一种胶体金法半定量检测人转铁蛋白受体CD71检测试剂盒制造技术

本实用新型专利技术公开了一种胶体金法半定量检测人转铁蛋白受体CD71检测试剂盒，其包括：底板、吸水纸、NC膜、结合垫以及样品垫，所述NC膜位于所述底板上，所述结合垫的一部分贴合于所述NC膜的一端，所述样品垫位于所述结合垫上部，所述吸水纸一部分与所述NC膜的另一端贴合，所述结合垫上包被有胶体金标记的CD71单克隆抗体，所述NC膜上分别设有检测线和质控线，所述检测线上包被有ABC71单克隆抗体，所述质控线上包被有羊抗鼠IgG。本实用新型专利技术采用双抗夹心侧向层析法，通过针对人转铁蛋白受体的ABC71单克隆抗体作为捕获抗体，以胶体金为标记载体，实现了简单、快速、精准地半定量检测人体液中转铁蛋白受体含量的目的。

【技术实现步骤摘要】
一种胶体金法半定量检测人转铁蛋白受体CD71检测试剂盒
本技术涉及免疫层析法生物技术检测
，具体涉及一种胶体金法半定量检测人转铁蛋白受体CD71检测试剂盒。
技术介绍
转铁蛋白受体(TfR)是细胞膜转运蛋白，广泛地存在于人的多种细胞胞膜上，如胎盘绒毛滋养层合体细胞、合成Hb的幼红细胞以及活跃的肿瘤细胞等。TfR分为2种亚型，即TfR1和TfR2。TfR1是一种介导细胞内铁摄取并能调节细胞生长相关的II型跨膜蛋白，由完全相同的2条单体通过第89和92位上的胱氨酸残基形成的两条二硫键连接而成。每条单体含780个氨基酸残基，分子量90kD，分为3个区域，N端的61个氨基酸残基处于细胞内，C端的671个氨基酸残基处于细胞外，中间的28个氨基酸氨基为跨膜区。其C端区域为外功能区，包含3个N糖基化位点和1个O糖基化位点，同TF介导的胞内转运是细胞获得铁元素的重要方式。TfR2则主要表达于肝脏，N端的80个氨基酸组成胞内区，24个氨基酸组成跨膜区，C端的696个氨基酸残基组成胞外区。其胞外区与TfR1氨基酸序列45％一致，66％同源。实际测定的是人体液中的可溶性TfR，即sTfR。sTfR分子量75kD，是由TfR1胞外区的100-101氨基酸之间的肽键断裂形成，胞外分泌后与Tf结合，与TfR1保持一定比例，主要分布于人的血液中，分泌物(如唾液)及排泄物中(如尿液、粪便)也含有少量。可溶性转铁蛋白受体sTfR目前主要用于人缺铁性疾病的判断，其含量的多少直接反映了人体内铁含量的缺乏或过剩，对于区分贫血病人是缺铁性贫血或其他慢性疾病引起的贫血以及人体内红细胞生成的评价有一定参考意义。并且，癌细胞的生成经常伴随着TfR大量的表达，因此sTfR的含量检测能为某些癌症的早期诊断提供辅助依据。目前经临床研究，鼻咽癌、肝癌、血液系统肿瘤以及乳腺癌、胃癌、膀胱癌等大多数恶性肿瘤病人都伴随有TfR的大量表达，其含量直接预示了肿瘤细胞的增殖活性。由于转铁蛋白受体与肿瘤细胞存在密切关系，目前其用于癌症的辅助诊断和作为载体用于癌症的治疗成为研究热点。目前市面上用来测定sTfR含量的试剂盒不在少数，但一般局限在酶联免疫吸附法、免疫比浊法等。酶联免疫法虽有较好的线性和灵敏度，但操作过程烦琐，整个检测过程至少需要4小时以上的时间，对检测样品数量也有最低要求；免疫比浊法则对抗原与标记物形成的分子量及数量有一定的要求，否则比较难以测定。由此可见，传统的检测方法检测时间长，操作过程复杂，检测的准确度低，亟待进一步改进。
技术实现思路
本技术的目的在于提供一种胶体金法半定量检测人转铁蛋白受体CD71检测试剂盒，用以解决现有检测试剂盒操作时间长，操作过程复杂，检测准确度低的缺陷。为实现上述目的，本技术提供一种胶体金法半定量检测人转铁蛋白受体CD71检测试剂盒，其包括：底板、吸水纸、NC膜、结合垫以及样品垫，所述NC膜位于所述底板上，所述结合垫的一部分贴合于所述NC膜的一端，所述样品垫位于所述结合垫上部，所述吸水纸一部分与所述NC膜的另一端贴合，所述结合垫上包被有胶体金标记的CD71单克隆抗体，所述NC膜上分别设有检测线和质控线，所述检测线上包被有ABC71单克隆抗体，所述质控线上包被有羊抗鼠IgG。优选的，所述胶体金颗粒大小为30±10nm。优选的，所述CD71单克隆抗体的胶体金结合浓度为45-55ug/ml，最佳标记pH为8.0。优选的，所述ABC71单克隆抗体的包被浓度为1-4ug/cm。优选的，所述山羊抗小鼠IgG的包被浓度为1ug/cm。优选的，所述检测试剂盒还包括比色卡，所述比色卡上显示有对应的检测线显示颜色的深浅度，其对应的检测样品中含有CD71抗体浓度的范围为0.5-8mg/L。优选的，所述胶体金的通过以下方法制备：量取0.01％的氯金酸水溶液100ml搅拌加热煮沸，然后迅速加入2ml的1％的枸橼酸三钠溶液，持续煮沸5-10min，直到溶液变为橙红色。