一种虚证肿瘤恶病质模型的建立方法技术

本发明专利技术提供了一种虚证肿瘤恶病质模型的建立方法。该方法包括，同时采用苦寒泻下、饥饱失常、力竭运动三因素诱导法建立虚症小鼠模型，诱导7‑15天；对所得到的虚症小鼠接种C26结肠腺癌细胞，得到虚证肿瘤恶病质模型；接种后同时采用苦寒泻下、饥饱失常两因素诱导法，继续诱导15‑18天。其中，选用体重、胸腺重、脾脏重、胃泌素含量等作为虚症观察指标。可以利用上述方法建立的动物模型研究虚症肿瘤恶病质或对治疗虚症肿瘤恶病质的药物进行筛选。

【技术实现步骤摘要】
一种虚证肿瘤恶病质模型的建立方法
本专利技术属于医疗评价、检测
，具体涉及一种用于虚证肿瘤恶病质模型的建立方法，该建立方法建立的模型可以用于研究虚症恶病质或筛选治疗虚证恶病质的药物。
技术介绍
恶性肿瘤已成为危害人类身心健康最严重的疾病并呈不断上升趋势，无论在发达国家还是发展中国家，恶性肿瘤都是造成5岁以上人口死亡的前三位死因之一。其中影响肿瘤患者生存的一个重要原因是，大部分肿瘤患者在病程后期均发生肿瘤恶病质(cancercachexia)现象。恶病质(cachexia)又称消耗综合症，是一种严重的机体代谢紊乱，主要表现为肌肉、脂肪的丧失并伴有体重减轻、疲劳和虚弱。肿瘤恶病质是恶性肿瘤的常见致死因素，并且直接影响临床治疗效果，导致并发症增加，患者生活质量下降，生存期缩短，住院天数延长和医疗费用增加。据临床医学报告，50-80％的癌症病人在疾病晚期发生恶病质，因肿瘤死亡的患者中有20％的人是死于肿瘤恶病质。因此，恶性肿瘤病人的恶病质的防治已成为恶性肿瘤多学科综合治疗的重要组成部分。但是，恶病质的病理机制还不完全清楚，针对于恶病质进行药物开发的研究更是还没有突破性的结果，没有特异针对肿瘤恶病质的治疗药物。当前的临床常用治疗方法是姑息治疗(营养支持)，即使用激素进行食欲治疗，并辅以身体锻炼和心理辅导等，达到增加体重、刺激食欲的目的。临床运用结果显示，这些手段还是难以达到非常有效的治疗目的。值得注意的是，我国的临床实践结果提示中医药治疗体系对肿瘤恶病质具有较好的治疗效果。肿瘤恶病质在中医学中并无对应病名，根据其临床表现一般将之归属于“虚劳”范畴。“虚劳”最早在《金匮要略》中提出，认为其发病的病理机制为五脏阴阳气血虚损。正虚为癌瘤发病之根本，毒瘀并存是癌瘤发生的致病因素。虚劳多由积渐成，大抵病久体羸叫“虚”，久虚不复叫“损”，损极不复谓“劳”，因邪毒鸱张，正气亏损所致，此时，攻之不得，补之不受。这一理论与肿瘤恶病质的发生过程相吻合。癌症患者中发生恶病质的50-80％患者其体质肯定有其特殊性，这些患者很可能具有虚性体质，虚性体质在肿瘤病的压力下诱发虚劳即恶病质。近年来，中医工作者依据对肿瘤恶病质的证候分析，基于恶病质的虚证表现，从扶正、益气、健脾等不同的角度入手，对恶病质采用中药防治，取得了较满意的疗效。这些结果提示了肿瘤恶病质与中医虚证之间存在的可能相关性及建立相应的虚证肿瘤恶病质病证结合模型的可行性和必要性。本专利技术中将传统虚证证候模型与目前国际认可的肿瘤恶病质模型结合，建立病证结合模型，所建立的模型将可以用于肿瘤恶病质的病理研究及相关药物筛选。
技术实现思路
