刘惠英，张志林，
申请(专利权)人：湖北工程学院，
类型：发明
国别省市：湖北,42