一种温度响应型狂犬疫苗递送系统技术方案

本发明专利技术公开了一种温度响应型狂犬疫苗递送系统。本发明专利技术提供了一种狂犬疫苗温敏递送体系，包括如下溶质：PLGA‑PEG‑PLGA、锰离子和狂犬疫苗抗原；所述PLGA‑PEG‑PLGA、锰离子和狂犬疫苗抗原的配比为50‑200mg：20‑100μg：0.3‑5IU。本发明专利技术制备的递送系统，在第二次注射后抗体产生量即可达到现市售狂犬疫苗第四次注射后的效果；当其中所含抗原降低至市售狂犬疫苗十分之一剂量时注射，产生抗体效价与市售疫苗产品相当。本发的狂犬疫苗递送体系可在同等市售狂犬疫苗单剂剂量不变的基础上，减少免疫次数，并且可保持原有免疫应答强度。

A Temperature-responsive Rabies Vaccine Delivery System

The invention discloses a temperature-responsive rabies vaccine delivery system. The present invention provides a temperature sensitive delivery system for rabies vaccine, including the following solutes: PLGA PEG PLGA, manganese ion and rabies vaccine antigen; the ratio of PLGA PEG PLGA, manganese ion and rabies vaccine antigen is 50 200 mg: 20 100 ug: 0.3 IU. The delivery system prepared by the invention can achieve the effect after the fourth injection of the rabies vaccine on the market after the second injection, and when the antigen contained in the system is reduced to one tenth of the dose of the rabies vaccine on the market, the titer of the antibody produced is equivalent to that of the market vaccine product. This delivery system of rabies vaccine can reduce the number of immunization times and maintain the original immune response intensity on the basis of the same single dose of rabies vaccine sold in the market.