优选的，所述胶体金标记的CD71单克隆抗体通过以下方法制的：取胶体金溶液，用0.2M的碳酸钾溶液调节pH＝8.0，按照抗体：胶体金＝50ug：1ml的比例加入CD71单克隆抗体，室温搅拌20min，然后加入10％胶体金溶液至终浓度0.5％，搅拌10min，离心去上清，沉淀采用同体积复溶液复溶。优选的，所述复溶液体复溶液的成分为50mMPB缓冲液，pH8.0、0.5％BSA、5％蔗糖、2％吐温、0.05％叠氮钠。本技术具有如下优点：本技术采用双抗夹心侧向层析法，通过针对人转铁蛋白受体的ABC71单克隆抗体作为捕获抗体，以胶体金为标记载体，实现了简单、快速、精准地半定量检测人体液中转铁蛋白受体含量的目的。可以半定量地检测人血清或其他样本中的CD71含量。本技术的检测试剂盒结构简单、快速、准确地半定量测定人体液中转铁蛋白受体含量的基于胶体金免疫层析技术的检测试剂盒。其具有灵敏度高，特异性好的优点。附图说明图1本技术胶体金法半定量检测人转铁蛋白受体CD71检测试剂盒的结构示意图。图2本技术胶体金法半定量检测人转铁蛋白受体CD71检测试剂盒的标准比色卡。具体实施方式以下实施例用于说明本技术，但不用来限制本技术的范围。实施例1如图1所示，本技术的胶体金法半定量检测人转铁蛋白受体CD71检测试剂盒，本试剂盒采用的检测方法学为双抗夹心法，将ABC71小鼠单抗捕获抗体，将商品化的CD71小鼠单抗作为检测抗体，羊抗鼠IgG作为质控抗体。其包括：PVC底板500、吸水纸400、NC膜300、结合垫200以及样品垫100，NC膜300位于底板500上，结合垫200的一部分贴合于NC膜500的一端，样品垫100位于结合垫200上部，吸水纸400一部分与NC膜300的另一端贴合，结合垫200上包被有胶体金标记的CD71单克隆抗体，结合垫200由胶体金标记的CD71单克隆抗体(Abcam，ab1086)均匀喷于聚酯膜材料烘干而成；NC膜300上分别设有检测线310和质控线320，检测线310上包被有ABC71单克隆抗体，ABC71单克隆抗体的包被浓度为1-4ug/cm。质控线320上包被有羊抗鼠IgG，羊抗小鼠IgG的包被浓度为1ug/cm，检测线310位于靠近结合垫200的一端，质控线320位于靠近吸水垫400的一端。本技术的检测试剂盒结合ABC71单克隆抗体作为捕获抗体，具有良好的特异性和较高的灵敏度，具有方便、快速、经济实用的优点。其中，样品垫100采用硼酸盐缓冲液、吐温、牛血清白蛋白的混合溶液进行浸泡处理，以增加试剂盒的稳定性和精密度。本技术的检测试剂盒的检测样本采用血清或尿液，可直接上样检测。也可采用唾液或粪便等，但上样前需采用磷酸缓冲液进行稀释离心等预处理步骤，稀释比例为1:2-1:5。样品垫100是将玻璃纤维裁至合适尺寸，采用样品垫处理液浸泡5min后取出，37℃恒温干燥箱过夜烘干后使用。结合垫200是将胶体金标记的CD71采用复溶液稀释2-5倍，3-5ul/cm均匀地喷于聚酯膜，37℃恒温干燥箱烘干2-4小时形成的。NC膜的包被：将NC膜贴至PVC底板的指定区域，然后将ABC71单克隆抗体、羊抗小鼠IgG均采用PBS稀释成2mg/ml和本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种胶体金法半定量检测人转铁蛋白受体CD71检测试剂盒，其特征在于，所述检测试剂盒包括：底板、吸水纸、NC膜、结合垫以及样品垫，所述NC膜位于所述底板上，所述结合垫的一部分贴合于所述NC膜的一端，所述样品垫位于所述结合垫上部，所述吸水纸一部分与所述NC膜的另一端贴合，所述结合垫上包被有胶体金标记的CD71单克隆抗体，所述NC膜上分别设有检测线和质控线，所述检测线上包被有ABC71单克隆抗体，所述质控线上包被有羊抗鼠IgG。

【技术特征摘要】
1.一种胶体金法半定量检测人转铁蛋白受体CD71检测试剂盒，其特征在于，所述检测试剂盒包括：底板、吸水纸、NC膜、结合垫以及样品垫，所述NC膜位于所述底板上，所述结合垫的一部分贴合于所述NC膜的一端，所述样品垫位于所述结合垫上部，所述吸水纸一部分与所述NC膜的另一端贴合，所述结合垫上包被有胶体金标记的CD71单克隆抗体，所述NC膜上分别设有检测线和质控线，所述检测线上包被有ABC71单克隆抗体，所述质控线上包被有羊抗鼠IgG。2.如权利要求1所述的检测试剂盒，其特征在于，所述胶体金颗粒大小为30±10n...

【专利技术属性】
技术研发人员：李翀，赵文博，杨昭，康星，张旭，朱学加，王建华，
申请(专利权)人：北京迈迪金生物科技股份有限公司，北京中达健科生物科技有限公司，
类型：新型
国别省市：北京,11