一种大麦条纹病致病性基因PgPBS及其应用制造技术

大麦条纹病是由真菌病原体―麦类核菌引起的种子传播病害，常造成大麦产量严重减产。本发明专利技术涉及一种鉴定大麦条纹病致病基因的方法，基于同源克隆技术扩增PgPBS基因，通过RNA干扰（RNAi）技术获得PgPBS沉默的转化体，进一步获得该基因在渗透反应、营养分化、细胞壁完整性、抗药性和致病性等方面的应用。

【技术实现步骤摘要】
一种大麦条纹病致病性基因PgPBS及其应用
本专利技术属于生物工程
，具体涉及大麦条纹病致病性基因PgPBS及其维持致病菌细胞渗透平衡，保护致病菌细胞壁的完整性，以及沉默该基因降低大麦条纹病致病性的应用。
技术介绍
大麦条纹病是由真菌病原体―麦类核菌（Drechsleragraminea[Rabenh.ex.Schlech.]Shoemaker）引起的种子传播病害，常造成大麦产量严重减产。施用杀真菌剂和抗病育种可以减轻其产量损失，而抗病育种通常被认为是更经济和环保的解决方案。因此，了解该病害的毒性及致病性遗传基础具有重要意义。双组分信号（TCS）系统在细菌，真菌和植物中起到调节细胞运动，控制细胞发育，调控抗生素抗性，致病性和环境应激反应等作用。在TCS途径中，酿酒酵母中的高渗透压甘油（HOG）信号传导途径是最具特征的途径之一。HOG途径包括两个分支SLN1和SHO1。丝裂素活化蛋白激酶激酶（MAPKK）PBS2位于HOG途径的两个分支的交叉处。TCS信号途径的相关研究在麦类禾核腔菌中还未见报道。假设PBS2同源物Pgpbs在HOG信号传导途径中起重要作用。基于同源克隆技术扩增P本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种大麦条纹病致病性基因PgPBS，其特征在于，所述PgPBS序列如序列表SEQ ID NO：1所示。

【技术特征摘要】
1.一种大麦条纹病致病性基因PgPBS，其特征在于，所述PgPBS序列如序列表SEQIDNO：1所示。2.一种鉴定大麦条纹病致病基因的方法，其特征在于，包括如下步骤：（1）大麦条纹病菌株的培养；（2）PgPBS基因的克隆及序列分析；（3）pSilentPgpbs载体的构建；（4）菌株原生质体制备；（5）pSilentPgpbs载体转化；（6）转化菌丝的生长鉴定；（7）致病菌渗透性和细胞壁完整性观察及大麦条纹病致病性鉴定。3.根据权利要求2所述的一种鉴定大麦条纹病致病基因的方法，其特征在于，所述步骤（3）pSilentPgpbs载体的构建将扩增产物得到Pgpbs1和Pgpbs2片段利用真菌沉默载体pSilent-1构建pSilentPgpbs，包含Pgpbs1和Pgpbs2片段的反向重复序列，在采用XhoI和HindⅢ酶将pgpbs1片段和pSilent-1载体消化，通过T4连接酶将pgpbs1片段连接到pSilent-1载体的XhoI-HindⅢ位点，Pgpbs2片段连接到pSilentPgpbs1载体的KpnI-BglⅡ位点。4.根据权利要求2所述的一种鉴定大麦条纹病致病基因的方法，其特征在于，所述步骤（4）菌株原生质体制备采用直径为5-10mm的菌系小块，置于50ml的PDA培养基上进行培养，接着将培养得到的真菌小块置于0.5-1ml的NL溶液中，30℃培养4-10h，其中NL溶液是由0.6MNaCl和250-300mg/mL的细胞裂解酶组成；接着将培养液进行过滤，滤去残渣，将滤液再次置于NL溶液中，3500-4000rpm离心10-15min，收集原生质体，最后将原生质体置于STC溶液中保存。5.根据权利要求2所述的一种鉴定大麦条纹病致病基因的方法，其特征在于，所述步骤（5）pSilentPgpbs载体转化包括：将100μL上述保存原生质体的STC溶液与1-10μg的pSilentPgpbsDNA混合，然后冰浴20-30min；接着将冰浴后的...

【专利技术属性】
技术研发人员：姚立蓉，王化俊，汪军成，梁倩倩，李葆春，孟亚雄，马小乐，杨轲，王刚，马增科，侯静静，胡娜，
申请(专利权)人：甘肃农业大学，
类型：发明
国别省市：甘肃,62