本专利技术虚证肿瘤恶病质模型建立中，首先建立虚证小鼠模型，然后对虚证小鼠模型与肿瘤恶病质模型进行叠加实现了病证结合动物模型。本专利技术根据“先证后病”达到病证结合的研究思路，确定了虚证肿瘤恶病质病证结合模型的制作方法。采用三因素法(苦寒泻下、饥饱失常、力竭运动)建立小鼠虚证状态，并选用体重、胸腺重、脾脏重、胃泌素(GAS-17)含量等作为虚症观察指标；采用C26结肠腺癌接种法制备肿瘤恶病质模型，并选取肿瘤恶病质相关生物学指标变化敏感时间作为取材时间点。根据上述理论，本专利技术提供了一种虚证肿瘤恶病质模型的建立方法，其包括如下步骤：(1)同时采用苦寒泻下、饥饱失常、力竭运动三因素诱导法建立虚症小鼠模型，诱导7-15天；(2)对步骤(1)中得到的虚症小鼠接种C26结肠腺癌细胞，得到虚证肿瘤恶病质模型；(3)接种后同时采用苦寒泻下、饥饱失常两因素诱导法，继续诱导15-18天。本专利技术中，所用小鼠优选为BALB/c雄性小鼠，8周龄，体重约为24±2g。苦寒泻下诱导法为：每日上午定时(如7-9时)灌胃番泻叶煎剂，优选给药剂量为0.5～0.7mL。所述番泻叶煎剂由番泻叶加水煎煮得到，每1g番泻叶生药用水煎至获得1mL番泻叶煎剂。饥饱失常诱导法为：隔日进食，自由饮水。力竭运动诱导法为：每日下午定时(如下午1时)对小鼠进行跑步训练或游泳训练，强迫小鼠跑步达到力竭状态。优选地，跑步训练使用小鼠转轮式疲劳仪进行(如YLS-10B型小鼠转轮式疲劳仪)；而且，由于小鼠在转轮式疲劳仪上有逃避电击的学习行为，更优选采用游泳训练实现力竭运动诱导法。使用跑步训练达到力竭状态的，力竭标准是疲劳仪(如YLS-10B型小鼠转轮式疲劳仪)转速设置在30r/min，小鼠30min内休息15次，每次休息时间在30s以上，即可判断为力竭状态。使用游泳训练达到力竭状态的，力竭标准为小鼠表现慌张、四肢动作不协调甚至出现下沉现象，每日力竭2次，间隔10min。作为优选的技术方案，苦寒泻下诱导法中，由于小鼠对苦寒泻下会有一定的适应能力，故可以在前期给予较低的番泻叶煎剂剂量，如0.5mL，之后每一天或每2天以上提高所述番泻叶煎剂剂量。力竭运动诱导法中，采用游泳训练达到力竭状态，游泳训练优选采用负重游泳法，使小鼠尾部负重小鼠体重5％，27-30℃水温中强迫游泳。步骤(2)中的接种方式优选为小鼠腋下接种C26结肠腺癌细胞，C26结肠腺癌细胞用生理盐水稀释到浓度为1×105-2×105个细胞/mL，接种剂量0.1-0.2mL/只。本专利技术还提供了一种更优选地虚证肿瘤恶病质模型的建立方法，其包括如下步骤：(1)采用苦寒泻下、饥饱失常、力竭运动三因素诱导法建立虚症小鼠模型，诱导10天；(2)对虚症小鼠接种C26结肠腺癌细胞；(3)接种后同时采用苦寒泻下、饥饱失常两因素诱导法，继续诱导16天；其中，小鼠采用BALB/c雄性小鼠，8周龄，体重24±2g；苦寒泻下诱导法：第1～16天，每日上午定时(如8时)灌喂番泻叶煎剂0.5mL(每1g番泻叶生药提取得到1mL番泻叶煎剂)，第17天～26天每日上午8时灌喂番泻叶煎剂0.7mL(每1g番泻叶生药提取得到1mL番泻叶煎剂)；饥饱失常诱导法：隔日禁食，自由饮水；力竭运动诱导法：每日下午1时，在27-30℃水中，对小鼠进行尾部负重5％游泳训练，强迫小鼠跑步达到力竭状态；力竭判断标准为小鼠表现慌张、四肢动作不协调甚至出现下沉现象，每日力竭2次，间隔10min；步骤(2)中的接种方式为小鼠腋下接种C26结肠腺癌细胞，C26结肠腺癌细胞用生理盐水稀释到浓度为1×105个细胞/mL，接种剂量0.1mL/只。