从丽江山荆子中制备根皮苷的方法技术

本发明专利技术涉及从丽江山荆子中制备根皮苷的方法，属于植物有效成分提取分离领域。以本发明专利技术制备根皮苷的提取率高达7%以上，纯度大于95%。本发明专利技术开发了丽江山荆子的一种新用途，提供了一种获取根皮苷的新途径。

【技术实现步骤摘要】
从丽江山荆子中制备根皮苷的方法
：本专利技术属于植物有效成分提取分离领域，具体地，涉及从丽江山荆子中提取制备根皮苷的方法。技术背景：根皮苷（phloridzin）为黄酮类中的二氢查尔酮类物质，是根皮素的葡萄糖苷，化学名称为1-(2-(β-D-吡喃葡萄糖氧基)-4,6-二羟基苯基)-3-(4-羟基苯基)-丙酮。据文献报道，根皮苷具有降低血糖、改善记忆力、抗过敏、抗癌、抗氧化等多种重要的生物活性，在食品、美容和保健品行业都有潜在的利用价值（根皮苷药效作用研究进展[J].广东药学院学报,2015,31(6):833-836.）。根皮苷主要存在于蔷薇科苹果树的根皮、茎、嫩叶以及苹果果实中，1835年由法国化学家Petersen从苹果树皮中首次分离得到。根皮苷在菊科、杜鹃花科、豆科、壳斗科、百合科等植物中也有少量存在，但在壳斗科石柯属植物甜茶多穗石柯中发现有大量的根皮苷存在。近年来，在荔枝果皮、杜梨叶、锁阳等植物中也发现有根皮苷的存在，其含量都较少。总的说来，苹果树的根皮、茎、嫩叶、苹果果实以及多穗石柯是根皮苷的主要来源，可以作为提取根皮苷的原料加以利用（根皮苷研究进展[J].食品与发酵工业,2013,39(8):182-184+186+185.）。苹果树枝、叶、树皮和果实等中都含有大量的根皮苷，根皮苷在苹果果实中的分布集中在种子和果皮上。HPLC方法测定发现苹果树皮中根皮苷含量最高为6.4%，树枝和树叶中仅有3%-4%（Phloridzin:Biosynthesis,distributionandphysiologicalrelevanceinplants[J].Phytochemistry,2010,71(8):838-843;RP-HPLC法测定苹果树枝、叶中根皮苷的含量[J].食品工业科技,2009,30(12):385-388;苹果树枝和叶中根皮苷及根皮素含量变化研究[J].食品研究与开发,2013,34(7):95-98.）。丽江山荆子（MalusrockiiRehd.）为蔷薇科（Rosaceae）苹果属（Malus）植物，乔木，高8-10米；产云南西北部、四川西南部和西藏东南部。生山谷杂木林中，海拔2400-3800米。据《中国中药资源志要》记载，其种仁具有活血化瘀功效，用于治疗跌打损伤。至今，国内外未见丽江山荆子化学成分的研究报道。
技术实现思路
：本专利技术旨在提供从丽江山荆子枝叶或全株中提取制备根皮苷的方法，本方法根皮苷提取率高达7%以上。本专利技术所述的根皮苷结构式如下：或本专利技术的上述目的是通过下面的技术方案得以实现的：丽江山荆子中根皮苷的制备方法，取丽江山荆子植物的枝叶或全株晾干或晒干或烘干，粉碎到20-30目，用有机溶剂丙酮或甲醇或乙醇或水或任意比例的前述二者混合溶液进行提取，提取所得浸膏进行柱层析或柱层析结合重结晶技术得到根皮苷，或提取所得浸膏以水混悬后用乙酸乙酯萃取，再结合柱层析或重结晶技术得到根皮苷。本专利技术丽江山荆子中根皮苷的制备方法更具体地是用：1.取丽江山荆子植物的枝叶或全株晾干或晒干或烘干，粉碎到20-30目，用有机溶剂丙酮或甲醇或乙醇或水或任意比例的前述二者混合溶液在室温条件下浸提2-5次，每次12-72h，合并提取液，提取液浓缩得浸膏。或将丽江山荆子植物的枝叶或全株干燥，粉碎到20-30目，用有机溶剂丙酮或甲醇或乙醇或水或任意比例的前述二者混合溶液在80–120oC条件下回流提取2-5次，每次2-8h，合并提取液，提取液浓缩得浸膏。或将丽江山荆子植物的枝叶或全株干燥，粉碎到20-30目，用有机溶剂丙酮或甲醇或乙醇或水或任意比例的前述二者混合溶液在超声或者微波等辅助手段下提取2-5次，每次10-150min，合并提取液，提取液浓缩得浸膏。提取时，每次用溶剂量为浸泡药渣重量的5–25倍。2.上述1中所得丽江山荆子提取物浸膏用硅胶拌样，然后用柱层析硅胶进行分离，以1:0-0:1氯仿∕丙酮或1:0-0:1氯仿∕甲醇进行梯度洗脱，其中5:5氯∕丙洗脱部分或9:1和8:2氯∕甲洗脱部分回收溶剂即得纯度在85%以上的根皮苷粗品。根皮苷粗品经低浓度甲醇/水或乙醇/水（10%-60%）重结晶或者重复前述硅胶柱层析或大孔树脂柱层析（30%-50%甲醇/水或乙醇/水洗脱）可得95%以上纯度的根皮苷纯品。3.或上述1中所得丽江山荆子提取物浸膏用水溶解后，进行大孔树脂柱层析分离，以甲醇-水或乙醇-水进行梯度洗脱，其中30%-50%醇水洗脱部分回收溶剂即得纯度在80%以上的根皮苷粗品。根皮苷粗品经低浓度甲醇/水或乙醇/水（10%-60%）重结晶或者重复前述大孔树脂柱层析（30%-50%甲醇/水或乙醇/水洗脱）或硅胶柱层析（5:5氯∕丙或9:1和8:2氯∕甲洗脱）可得95%以上纯度的根皮苷纯品。4.或上述1中所得丽江山荆子提取物浸膏用水溶解后，用乙酸乙酯萃取，得纯度在60%以上的根皮苷粗品。根皮苷粗品经低浓度甲醇/水或乙醇/水（10%-60%）重结晶或者大孔树脂柱层析（30%-50%甲醇/水或乙醇/水洗脱）或硅胶柱层析（5:5氯∕丙或9:1和8:2氯∕甲洗脱）可得95%以上纯度的根皮苷纯品。5.本专利技术中所述柱层析硅胶和大孔树脂是指天然产物提取分离领域常规的分离材料。具体实施方式：下面用本专利技术的实施例来进一步说明本专利技术的实质性内容，可以使本专业人员更全面地理解本专利技术，但不以任何方式限制本专利技术。实施例1：本专利技术丽江山荆子中根皮苷的制备：将丽江山荆子枝叶自然晾干（1kg），粉碎到20-30目，用95%乙醇在室温条件下浸提3次，每次10L、24h，合并提取液，旋转蒸发仪上减压浓缩提取液得浸膏（164g）。所得提取物浸膏用适量甲醇溶解后用80-100目硅胶拌样，然后用200-300目硅胶进行柱层析，以1:0-0:1氯仿∕丙酮进行梯度洗脱，其中5:5氯∕丙洗脱部分回收溶剂得纯度在85%以上的根皮苷粗品。根皮苷粗品经浓度为30%的甲醇-水重结晶，得纯度为98%的根皮苷纯品。实施例2：本专利技术丽江山荆子中根皮苷的制备：将丽江山荆子枝叶自然晾干（0.5kg），粉碎到20-30目，用95%乙醇在95oC条件下回流提取2次，每次3h，合并提取液，旋转蒸发仪上减压浓缩提取液得浸膏（96g）。所得提取物浸膏用适量水溶解后进行大孔树脂柱层析分离，以甲醇-水进行梯度洗脱，其中30%-50%醇水洗脱部分回收溶剂得纯度在80%以上的根皮苷粗品。根皮苷粗品经浓度为30%的甲醇-水重结晶，得纯度为97%的根皮苷纯品。实施例3：本专利技术丽江山荆子中根皮苷的制备：将丽江山荆子枝叶自然晾干（0.8kg），粉碎到20-30目，用95%乙醇在超声辅助下提取3次，每次45min，合并提取液，旋转蒸发仪上减压浓缩提取液得浸膏（135g）。所得提取物浸膏用适量水溶解后用乙酸乙酯进行萃取，萃取物经大孔树脂柱层析，以甲醇-水进行梯度洗脱，其中30%-50%醇水洗脱部分回收溶剂得纯度在85%以上的根皮苷粗品。根皮苷粗品经浓度为30%的甲醇-水重结晶，得纯度为98.5%的根皮苷纯品。实施例4：本专利技术丽江山荆子中根皮苷的物理和光谱数据：根皮苷（phloridzin）：C21H24O10，无色针状结晶（水）。1H-NMR(400MHz,CD3OD)δ:13.78(1本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.丽江山荆子中根皮苷的制备方法，其特征在于，用有机溶剂丙酮或甲醇或乙醇或水或任意比例的前述二者混合溶液进行提取，提取所得浸膏进行柱层析或柱层析结合重结晶技术得到根皮苷，或提取所得浸膏以水混悬后用乙酸乙酯萃取，再结合柱层析或重结晶技术得到根皮苷。

