一种皮肤抗衰老能力检测方法及其检测引物和试剂盒技术

本发明专利技术公开了一种皮肤抗衰老能力检测方法及其检测引物和试剂盒，一种皮肤抗衰老能力的检测方法，所述检测方法包括以下步骤：（1）提取待测样品的DNA；（2）利用特异性引物，以步骤（1）所得DNA为模板，进行荧光定量PCR扩增检测，其中所述特异性引物为正向引物1，正向引物2和反向引物3；（3）根据步骤（2）所得荧光定量PCR扩增检测结果，检测皮肤抗衰老能力。本发明专利技术提供了一种经济快速检测皮肤抗衰老基因的单核苷酸多态性的方法，操作简单，经济高效。

【技术实现步骤摘要】
一种皮肤抗衰老能力检测方法及其检测引物和试剂盒
本专利技术属于生物
，具体涉及一种皮肤抗衰老能力检测方法及其检测引物和试剂盒。
技术介绍
随着社会经济全速发展，皮肤健康和美容逐步为公众所重视。维持皮肤健康的重点在于皮肤抗衰老、抗氧化能力和皮肤保水抗皱纹能力。而这些维持皮肤健康的机体调节内在驱动力是由多种关键功能相关基因决定。同时也有研究发现，皮肤健康关键功能基因的单核苷酸多态性（SNP）决定了基因的活性，从而影响皮肤健康稳态的维持。皮肤抗衰老／抗氧化指数可以反映一个人是否具有维持“年轻态”潜质。皮肤抗衰老／抗氧化能力越强，其“年轻态”潜质越高。人体内有一套天然的抗氧化防御系统，体内的过氧化物酶基因CAT、谷胱甘肽过氧化物酶基因GPX1、脱氢酶基因NQO1、超氧化物歧化酶基因SOD2协同负责体内自由基、过氧化物的清除和降解，维持体内抗氧化平衡。其中NQO1基因属于NAD(P)H脱氢酶(醌)家族，负责催化醌双电子还原反应。该酶借助NADH或NADPH作为电子供体，催化体内醌类化合物的还原反应，阻止醌发生一个电子还原过程产生的自由基。在人群中NQO1存在不同SNP，其中关键的是基因编码区rs1800566位点存在TT:CT:CC。TT/CT基因型抗氧化能力一般，CC基因型抗氧化能力强。SOD2是铁锰超氧化物歧化酶家族的一员。它编码一种形成四聚物的线粒体蛋白质，每亚基结合一个锰离子。这种蛋白质与氧化磷酸化产生的超氧自由基结合，并将其转化为过氧化氢和双原子氧。在人群中SOD2存在不同SNP，其中关键的是编码区rs4880位点存CC:TC:TT。C等位基因携带者抗氧化能力较差，TT基因型抗衰老能力较强。皮肤抗氧化能力基因检测可以预知皮肤敏感性特质，及早采取防护措施，避免护肤不当引起皮肤不可逆衰老。皮肤衰老导致的水分丢失，长期精神负担和睡眠不足，过度的暴晒都易促使皮肤松弛，出现皱纹。胶原蛋白是一种高分子蛋白质，弹性纤维蛋白和胶原纤维蛋白通过互相交叉缠绕形成一张强有力的弹性网，使皮肤保持结实而有弹性的状态。研究表明，COL1A2与皮肤的抗皱能力有关。该基因编码I型胶原蛋白的pro-alpha2链，其三重螺旋由两条alpha1链和一条alpha2链组成。I型胶原是一种纤维形成的胶原蛋白，存在于大多数结缔组织中，在骨、角膜、真皮和肌腱中含量丰富。在人群中COL1A2存在不同SNP，其中关键的是基因编码区rs11979919位点存在CC:TC:TT。CC/TC基因型抗光老化能力一般，抗皱能力一般。TT基因型抗光老化能力提升，抗皱能力好。基因单位点氨基酸差异将会使胶原蛋白分解速度明显增加，皮肤很容易产生皱纹，如不采取有效护理，皮肤衰老速度较快。综上所述，皮肤健康相关的关键功能基因可以很好地反应皮肤健康维持的能力，即皮肤抗衰老能力。然而目前皮肤基因单核苷酸多态性检测方法，还存在试验步骤较为复杂，操作不便利等缺陷和不足，因此建立通过建立一套经济快速的皮肤状况评估方法，通过简单快速的方法，检查出个体间皮肤健康维持能力基因活力的差异，从而综合评估个体间皮肤健康状况并提供改善提高的保健方案，成为亟待解决的技术问题。
技术实现思路
因此，针对目前以荧光定量PCR技术为基础，检测皮肤抗衰老能力的皮肤基因单核苷酸多态性检测方法，还存在试验步骤较为复杂、效率不高以及操作不便等缺陷和不足，本专利技术提供了一种新的皮肤抗衰老能力检测方法及其检测引物和试剂盒，从而解决了上述技术问题。本专利技术的基本技术原理为：本专利技术利用PCR产物Tm迁移的方法进行不同SNP的检测。其简要原理为，针对SNP位点设计引物时，采用统一反向引物，而正向引物以SNP位点结尾（图1）。同时SNP的不同基因型的正向引物的5’端通过增加GC来调整不同基因型产物的Tm值。通过产物间Tm值的差异即可判断产物为何种SNP。该方法的关键在于正向引物GC重复的选择，是否可以起到区分不同SNP的作用。如果是纯合子基因型，应该为单一熔解曲线峰型。而且正向引物5’端中含有较多GC对应的基因型，其熔解曲线Tm应该高于正向引物5’端中含有较多GC对应的基因型。同时如果是杂合子基因型，理论会产生双峰熔解曲线或单峰且Tm位于中间的熔解曲线。通过判读熔解曲线，可以确认相关基因的SNP分型，并进一步判读皮肤的抗衰老能力。为解决上述技术问题，本专利技术采取的技术方案之一为：一种皮肤抗衰老能力的检测方法，所述检测方法包括以下步骤：（1）提取待测样品的DNA；（2）利用特异性引物，以步骤（1）所得DNA为模板，进行荧光定量PCR扩增检测，其中所述特异性引物为正向引物1，正向引物2和反向引物3；（3）根据步骤（2）所得荧光定量PCR扩增检测结果，检测皮肤抗衰老能力。其中步骤（1）为提取待测样品的DNA。所述待测样品为本领域常规的待测样品，包括血清，组织，细胞、口腔拭子样品或者其他待测样品，较佳地为口腔拭子样品。其中所述待测样品的DNA的提取方法为本领域常规的DNA提取方法，只要能够将待测样品中的DNA抽提出来即可满足本专利技术需求，所述DNA提取方法较佳地包括酚氯仿法等，或者利用市售可得的DNA抽提试剂盒抽提样品的DNA。其中步骤（2）为：采用特异性引物，以步骤（1）所得DNA为模板，进行PCR扩增检测，较佳地，所述正向引物1如序列表中SEQIDNO：1所示，所述正向引物2如序列表中SEQIDNO：2所示，所述反向引物3如序列表中SEQIDNO：3所示。较佳地，所述正向引物1如序列表中SEQIDNO：4所示，所述正向引物2如序列表中SEQIDNO：5所示，所述反向引物3如序列表中SEQIDNO：6所示。较佳地，所述正向引物1如序列表中SEQIDNO：7所示，所述正向引物2如序列表中SEQIDNO：8所示，所述反向引物3如序列表中SEQIDNO：9所示。本专利技术所述特异性引物的制备方法为本领域常规制备方法，较佳地为全序列人工合成。其中步骤（2）所述荧光定量PCR扩增的检测条件较佳地为：（1）90-96℃预变性10秒-10分钟；（2）90-96℃变性5秒-90秒；（3）45-65℃退火5秒-99秒；（4）55-99℃延伸3秒-300秒；步骤（2）-（4）循环次数为28-60；（5）60-73℃延伸5秒-600秒，（6）55-99℃保温3秒-300秒；（7）30-50℃保温3-10秒。所述荧光定量PCR扩增的条件更佳地为（1）95℃预变性10分钟；（2）95℃变性10秒，（3）60℃退火40秒，（4）95℃延伸15秒，步骤（2）-（4）循环次数为35次，（5）60℃延伸1分钟，（6）95℃保温15秒，（7）40℃保温5秒。其中步骤（2）所述PCR扩增检测的反应体系较佳地为：qPCR混合液10μl、特异性引物溶液中正向引物1溶液0.4μl、正向引物2溶液0.4μl、反向引物3溶液0.4μl，DNA模板2μl，然后加入MiliQ水补足到20μl。较佳地，本专利技术所述皮肤抗衰老检测方法，是不以疾病的诊断和治疗为目的的检测方法。为解决上述技术问题，本专利技术采取的技术方案之二为：一种检测皮肤抗衰老基因的特异性引物，所述特异性引物包括：正向引物1，正向引物2和反向引物3，所述正向引物1如序列表中SEQIDNO：1所示，所述正向引物2如序列表中本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种皮肤抗衰老能力的检测方法，其特征在于，所述检测方法包括以下步骤：（1）提取待测样品的DNA；（2）利用特异性引物，以步骤（1）所得DNA为模板，进行荧光定量PCR扩增检测，其中所述特异性引物为正向引物1，正向引物2和反向引物3；（3）根据步骤（2）所得荧光定量PCR扩增检测结果，检测皮肤抗衰老能力。