本专利技术还涉及使用根据上述的虚证肿瘤恶病质模型的建立方法建立的模型筛选对于治疗虚症肿瘤恶病质的药物的方法，该方法包括：a)将模型分为空白对照组、药物对照组；b)将待筛选的药物以治疗有效量分别给药至不同的药物对照组，空白对照组不给药；c)在给药一个有效的治疗周期后，检查不同组中的模型的体重、腓肠肌重、附睾脂肪重、脾脏重、胸腺重或胃泌素(GAS-17)含量指标的变化，根据药物对照组和空白对照组在上述六个指标中的一个以上指标中的显著统计学差异来筛选对于治疗虚症肿瘤恶病质的药物。本专利技术还涉及根据上述的用于虚证肿瘤恶病质模型的建立方法建立的模型在筛选对于治疗虚症肿瘤恶病质的药物中的用途。本专利技术通过观察虚症肿瘤恶病质模型小鼠在体重、腓肠肌重、附睾脂肪重、脾脏重、胸腺重、胃泌素(GAS-17)含量等指标的变化，建立该模型的评价体系。本专利技术可以利用上述方法建立的动物模型研究虚症肿瘤恶病质或对治疗虚症肿瘤恶病质本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种虚证肿瘤恶病质模型的建立方法，其特征在于，包括如下步骤：(1)同时采用苦寒泻下、饥饱失常、力竭运动三因素诱导法建立虚症小鼠模型，诱导7‑15天；(2)对步骤(1)中得到的虚症小鼠接种C26结肠腺癌细胞，得到虚证肿瘤恶病质模型；(3)接种后同时采用苦寒泻下、饥饱失常两因素诱导法，继续诱导15‑18天。

【技术特征摘要】
1.一种虚证肿瘤恶病质模型的建立方法，其特征在于，包括如下步骤：(1)同时采用苦寒泻下、饥饱失常、力竭运动三因素诱导法建立虚症小鼠模型，诱导7-15天；(2)对步骤(1)中得到的虚症小鼠接种C26结肠腺癌细胞，得到虚证肿瘤恶病质模型；(3)接种后同时采用苦寒泻下、饥饱失常两因素诱导法，继续诱导15-18天。2.根据权利要求1所述的虚证肿瘤恶病质模型的建立方法，其特征在于：苦寒泻下诱导法为：每日上午定时灌胃番泻叶煎剂。3.根据权利要求1所述的虚证肿瘤恶病质模型的建立方法，其特征在于：饥饱失常诱导法为：隔日进食，自由饮水。4.根据权利要求1所述的虚证肿瘤恶病质模型的建立方法，其特征在于：力竭运动诱导法为：每日下午定时对小鼠进行跑步训练或游泳训练，强迫小鼠跑步达到力竭状态。5.根据权利要求4所述的虚证肿瘤恶病质模型的建立方法，其特征在于：跑步训练使用小鼠转轮式疲劳仪进行；使用跑步训练达到力竭状态，力竭标准是疲劳仪转速设置在30r/min，小鼠30min内休息15次，每次休息时间在30s以上，即可判断为力竭状态。6.根据权利要求4所述的虚证肿瘤恶病质模型的建立方法，其特征在于：使用游泳训练达到力竭状态，力竭标准为小鼠表现慌张、四肢动作不协调甚至出现下沉现象，每日力竭2次，间隔10min。7.根据权利要求1所述的虚证肿瘤恶病质模型的建立方法，其特征在于：步骤(2)中的接种方式为小鼠腋下接种C26结肠腺癌细胞，C26结肠腺癌细胞用生理盐水稀释到浓度为1×105-2×105个细胞/mL，接种剂量0.1-0.2mL/只。8.根据权利要求1所述的虚证肿瘤恶病质模型的建立方法，其特征在于，包...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘璇，李娜，章雄文，张周，张万里，苗春晓，冯利兴，
申请(专利权)人：中国科学院上海药物研究所，
类型：发明
国别省市：上海,31