针对IL-17A、IL-17F和其他促炎性分子的三特异性抗体制造技术

本发明专利技术涉及生物技术领域，并且提供以高亲和力特异性结合人IL‑17A、人IL‑17F和人促炎性分子(特别是TNFα)的单克隆三特异性结合分子。本发明专利技术还涉及编码这样的结合分子的DNA构建体，相应的表达载体和生产方法，以及使用所述结合分子的治疗方法。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】针对IL-17A、IL-17F和其他促炎性分子的三特异性抗体
技术介绍
免疫系统的主要功能是保护身体免受感染，诸如细菌或病毒，以及免于癌症病变。免疫应答包括炎症，即全身地或在身体的特定部位中免疫细胞的积累。免疫系统的细胞包括几种类型的骨髓和淋巴样细胞，诸如单核白细胞、巨噬细胞、树突细胞、嗜酸性粒细胞、T细胞、B细胞和嗜中性粒细胞。响应于感染或外来物质，免疫细胞分泌称为细胞因子的信号蛋白，其反过来调节免疫细胞的增殖、发育、分化和/或迁移。在某些情况下，免疫应答可导致病理过程，诸如自体免疫疾病(参见例如,Abbas等(eds.)(2000)CellularandMolecularImmunology,W.B.SaundersCo.,Philadelphia,Pa.；Oppenheim和Feldmann(eds.)(2001)CytokineReference,AcademicPress,SanDiego,Calif.；vonAndrian和Mackay,NewEnglJMed343:1020-1034(2000)；Davidson和Diamond,NewEnglJMed345:340-350(2001))。CD4+Т细胞在免疫应答中发挥核心作用，帮助适应性或先天免疫系统的其他细胞。早期研究确定了两类CD4+Т细胞(Th1和Th2)。最近，已经确定了新的CD4+T细胞的亚群：Th17细胞。Th17细胞已成为适应性免疫系统的分支，专门用于加强保护宿主抵御细胞外细菌以及Th1和Th2细胞不提供保护的一些真菌和细菌。已经在发现新的细胞因子家族，IL-17家族，的背景下确定了Th17细胞，IL-17家族目前由六个成员组成(IL-17A-F)。IL-17(以前称为CTLA-8)基本上由Th17细胞表达，并且已被指定为作为IL-17细胞因子家族中的原始分子的IL-17A。IL-17家族成员的序列与其他目前已知的哺乳动物蛋白质不具有同源性；因此，IL-17家族构成了独立的细胞因子家族。基于IL-17F的晶体结构建立的IL-17家族成员的结构特征与许多细胞因子相似；尽管结构分析暗示还可能存在异二聚体，但每个家族成员可能作为同型二聚体产生。最近，已经发现由活化的CD4+T细胞表达的异二聚体IL-17A和IL-17F通过IL-17R/IL-17RC的复合体传递信号(WrightJ.F.等,JImmunol181:2799-2805(2001))。编码人IL-17F的基因位于编码人IL-17A的基因附近(Hymowitz等,EmboJ20(19):5332-41(2001))。IL-17A和IL-17F具有44％的氨基酸序列同一性，而IL-17家族的其他成员具有较低的序列同一性(15-27％)。这表明IL-17A和IL-17F形成IL-17家族的特殊亚组(Starnes等,JImmunol167(8):4137-40(2001)；Aggarwal和Gurney,J.LeukocBiol71(1):1-8(2002))。已经发现IL-17F的生物作用类似于IL-17A的生物作用，例如，在多种细胞中刺激IL-6、IL-8和G-CSF产生的能力。与IL-17A一样，IL-17F能够诱导软骨基质的分泌并且抑制新软骨基质的合成(参见美国2002/0177188)。因此，与IL-17A一样，IL-17F可能有助于炎性疾病的病理。最近，作者观察到IL-17A和IL-17F两者均在暴露于白细胞介素23(IL-23)的T细胞中被诱导(Aggarwal等,JBiolChem278(3):1910-4(2003))。观察到IL-17A和IL-17F具有相似的染色体定位和显着的序列相似性，以及IL-17A和IL-17F在响应特异性刺激的相同细胞群体中被诱导的事实导致鉴定出新的人细胞因子，其包含IL-17A和IL-17F的共价异二聚体。