一种基于拉曼-荧光双模式探针的活细胞内细胞色素c的检测方法技术

本发明专利技术公开了一种基于拉曼‑荧光双模式探针的活细胞内细胞色素c的检测方法，所述检测方法是基于表面增强拉曼散射和荧光共振能量转移的“开‑关”转换，通过在金三角片(AuNTs)上组装细胞色素c(Cyt c)的适配体及其部分互补的修饰荧光团Cy5的DNA构建的纳米传感器实现双重信号的检测。本发明专利技术方法能够同时检测用拉曼和荧光两种信号同时检测活细胞内Cyt c，且检测特异性强、灵敏度高、准确度高，与ELISA相比误差小于5％。

【技术实现步骤摘要】
一种基于拉曼-荧光双模式探针的活细胞内细胞色素c的检测方法
本专利技术涉及纳米材料和生命科学领域，尤其是涉及一种基于拉曼-荧光双模式探针的活细胞内细胞色素c(Cytc)的定量检测方法。
技术介绍
细胞凋亡是程序性细胞死亡的过程，是一种复杂且高度调节的过程，对细胞生长和增殖具有显着影响。作为早期凋亡的重要生物标志物，细胞色素c(Cytc)被认为是内在凋亡途径的关键组分，并且通常表明细胞凋亡中的无回归点。在正常条件下，Cytc存在于细胞中线粒体膜的顶部，充当Cytc还原酶和Cytc氧化酶之间的线粒体膜空间中的电子载体。当细胞处于病理条件下时，线粒体膜孔开放，Cytc从线粒体释放到细胞质中，激活caspase凋亡蛋白家族，扩增死亡受体途径，导致细胞凋亡或坏死。因此，细胞质中Cytc含量的增加可被视为早期细胞凋亡的信号。许多物质都会引起细胞凋亡，包括食物中的许多毒素。研究毒素对细胞的影响主要涉及细胞毒理学。在毒理学实验中，大多数细胞状态的研究需要荧光染色，从而抑制了细胞的实时观察。此外，它无法精细地观察细胞内物质的变化。因此，开发一种不需要染色并且可以实时监测细胞内物质和细胞状态变化的毒理学本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种基于拉曼‑荧光双模式探针的活细胞内细胞色素c的检测方法，其特征在于，所述检测方法是基于表面增强拉曼散射和荧光共振能量转移的“开‑关”转换，通过在AuNTs上组装Cyt c的适配体及其部分互补的修饰荧光团Cy5的DNA构建的纳米传感器实现双重信号的检测。

【技术特征摘要】
1.一种基于拉曼-荧光双模式探针的活细胞内细胞色素c的检测方法，其特征在于，所述检测方法是基于表面增强拉曼散射和荧光共振能量转移的“开-关”转换，通过在AuNTs上组装Cytc的适配体及其部分互补的修饰荧光团Cy5的DNA构建的纳米传感器实现双重信号的检测。2.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述拉曼-荧光双模式探针是由AuNTs修饰Cytc的适配体、与其适配体部分互补配对的修饰Cy5的互补链制得。3.根据权利要求2所述的检测方法，其特征在于，所述拉曼-荧光双模式探针的制备方法包括如下步骤：(1)制备金种子：将50μL25mM的HAuCl4溶液加入到4.7mL的0.1MCTAC溶液中，在剧烈搅拌下注入300μL新鲜制备的预冷的10mMNaBH4溶液，溶液由淡黄色变成橘色后在室温下静置2h以消耗过量的NaBH4，备用；(2)制备AuNTs：将制备的种子用0.1MCTAC溶液稀释10倍后，接着制备两种生长液：(2a)将1.6mL0.1MCTAC溶液加入8mL超纯水中，再加入40μL50mMHAuCl4和15μL10mMNaI，制得生长液A；(2b)将500μL50mMHAuCl4加入到40mL0.05MCTAC中，然后加入300μL10mMNaI，制得生长液B；(2c)将40μL与400μL的0.1M抗环血酸溶液分别加入到生长液A与B中，并且搅拌至两种溶液由浅黄色至完全透明，然后将100μL稀释的种子加入到生长液A中，搅拌不超过5s后，立即将3.2mL该溶液加入到生长液B中并搅拌5s，最后将生长液B在室温下静置1h，1h后继续像生长液B中添加5mL25％CTAC溶液，过夜后吸除上清，将沉淀重悬在5mL超纯水中；(3)制备拉曼-荧光双模式探针：(3a)在重悬的AuNTs中加入SH-PEG-COOH溶液并且不断搅拌1h，以3000rpm的转速离心10min，将DNA溶液置于高于Tm温度的水浴中5min；(3b)然后将Cytc适配体DNA1溶液加入到AuNTs中，使DNA1终浓度为1μM，混合液置于摇床中...

【专利技术属性】
技术研发人员：马小媛，张京娜，王周平，
申请(专利权)人：江南大学，
类型：发明
国别省市：江苏,32