【技术实现步骤摘要】
一种温度响应型狂犬疫苗递送系统
本专利技术属于生物制剂与生物医学的交叉领域，具体涉及一种温度响应型狂犬疫苗递送系统。
技术介绍
狂犬病是由狂犬病毒感染所致的致命性疾病，发病后的死亡率几乎100％，至目前为止，世界上仍未有一种有效的治疗方法。所以，凡被狂犬或不清楚是否带毒的动物咬伤后，都需要立即注射狂犬疫苗。狂犬疫苗大部分用于暴露后免疫，因此在人体中产生免疫应答反应的速度越快抗体效价越高，预防的效果越好。目前疫苗佐剂研究也是热点之一，包括传统的铝佐剂、新型的微球吸附佐剂、壳聚糖等凝胶佐剂等，各类佐剂各有特点及不足：如传统佐剂免疫效果不佳、微球类佐剂制造工艺复杂、凝胶类佐剂具有停留时间长、可控释放等特点。临床应用狂犬疫苗的免疫方式为第0、3、7、14、28d进行免疫注射，其存在注射次数多，免疫效果不高等缺点，随着以人为本的社会理念的进步，如何减少患者的痛苦，提高依从性是医学进步的方向之一。
技术实现思路
本专利技术的一个目的是提供一种狂犬疫苗温敏递送体系。本专利技术提供的狂犬疫苗温敏递送体系，包括如下溶质：PLGA-PEG-PLGA、锰离子和狂犬疫苗抗原；所述PLGA-PEG-PLGA、锰离子和狂犬疫苗抗原的配比为50-200mg：20-100μg：0.3-5IU。上述狂犬疫苗温敏递送体系中，所述锰离子以Mn2+的形式存在。上述狂犬疫苗温敏递送体系中，所述PLGA-PEG-PLGA中的PLGA分子量约2000，PEG分子量约1500。上述狂犬疫苗温敏递送体系中，所述溶质还包括佐剂；所述佐剂具体为Al(OH)3佐剂；所述Al(OH)3佐剂和所述狂犬疫苗抗原的配比为5-30mg：0.3-5IU。上述狂犬疫苗温敏递送体系还包括溶剂；所述狂犬疫苗温敏递送体系由溶质和溶剂组成；所述溶剂为生理盐水。上述狂犬疫苗温敏递送体系的响应温度为25℃至40℃。本专利技术另一个目的是提供一种制备上述的狂犬疫苗温敏递送体系的方法。本专利技术提供的方法，包括如下步骤：1)制备复合铝佐剂的疫苗递送体系和含有锰离子狂犬疫苗抗原溶液；所述复合铝佐剂的疫苗递送体系为将PLGA-PEG-PLGA水溶胶和Al(OH)3佐剂混匀，得到复合铝佐剂的疫苗递送体系；所述PLGA-PEG-PLGA水溶胶为将PLGA-PEG-PLGA溶解在生理盐水中，得到的PLGA-PEG-PLGA水溶胶，其中，所述PLGA-PEG-PLGA的质量体积百分含量为10％-30％(或，浓度为100-300mg/ml)；所述含有锰离子狂犬疫苗抗原溶液为将狂犬疫苗抗原、氯化锰和生理盐水混匀，得到含有锰离子狂犬疫苗抗原溶液，其中，所述狂犬疫苗抗原的浓度为0.3-5IU/ml，所述氯化锰的浓度为20-100μg/ml；2)将所述复合铝佐剂的疫苗递送体系和所述含有锰离子狂犬疫苗抗原溶液混合，得到狂犬疫苗温敏递送体系。上述方法中，所述狂犬疫苗温敏递送体系中，所述PLGA-PEG-PLGA：所述Al(OH)3：所述狂犬疫苗抗原：所述氯化锰的配比为50-200mg：5-30mg：0.3-5IU：20-100μg。上述方法中，步骤2)中，所述PLGA-PEG-PLGA水溶胶和Al(OH)3佐剂的配比为50-200mg：5-30mg；步骤3)中，所述复合铝佐剂的疫苗递送体系和所述含有锰离子狂犬疫苗抗原溶液的体积比为1：3-1：4。上述狂犬疫苗温敏递送体系在制备免疫人或动物产品中的应用也是本专利技术保护的范围；或，上述狂犬疫苗温敏递送体系在制备防治或者治疗狂犬病产品中的应用也是本专利技术保护的范围；或，上述狂犬疫苗温敏递送体系在制备提高免疫人或动物后所产生的抗体效价或含量产品中的应用也是本专利技术保护的范围；或，本专利技术还提供了一种递送狂犬疫苗温敏递送体系的方法，该方法为将上述的狂犬疫苗温敏递送体系递送到动物体内。所述递送方式为皮下免疫。本专利技术的技术原理:利用PLGA-PEG-PLGA嵌段共聚物中PLGA(聚乳酸-羟基乙酸共聚物(poly(lactic-co-glycolicacid))和PEG在水中溶解性的差异所产生的对温度变化的相变特性，先将具有某个温度变化特性的材料，在室温下按照20％溶于注射用生理盐水中，在4℃充分溶胀，待形成无色透明溶液后复合MnCl2及狂犬疫苗抗原，即可形成温度响应型狂犬疫苗。本专利技术制备的递送系统，在第二次注射后抗体产生量即可达到现市售狂犬疫苗第四次注射的效果；当其中所含抗原降低至市售狂犬疫苗十分之一剂量时注射，产生抗体效价与市售疫苗产品相当。本专利技术的狂犬疫苗递送体系可在同等市售狂犬疫苗单剂剂量不变的基础上，减少免疫次数，并且可产生更强的免疫应答。附图说明图1为狂犬疫苗递送体系免疫后抗体滴度检测结果。具体实施方式下述实施例中所使用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法。下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。实施例1、狂犬疫苗递送体系制备1、温敏性高分子材料溶液制备室温下PLGA-PEG-PLGA(购自济南岱罡生物工程有限公司,定制产品无货号，其中PLGA分子量约2000，PEG分子量约1500；30℃发生相变)按质量体积分数20％(g：ml)溶于生理盐水(生理盐水是浓度0.9％的氯化钠水溶液)，得到PLGA-PEG-PLGA水溶胶(水溶胶中PLGA-PEG-PLGA的质量体积比为20％；质量体积分数20％含义为20g溶质溶于适量溶剂并定容至100ml)。具体溶解方法为：PLGA-PEG-PLGA室温下加入生理盐水，4℃下充分溶胀24h后，在10℃与4℃下每24h交替一次溶解72h后(PLGA-PEG-PLGA共聚物是半固体状态，称量并加入生理盐水后需要较长时间溶解，该步骤是将这两种物质变为均相溶液的过程)，形成可自由流动的水溶胶。配制好的PLGA-PEG-PLGA水溶胶可在4℃下30-60d或者-20℃下一年不发生降解，溶液保持溶胶向凝胶的可逆性转变。2、Al(OH)3佐剂递送体系制备向上述1制备的PLGA-PEG-PLGA水溶胶中加入2％质量比体积百分含量Al(OH)3佐剂(单位是g:ml；国药试剂有限公司)，机械搅拌下使二者均匀混合，使Al(OH)3和PLGA-PEG-PLGA在体系中质量比为1：10，得到复合铝佐剂的疫苗递送体系，该体系的相变温度为30℃。3、狂犬疫苗温敏递送体系制备用生理盐水溶解狂犬疫苗抗原(市售狂犬疫苗；辽宁成大生物股份有限公司)，得到5IU/ml的狂犬疫苗抗原溶液；再向狂犬疫苗抗原溶液中加入氯化锰固体，得到含有锰离子狂犬疫苗抗原溶液，其中狂犬疫苗抗原的浓度为5IU/ml，氯化锰的终浓度为75.5μg/ml；向上述2得到的复合铝佐剂的疫苗递送体系中加入含有锰离子狂犬疫苗抗原溶液，复合铝佐剂的疫苗递送体系与含有锰离子狂犬疫苗抗原溶液的体积比为1:3，边加边搅拌，机械搅拌下使二者均匀混合，得到相变温度在30℃的狂犬疫苗温敏递送体系。其中，PLGA-PEG-PLGA：Al(OH)3：狂犬疫苗抗原：氯化锰的配比为150mg：15mg：3.75IU：56.53μg。实施例2、狂犬疫苗递送体系免疫效果评价采用BALB/C小鼠皮下给药来评价实施例1制备的狂犬疫苗温敏递送体系的免疫效果，按照表1对小鼠进行分组及给药。表1动物分组及给药剂量表给药剂量狂犬疫苗溶本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种狂犬疫苗温敏递送体系，包括如下溶质：PLGA‑PEG‑PLGA、锰离子和狂犬疫苗抗原；所述PLGA‑PEG‑PLGA、锰离子和狂犬疫苗抗原的配比为50‑200mg：20‑100μg：0.3‑5IU。