此外，IL-17A与肿瘤坏死因子α(TNFα)和白细胞介素1β(IL-1β)协同作用以实现显着的促炎性状态。为了治疗各种炎症、免疫和增殖性病症，包括类风湿性关节炎(RA)、骨关节炎、类风湿性关节炎骨质疏松症，炎性纤维化(例如硬皮病，肺纤维化和硬化)、牙龈炎、牙周变性或牙周疾病、炎性肠疾病(例如，克罗恩氏病、溃疡性结肠炎和炎性肠疾病)、哮喘(包括过敏性哮喘)、过敏症、慢性阻塞性肺疾病(COPD)、多发性硬化症、银屑病、癌症等等，建议用抗体或抗原结合的抗体片段(这些分子的拮抗剂)降低IL-17A的活性(参见，例如，美国2003/0166862、WO2005/108616、WO2005/051422和WO2006/013107)。已知TNFα拮抗剂通过减少炎症并且抑制软骨和骨破坏的进展来治疗关节炎(vandenBerg,ArthritisRes3:18-26(2001))。然而，相当大比例的患者对含有TNFα拮抗剂的药物具有不充分应答。临床前研究表明，TNFα和IL-17A在关节炎的病理生理学中表现出相同的特性。虽然单独的TNFα和IL-17A对炎症基因的表达具有可忽略的影响，但它们的组合导致强烈的协同应答。TNFα和IL-17A的相互作用增加细胞因子(LeGrand等，ArthritisRheum44：2078-2083(2001))和促炎性趋化因子(Chabaud等，J.Immunol167：6015-6020(2001))的表达，并且还诱导软骨和骨破坏(VanBczooijen等，AnnRheumPis61：870-876(2002))。目前，存在许多IL-17A双特异性抗体和其他促炎性分子，例如DVD(Abbott)和COVA322(Covagen-Janssen)。国际专利公开号WO2015/014979描述了IL-17A和TNFα四价双特异性抗体，其含有针对IL-17A的两个结合位点和针对TNFα的两个结合位点。这些抗体在抑制类风湿性关节炎中炎症和组织破坏方面表现出协同效应。国际专利申请WO2014/137961描述了包括两种多肽的IL-17A和TNFα双特异性抗体。这些双特异性抗体是热稳定性和化学稳定性的，表现出低聚集能力，并且可以同时与IL-17A和TNFα结合。美国专利号8,496,936描述了IL-17A、IL-17F和IL-23p19三特异性抗体，其在细胞测定和体内动物模型中表现出针对各种配体的不同活性，但未显示产生稳定的制剂候选物的任何必需的物理-化学特性。在炎性反应和自体免疫疾病的情况下，能够有效中和IL-17A、IL-17F和TNFα活性的抗体的产生，尤其是在制剂中保持稳定的抗体，仍然是有意义的。
技术实现思路
本专利技术提供了针对IL-17A、IL-17F和促炎性分子，诸如TNFα的三特异性结合分子。此类抗体可用于治疗自体免疫和/或炎性疾患，诸如类风湿性关节炎、银屑病和银屑病性关节炎。与目前对于这样的疾患的可获得的治疗(包括抗体治疗)相比，预期本专利技术的三特异性结合分子可单独或与其他抗炎剂和/或免疫抑制疗法组合提供优异的临床反应。在一个方面，本专利技术提供三特异性结合分子，其包括结合人IL-17A和人IL-17-F的第一结合结构域和结合人促炎性分子的第二结合结构域。在某些实施方式中，人促炎性分子是人TNF本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种三特异性结合分子，包括结合人IL‑17A和人IL‑17‑F的第一结合结构域和结合人促炎性分子的第二结合结构域。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2016.04.29 RU 20161171401.一种三特异性结合分子，包括结合人IL-17A和人IL-17-F的第一结合结构域和结合人促炎性分子的第二结合结构域。2.根据权利要求1所述的结合分子，其中所述结合分子是抗体或其抗原结合片段。3.根据权利要求1或权利要求2所述的结合分子，其中所述第一结合结构域包括SEQIDNO：3的氨基酸序列。4.根据权利要求1或权利要求2所述的结合分子，其中所述第一结合结构域包括SEQIDNO：1-3的氨基酸序列。5.