【技术特征摘要】
1.一种皮肤抗衰老能力的检测方法，其特征在于，所述检测方法包括以下步骤：（1）提取待测样品的DNA；（2）利用特异性引物，以步骤（1）所得DNA为模板，进行荧光定量PCR扩增检测，其中所述特异性引物为正向引物1，正向引物2和反向引物3；（3）根据步骤（2）所得荧光定量PCR扩增检测结果，检测皮肤抗衰老能力。2.如权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述检测方法步骤（2）所述正向引物1如序列表中SEQIDNO：1所示，所述正向引物2如序列表中SEQIDNO：2所示，所述反向引物3如序列表中SEQIDNO：3所示。3.如权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述检测方法步骤（2）所述正向引物1如序列表中SEQIDNO：4所示，所述正向引物2如序列表中SEQIDNO：5所示，所述反向引物3如序列表中SEQIDNO：6所示。4.如权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述检测方法步骤（2）所述正向引物1如序列表中SEQIDNO：7所示，所述正向引物2如序列表中SEQIDNO：8所示，所述反向引物3如序列表中SEQIDNO：9所示。5.如权利要求1所述肤抗衰老能力的检测方法，其特征在于，其中步骤（2）所述荧光定量PCR扩增的检测条件为：（1）90-96℃预变性10秒-10分钟；（2）90-96℃变性5秒-90秒；（3）45-65℃退火5秒-99秒；（4）55-99℃延伸3秒-300秒；步骤（2）-（4）循环次数为28-60；（5）60-73℃延伸5秒-600秒，（6）55-99℃保温3秒-300秒；（7）30-50℃保温3-10秒。6.如权利要求1-5任一项所述的抗衰老能力的检测...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘天津，
申请(专利权)人：上海吉涛生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：上海,31