【技术特征摘要】
1.一种狂犬疫苗温敏递送体系，包括如下溶质：PLGA-PEG-PLGA、锰离子和狂犬疫苗抗原；所述PLGA-PEG-PLGA、锰离子和狂犬疫苗抗原的配比为50-200mg：20-100μg：0.3-5IU。2.根据权利要求1所述的狂犬疫苗温敏递送体系，其特征在于：所述锰离子以Mn2+的形式存在。3.根据权利要求1或2所述的狂犬疫苗温敏递送体系，其特征在于：所述PLGA-PEG-PLGA中的PLGA分子量约2000，PEG分子量约1500。4.根据权利要求1-3中任一所述的狂犬疫苗温敏递送体系，其特征在于：所述溶质还包括佐剂；所述佐剂具体为Al(OH)3佐剂；所述Al(OH)3佐剂和所述狂犬疫苗抗原的配比为5-30mg：0.3-5IU。5.根据权利要求1-4中任一所述的狂犬疫苗温敏递送体系，其特征在于：所述狂犬疫苗温敏递送体系还包括溶剂；所述狂犬疫苗温敏递送体系由溶质和溶剂组成；所述溶剂为生理盐水。6.根据权利要求1-5中任一所述的狂犬疫苗温敏递送体系，其特征在于：所述狂犬疫苗温敏递送体系的响应温度为25℃至40℃。7.一种制备权利要求1-6中任一所述的狂犬疫苗温敏递送体系的方法，包括如下步骤：1)制备复合铝佐剂的疫苗递送体系和含有锰离子狂犬疫苗抗原溶液；所述复合铝佐剂的疫苗递送体系为将PLGA-PEG-PLGA水溶胶和Al(OH)3佐剂混匀，得到复合铝佐剂的疫苗递送体系；所述PLGA-PEG-PLGA水溶胶为将PLGA-PEG-PLGA溶解在生理盐水中...

【专利技术属性】
技术研发人员：徐东刚，付文亮，景浩然，邢微微，
申请(专利权)人：中国人民解放军军事科学院军事医学研究院，
类型：发明
国别省市：北京,11