根据权利要求1或权利要求2所述的结合分子，其中所述第一结合结构域与包括SEQIDNO：4的氨基酸序列的结合结构域竞争结合或结合与包括SEQIDNO：4的氨基酸序列的结合结构域相同的表位。6.根据权利要求1或权利要求2所述的结合分子，其中所述第一结合结构域具有与SEQIDNO：4至少90％的同一性。7.根据权利要求1或权利要求2所述的结合分子，其中所述第一结合结构域包括所述SEQIDNO：4的氨基酸序列。8.根据权利要求1所述的结合分子，其中所述第一结合结构域是人源化的。9.根据权利要求1所述的结合分子，其中所述第二结合结构域与人TNFα结合。10.根据权利要求9所述的结合分子，其中所述第二结合结构域与包括以下的结合结构域竞争结合或结合与包括以下的结合结构域相同的表位:a)包括SEQIDNO：10-12的氨基酸序列的重链和包括SEQIDNO：13-15的氨基酸序列的轻链；b)包括SEQIDNO：8的氨基酸序列的重链可变结构域和包括SEQIDNO：9的氨基酸序列的轻链可变结构域；或c)包括SEQIDNO：5的氨基酸序列的重链和包括SEQIDNO：6的氨基酸序列的轻链。11.根据权利要求9所述的结合分子，其中所述第二结合结构域包括含有SEQIDNO：12的氨基酸序列的重链，和含有SEQIDNO：15的氨基酸序列的轻链。12.根据权利要求11所述的结合分子，其中所述第二结合结构域包括含有SEQIDNO：10-12的氨基酸序列的重链，和含有SEQIDNO：13-15的氨基酸序列的轻链。13.根据权利要求9所述的结合分子，其中所述第二结合结构域包括具有与SEQIDNO：8至少90％的同一性的重链可变结构域，具有与SEQIDNO：9至少90％的同一性的可变结构域，或两者。14.根据权利要求9所述的结合分子，其中所述第二结合结构域包括含有SEQIDNO：8的氨基酸序列的重链可变结构域，含有SEQIDNO：9的氨基酸序列的轻链可变结构域，或两者。15.根据权利要求9所述的结合分子，其中所述第二结合结构域包括由SEQIDNO：8的氨基酸序列组成的重链可变结构域，和由SEQIDNO：9的氨基酸序列组成的轻链可变结构域。16.根据权利要求9所述的结合分子，其中所述第二结合结构域是嵌合抗体、人源化抗体、人抗体、单链抗体、Fv、Fab、F(ab’)2、Fd、单链Fv分子(scFv)、双抗体或单结构域抗体(dAb)。17.根据权利要求9所述的结合分子，其中所述第二结合结构域包括具有与SEQIDNO：5至少90％的同一性的重链，具有与SEQIDNO：6至少90％的同一性的轻链，或两者。18.根据权利要求9所述的结合分子，其中所述第二结合结构域包括含有SEQIDNO：5的氨基酸序列的重链，包含SEQIDNO：6的氨基酸序列的轻链，或两者。19.根据权利要求9所述的结合分子，其中所述第二结合结构域包括由SEQIDNO：5的氨基酸序列组成的重链，和由SEQIDNO：6的氨基酸序列组成的轻链。20.一种三特异性结合分子，包括结合人IL-17A和人IL-17F的第一结合结构域和结合人TNFα的第二结合结构域，其中所述第一结合结构域包括SEQIDNO：4的氨基酸序列并且所述第二结合结构域包括包含SEQIDNO：5的氨基酸序列的重链，和包含SEQIDNO：6的氨基酸序列的轻链。21.一种与人IL-17A、人IL-17F和人TNFα结合的三特异性结合分子，其中所述结合分子包括SEQIDNO：5和7的氨基酸序列。22.根据权利要求1、20和21中任一项所述的结合分子，其中所述第一结合结构域和所述第二结合结构域通过大于五个氨基酸的肽接头连接。23.根据权利要求22所述的结合分子，其中所述肽接头的氨基酸...

【专利技术属性】
技术研发人员：德米特里·瓦连京诺维奇·莫罗佐夫，安德烈·鲍里索维奇·乌利京，叶卡捷琳娜·塞尔盖夫纳·祖巴列瓦，亚科夫·尤列维奇·乌斯图戈夫，阿勒科山德·弗拉基米罗维奇·卡拉贝尔斯基，德米特里·瓦列里耶维奇·科尔扎温，塔蒂阿娜·韦尼阿米诺夫纳·切尔诺夫斯卡娅，阿勒科山德·瓦列维奇·格拉切夫，尤里·伊万诺维奇·巴索夫斯基，叶卡捷琳娜·亚历山德罗芙娜·洛姆科娃，韦罗妮卡·塞尔盖夫纳·乌萨托娃，阿列克谢·亚历山德罗维奇·亚历山德罗夫，叶连娜·列奥尼多夫纳·莫罗佐娃，罗曼·阿列克谢维奇·伊万诺夫，帕韦尔·阿列克谢维奇·伊科夫列夫，
申请(专利权)人：BIOCAD股份有限公司，
类型：发明
国别省市：俄罗斯,RU