肝外胆道毒素Biliatresone及其制备方法、药物组合物和用途技术

本发明专利技术属医药技术领域，涉及植物中分离纯化的肝外胆道毒素Biliatresone及其制备方法、药物组合物和用途。本发明专利技术的肝外胆道毒素Biliatresone还包括其顺反异构体、对映异构体、非对映异构体、外消旋体、溶剂合物、水合物、或其药学上可以接受的盐和酯，经生物活性实验测试表明该类化合物可显著抑制斑马鱼幼体出现胆囊发育障碍，证实制备的化合物Biliatresone具有生物活性，进一步可作为亲胆道上皮细胞的药物，用于诱导胆道闭锁动物模型的研究。

【技术实现步骤摘要】
肝外胆道毒素Biliatresone及其制备方法、药物组合物和用途
：本专利技术属医药
，涉及植物中分离纯化的肝外胆道毒素Biliatresone及其制备方法、药物组合物和用途。经生物活性测试表明该类化合物可显著抑制斑马鱼幼体出现胆囊发育障碍，证实制备的化合物Biliatresone具有生物活性，进一步可作为亲胆道上皮细胞的药物，用于诱导胆道闭锁动物模型的研究。
技术介绍
：现有技术公开了胆道闭锁(biliaryatresia，BA)是儿童最常见的胆汁淤积性疾病，该疾患以肝内外胆管进行性炎症和纤维性梗阻为主要特征，临床实践显示，若不经手术治疗，患儿通常在2岁前死亡。有研究公开了，尽早(90日龄之前)行肝门空肠吻合术是胆道闭锁的标准治疗方法，但成功应用手术治疗后，仍有80％的患儿胆道损伤及肝纤维化呈进行性发展，最终导致肝硬化和肝衰竭。因而，本领域研究者对胆道闭锁发病机制和防治手段的探索非常迫切并予以关注，但研究显示，大多数胆道闭锁患儿被确诊时，肝外胆管已经闭锁，肝脏纤维化已是晚期，其病因研究受限于手术时机，难以追溯疾病起源时的病理状态，所以胆道闭锁动物模型的开发和应用显得尤为重要。有报道澳大利亚某地牧场曾多次爆发大规模绵羊幼崽胆道闭锁样出生缺陷，其原因与怀孕牲畜在特定时期长期摄食某种刺藜属植物密切相关。近来有国外团队从该属植物中成功分离纯化出一种新型肝外胆道毒素Biliatresone，继而使用天然萃取的Biliatresone处理斑马鱼后，随着处理浓度的升高，斑马鱼幼体的胆囊及胆总管发育缺陷加重；研究还显示，在立体培养胆管上皮细胞的模型中，Biliatresone破坏了其顶端极性及单层细胞的完整性，引起管腔阻塞，与胆道闭锁患者肝外胆道的病理改变相似，该研究结果为胆道闭锁的发生与围产期环境毒素暴露相关的假说提供了直接证据，也为胆道闭锁机制的研究提供了新的切入点。但目前由于萃取天然Biliatresone原料产地单一、纯化技术复杂、产量低等诸多因素，极大限制了Biliatresone诱导胆道闭锁动物模型的深入研究，以致业内对胆道闭锁发病机制和防治手段的探索进展缓慢。基于现有技术的现状，本申请的专利技术人拟提供从植物中分离纯化肝外胆道毒素Biliatresone及其制备方法、药物组合物和用途。
技术实现思路
本专利技术的目的在于针对现有技术的现状，提供从植物中分离纯化肝外胆道毒素Biliatresone及其制备方法、药物组合物和用途。具体的，本专利技术提供了下式的Biliatresone的化合物、其顺反异构体、对映异构体、非对映异构体、外消旋体、溶剂合物、水合物、或其药学上可以接受的盐和酯，本专利技术的进一步目的在于提供Biliatresone化合物的制备方法：本专利技术制备方法包括步骤：1)冰浴下将溶解在DCM中的TBSCl加入含有化合物1和咪唑(2.59g，38mmol)的DCM溶液，自然升到室温反应过夜，TLC原料反应完全，过滤，滤液加水洗，分液，有机相干燥过柱得产品化合物2；所述化合物1合成方法参考文献Clarke，AimeeK.；James，MichaelJ.；etal.AngewandteChemie-InternationalEdition，2016，vol.55，#44p.13798-13802；2)将化合物3溶解到干燥的THF分别加入三口反应瓶中，氩气保护，干冰丙酮浴下滴加正丁基锂，保持-78度反应30min；滴加化合物2后-78度再反应，TLC原料反应完全，加入适量的稀盐酸淬灭反应，加EA萃取，分液，有机相水洗，干燥，过柱得到化合物4；所述的化合物3的合成方法参考文献ShujiJinno，TakaakiOkit，andKuniyoInouye，Bioorganic&MedicinalChemistryLetters9(1999)1029-1032)；3)将化合物4，甲醇，甲醛，乙酸，哌啶分别加入到单口反应瓶中，氩气保护，95度搅拌，TLC原料反应完全，有机相直接趴大板，得化合物5；4)将化合物5，THF，四丁基氟化铵分别加入到单口反应瓶中，氩气保护，室温搅拌，TLC原料基本反应完全，加水和EA，搅拌分液，有机相水洗，干燥有机相过柱，得产物Biliatresone。