一种利用ATP生物发光反应检测食品中蜡样芽孢杆菌的方法技术

本发明专利技术公开了一种利用ATP生物发光反应检测食品中蜡样芽孢杆菌的方法，该方法首先将待检测的样品与PBS缓冲液混合后离心得到初始上清液，随后加入消化液进行水浴加热反应，再次离心后得到消化上清液并抽滤，将滤膜浸入ATP释放液中振荡提取，得到ATP提取液，接着将制备得到的发光反应液与ATP提取液在发光反应管中混合，置于ATP荧光检测仪中检测发光强度，从而实现对食品中蜡样芽孢杆菌的快速检测。本发明专利技术所述的利用ATP生物发光反应检测食品中蜡样芽孢杆菌的方法简便快速、灵敏度高，能够准确检测出食品中是否含有蜡样芽孢杆菌及相对含量，极大地促进了食品安全检测技术的提高。

【技术实现步骤摘要】
一种利用ATP生物发光反应检测食品中蜡样芽孢杆菌的方法
本专利技术涉及生物检测方法
，特别涉及一种利用ATP生物发光反应检测食品中蜡样芽孢杆菌的方法。
技术介绍
蜡样芽孢杆菌(Bacilluscereus)是一种能产芽孢的革兰氏阳性菌，广泛分布于空气、污水和各类生熟食品中。目前，从多种食品中分离出该菌，包括炒米饭、肉类、乳类和鱼等，是常见的食源性致病菌，极有可能危害人们的健康。在临床上，蜡样芽孢杆菌引起的食物中毒可分为腹泻型和呕吐型两种类型，分别是由该菌产生的腹泻毒素和呕吐毒素所致，前者对热和胰蛋白酶敏感，因而可预防；而后者对热稳定，活性不受胃蛋白酶的干扰，即使微量表达也会对人体有较大危害，不易防范，常起暴发性食物中毒。因此，对于该菌的预防和检测非常重要。微生物检测的常规方法有培养基法、PCR分子检测法、酶联免疫吸附法和ATP生物发光法等。传统培养基法耗时太长，PCR分子检测方法需要特殊的仪器和器材，需专门提取样品的DNA，样品前处理步骤繁琐，操作人员需要具备专门技能。酶联免疫吸附法以抗体作为识别分子，抗体易受到外界条件尤其是温度的影响，对保藏条件要求苛刻，在很大程度上限制了方本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种利用ATP生物发光反应检测食品中蜡样芽孢杆菌的方法，其特征在于，包括以下步骤：（1）将50 g的待检测的固态/液态样品与950 g的1×PBS缓冲液混合，经研磨/搅拌得到悬浮液/混合液，离心除去不溶物，向得到的初始上清液中加入200 μL消化液，混匀后放入40度水浴锅中进行消化反应15～20 min，然后以3000 g离心1～2 min，弃沉淀后得到消化上清液；（2）取100 mL步骤（1）得到的消化上清液进行抽滤，随后将滤膜浸入到盛放有50 mL ATP释放液的烧杯中，所述ATP释放液包括Triton X‑100、三甲基氨基甲烷、氯化锂、N‑月桂酰肌氨酸钠、异硫氰酸胍、尿素，随后加入...

【技术特征摘要】
1.一种利用ATP生物发光反应检测食品中蜡样芽孢杆菌的方法，其特征在于，包括以下步骤：（1）将50g的待检测的固态/液态样品与950g的1×PBS缓冲液混合，经研磨/搅拌得到悬浮液/混合液，离心除去不溶物，向得到的初始上清液中加入200μL消化液，混匀后放入40度水浴锅中进行消化反应15～20min，然后以3000g离心1～2min，弃沉淀后得到消化上清液；（2）取100mL步骤（1）得到的消化上清液进行抽滤，随后将滤膜浸入到盛放有50mLATP释放液的烧杯中，所述ATP释放液包括TritonX-100、三甲基氨基甲烷、氯化锂、N-月桂酰肌氨酸钠、异硫氰酸胍、尿素，随后加入15μL三磷酸腺苷双磷酸酶，将烧杯转移至40℃水浴锅中速率振荡提取，得到ATP提取液；（3）在无菌环境中将荧光素酶10μL、可溶性无机镁盐30mg、二硫苏糖醇15mg与50mL无菌水混合，振荡混匀，得到发光反应液；（4）吸取0.2mL步骤（2）得到的ATP提取液于发光反应管中，加入pH7.0～9.0的含0.13～0.15mol/LNaCl、0.02～0.03mol/LEDTA、0.06～0.08mol/L环糊精的Tris-HCl缓冲液将总体积补足至0.9mL，再加入0.1mL步骤（3）的发光反应液，充分振荡后将混合液置于ATP荧光检测仪中检测发光强度，检测响应时间为20～30s。2.根据权利要求1所述的利用ATP生物发光反应检测食品中蜡样芽孢杆菌的方法，其特征在于，所述步骤（1）中的消化液组成为：0.1～0.3mol/LTritonX-100、0.05～0.07mol/L乙二胺四乙酸二钠、0....

【专利技术属性】
技术研发人员：张丽英，
申请(专利权)人：张丽英，
类型：发明
国别省市：内蒙古,15