【技术特征摘要】
1.丽江山荆子中根皮苷的制备方法，其特征在于，用有机溶剂丙酮或甲醇或乙醇或水或任意比例的前述二者混合溶液进行提取，提取所得浸膏进行柱层析或柱层析结合重结晶技术得到根皮苷，或提取所得浸膏以水混悬后用乙酸乙酯萃取，再结合柱层析或重结晶技术得到根皮苷。2.权利要求1所述丽江山荆子中根皮苷的制备方法，其特征在于将取丽江山荆子植物的枝叶或全株晾干或晒干或烘干，粉碎到20-30目，用有机溶剂丙酮或甲醇或乙醇或水或任意比例的前述二者混合溶液在室温条件下提取，或将丽江山荆子植物的枝叶或全株干燥，粉碎到20-30目，用有机溶剂丙酮或甲醇或乙醇或水或任意比例的前述二者混合溶液回流提取，或将丽江山荆子植物的枝叶或全株干燥，粉碎到20-30目，用有机溶剂丙酮或甲醇或乙醇或水或任意比例的前述二者混合溶液在超声或者微波等辅助手段下提取。3.权利要求1所述丽江山荆子中根皮苷的制备方法，其特征在于将权利要求2中所得丽江山荆子提取物浸膏用硅胶拌样，然后用柱层析硅胶进行分离，以氯仿∕丙酮或氯仿∕甲醇进行梯度洗脱得根皮苷粗品，根皮苷粗品经低浓度醇水（10%-60%）...

【专利技术属性】
技术研发人员：肖朝江，姜北，沈怡，郎利娟，朱起杰，董相，陈浩，
申请(专利权)人：大理大学，
类型：发明
国别省市：云南,53