本专利技术的进一步目的在于提供一种组合物，其包含Biliatresone化合物或其药学上可以接受的盐。本专利技术的进一步目的在于提供Biliatresone化合物或含Biliatresone化合物的组合物在制备治疗或预防与胆道上皮细胞有关的疾病的药物中的用途。本专利技术的进一步目的在于提供一种治疗或预防与胆道上皮细胞有关的疾病的方法，其特征在于向患者施用有效剂量的Biliatresone化合物或含Biliatresone化合物的组合物。本专利技术的进一步目的在于提供Biliatresone化合物或含Biliatresone化合物的组合物在制备胆道闭锁动物模型的试剂中的用途。本专利技术的进一步目的在于提供一种诱导胆道闭锁动物模型的方法，其特征在于向动物施用有效剂量的Biliatresone化合物或含Biliatresone化合物的组合物。本专利技术经生物活性实验测试，表明所制得的Biliatresone化合物能显著抑制斑马鱼幼体出现胆囊发育障碍，证实制备的化合物Biliatresone具有生物活性，进一步，所述化合物以及含有该化合物的药物组合物可作为亲胆道上皮细胞的药物，用于诱导胆道闭锁动物模型的研究。附图说明图1是本专利技术制得的化合物Biliatresone作为亲胆道上皮细胞的药物，用于诱导胆道闭锁动物模型，荧光显微镜拍摄胆囊和肠道显影情况，其中箭头所指为胆囊。具体实施方式实施例1合成Biliatresone化合物按下述合成路线：第一步：冰浴下将溶解在10毫升DCM中的TBSCl(4.3g，28.5mmol)滴加到含有化合物1(合成参考文献Clarke，AimeeK.；James，MichaelJ.；etal.AngewandteChemie-InternationalEdition，2016，vol.55，#44p.13798-13802)(3.7g，18.9mmol)和咪唑(2.59g，38mmol)的70毫升的DCM溶液，约30分钟加毕，加完后自然升到室温反应过夜，TLC原料反应完全，过滤，滤液加水洗，分液，有机相干燥过柱得到产品化合物2，5克，产率85％外观为无色油状物；第二步：将化合物3(540mg，2.06mmol)(合成参考文献ShujiJinno，TakaakiOkit，andKuniyoInouye，Bioorganic&MedicinalChemistryLetters9(1999)1029-1032)溶解到干燥的THF(10毫升)分别加入到50毫升的三口反应瓶中，氩气保护，干冰丙酮浴下滴加正丁基锂(0.25ml，2.5N)约10分钟加毕，保持-78度反应30min，滴加化合物2(200mg，0.65mmol)约5min加毕，加完后-78度再反应1小时，TLC原料反应完全，加入适量的稀盐酸淬灭反应，加20ml的EA萃取，分液，有机相水洗，干燥，过柱得到白色固体135mg，化合物4的产率15％；第三步：将化合物4(50mg，0.本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.如下式的Biliatresone的化合物、其顺反异构体、对映异构体、非对映异构体、外消旋体、溶剂合物、水合物、或其药学上可以接受的盐和酯，

【技术特征摘要】
1.如下式的Biliatresone的化合物、其顺反异构体、对映异构体、非对映异构体、外消旋体、溶剂合物、水合物、或其药学上可以接受的盐和酯，2.如权利要求1所述的化合物的合成制备方法，其特征在于，其按下述合成路线：所述的制备方法包括步骤：1)冰浴下将溶解在DCM中的TBSCl加入含有化合物1和咪唑的DCM溶液，自然升到室温反应过夜，TLC原料反应完全，过滤，滤液加水洗，分液，有机相干燥过柱得产品化合物2；2)将化合物3溶解到干燥的THF分别加入三口反应瓶中，氩气保护，干冰丙酮浴下滴加正丁基锂，保持-78度反应；滴加化合物2后-78度再反应，TLC原料反应完全，加入适量的稀盐酸淬灭反应，加EA萃取，分液，有机相水...

【专利技术属性】
技术研发人员：郑珊，董瑞，杨一凡，
申请(专利权)人：复旦大学附属儿科医院，
类型：发明
国别省市：上海,31