一种吸收率达到96%的纳米级胶原蛋白提纯方法技术

本发明专利技术公开了一种吸收率达到96%的纳米级胶原蛋白提纯方法，包括如下步骤：将鱼皮粉碎、去除杂质；将粉碎物置于低温搅拌机中，按照粉碎物与无离子水体积比为1:3的比例进行搅拌混合30分钟，静止10分钟后除去上层浮物，然后置于过滤装置中，进行吸附过滤；收集过滤后的粉碎物，进行第一次提纯、第二次分解和第三次提纯，同时，经过三次提纯和粒子对撞仪得到的纳米级胶原蛋白，经过SGS和PUNY质检检测，达到无雌酮、无氯霉素、无孕酮、无沙门氏菌、无甲基睾酮、无呋喃妥因代谢物、无脂肪、无雌二醇、无无雌三醇，且本发明专利技术将鱼皮进行处理后获得的浆液用于进行胶原蛋白的提取，能够明显增加胶原蛋白的提纯率和纯度；再经过纳米级胶原蛋白提纯设备提纯之后得到纳米级混合粉，最后将其经过粒子对撞仪对撞之后得到分子量均匀的纳米级胶原蛋白，其吸收率可以达到96%。

A Purification Method of Collagen with 96% Absorption

The invention discloses a nano-scale collagen purification method with an absorption rate of 96%, which comprises the following steps: crushing fish skin and removing impurities; placing the crushed matter in a cryogenic mixer, stirring and mixing for 30 minutes according to the volume ratio of crushed matter to ionless water 1:3, removing the upper float after 10 minutes of rest, and then placing it in a filter device for adsorption and filtration; The filtered crushed materials were purified for the first time, decomposed for the second time and purified for the third time. At the same time, the nano-collagen obtained by the three times purification and particle collider was tested by SGS and PUNY. The results showed that there were no estrone, chloramphenicol, progesterone, salmonella, methyltestosterone, nitrofurantoin metabolite, fat, estradiol and estriol. The slurry obtained from the fish skin after treatment is used for collagen extraction, which can significantly increase the purity and purity of collagen. After purification by nano-scale collagen purification equipment, nano-scale mixed powder is obtained. Finally, nano-scale collagen with uniform molecular weight is obtained after collision by particle collider, and its absorption rate can reach 96%.

【技术实现步骤摘要】
一种吸收率达到96%的纳米级胶原蛋白提纯方法
本专利技术涉及胶原蛋白提纯方法
，具体为一种吸收率达到96%的纳米级胶原蛋白提纯方法。
技术介绍
胶原蛋白是一种生物性高分子物质，英文学名Collagen。在动物细胞中扮演结合组织的角色。为生物科技产业最具关键性的原材料之一，也是需求量十分庞大的最佳生医材料。其应用领域包括生医材料、化妆品、食品工业、研究用途等。胶原蛋白是一种细胞外蛋白质，它是由3条肽链拧成螺旋形的纤维状蛋白质，胶原蛋白是人体内含量最丰富的蛋白质，世界胶原蛋白之父布兰特（J·Brandt）博士断言：“人体衰老的过程就是胶原蛋白流失的过程！”胶原蛋白占全身总蛋白质的30%以上。胶原蛋白富含人体需要的甘氨酸、脯氨酸、羟脯氨酸等氨基酸。胶原蛋白是细胞外基质中最重要的组成部分；胶原蛋白是生物大分子，动物结缔组织中的主要成分，也是哺乳动物体内含量最多、分布最广的功能性蛋白，占蛋白质总量的25％-30％。与组织的形成、成熟、细胞间信息的传递，以及关节润滑、伤口愈合、钙化作用、血液凝固和衰老等有着密切的关系。胶原蛋白肽广泛用于食品、化妆品、保健品行业，以往胶原蛋白肽的制备原料主要来源于陆生动物的骨骼和皮。胶原蛋白是人体内含量最丰富的蛋白质，占全身总蛋白质的30%以上。胶原蛋白富含人体需要的甘氨酸、脯氨酸、羟脯氨酸等氨基酸。胶原蛋白是细胞外基质中最重要的组成部分。由于胶原蛋白具有紧肤平皱、保湿滋润、修复组织、美白淡斑等功效，一直被人们食用。特别是其中达到纳米级的胶原蛋白还可以被用于临床医疗领域。胶原蛋白一般在畜类、家畜类的皮肤中存在，但高品级的胶原蛋白均采用鱼皮中提取的鱼胶原蛋白，目前现有常规方法的制备胶原蛋白受工艺条件主要为酶解和水解两大手艺，由于提纯精度不够，而且提纯率较低，故而通过这两种方式提取出来的胶原蛋白中杂质较多，严重影响了胶原蛋白的质量，其分子量只能达到小分子级别。小分子级别的胶原蛋白经过分解之后再吸收率上，能够到达30%左右。高品质的胶原蛋白原料主要来源于鱼皮，而随着海洋的污染，高品质的鱼胶原蛋白原料供应降低，所以一种吸收率高的胶原蛋白称为当前胶原蛋白市场上最强烈的技术需求，不仅能够满足民用领域，而且能用于更高端和专业的医用领域。
技术实现思路
本专利技术提供一种吸收率达到96%的纳米级胶原蛋白提纯方法，采用两次蛋白质分解，两次膜分离相结合的方式，得到的胶原蛋白分子量小，而且经过人体代谢消化后吸收率能够达到96%左右，比普通的小分子胶原蛋白30%左右的吸收率有巨大的提升。本专利技术操作容易，经过本专利技术工艺将鱼皮进行处理后获得的浆液用于进行胶原蛋白的提取，能够明显增加胶原蛋白的提纯率和纯度；提纯率可以达到96%，得到的纳米级胶原蛋白可以达到达到无雌酮、无氯霉素、无孕酮、无沙门氏菌、无甲基睾酮、无呋喃妥因代谢物、无脂肪、无雌二醇、无无雌三醇的品质级别，且用本专利之提纯方式提纯胶原蛋白具有提取材料使用效率高，吸收率高、生产成本性价比高、胶原蛋白纯度好的优点，可以有效解决上述
技术介绍
中的问题。为实现上述目的，本专利技术提供如下技术方案：一种吸收率达到96%的纳米级胶原蛋白提纯方法，包括如下步骤：1）粉碎：先对鱼皮进行精华检测，即分为抗生素检测、重金属残留检测、雌性激素检测和动物源毒素残留检测，然后将鱼皮加入超纯水浸泡，直到含有胶原蛋白的原料冻成松散的组织颗粒，用玻璃棒搅拌均匀，成糊状；将糊状的组织颗粒再加入10倍体积的超纯水，按组织捣碎机的操作规程匀浆3次，至完全悬浮；将组织颗粒绞碎均匀后加入超纯水至组织的含量为25克／升，混匀；加冰醋酸至组织悬浮液，调制溶液浓度0.5毫克/毫升；消化：称取胃蛋白酶，将胃蛋白酶溶于0.5M醋酸中制成10mg/ml的胃蛋白酶溶液，然后转入到组织悬浮液至0.1mg/ml，即每100ml匀浆中加入1ml的胃蛋白酶溶液，混匀，室温消化7-10天；2）去除杂质：将粉碎物置于低温搅拌机中，按照粉碎物与无离子水体积比为1:3的比例进行搅拌混合30分钟；静止10分钟后除去上层浮物，然后置于过滤装置中，进行吸附过滤，收集过滤后的粉碎物；3）第一次分解：中第一次分解包括以下步骤：将步骤2)中的粉碎物与水以体积比为1:3的比例混合得混合物，并将温度调节至30℃，温度pH为7；将含有枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌的培养液以体积比2:1的比例搅拌混合5分钟，加入到混合物中；匀速搅拌，在温度30℃，pH为7下保持24小时；混合液置入高速离心机中的离心罐中，离心15分钟，静止沉淀10分钟；将上述混合物进行提纯，提取纯方法采用膜分离法，采用3000Da和1000Da的超滤膜截留离心后的上清液，分离得到3000Da-1000Da的胶原蛋白肽组分；置于真空过滤装置中，抽滤，干燥，灭菌；4）第二次分解：将第一次分解获得的产物与水以体积比为60：40的比例混合，在35℃温度下恒温搅拌30分钟；按胶原蛋白原料重量的0.5％向混合液中加入胰蛋白酶，按胶原蛋白原料重量的5％加入聚二乙醇，继续搅拌10分钟；调节pH值为7-8，37℃，反应8小时；迅速加热至45℃，终结酶活；混合液放入高速离心机中的离心罐中，离心15分钟；将上述混合物进行提纯，提取纯方法采用膜分离法，采用1000Da的超滤膜截留离心后的上清液，分离得到1000Da以下的胶原蛋白肽组分；5）第一次提纯：在上述步骤中得到的1000Da以下的胶原蛋白肽组分加入阴离子交换树脂，搅拌浸泡3-3.5h,让树脂完全吸附料液的色素和腥味；用层析柱将料液和树脂分离；杀菌，杀菌后过滤，将料液通过超滤膜分离装置过滤，得超滤透析液；离心提纯：将透析后的溶液高速冷冻离心，最后通过微分子对撞工艺进行最后的提纯，所得沉淀为最后纯化的胶原蛋白。6）第二次提纯：再将最后纯化后的胶原蛋白，经过一种纳米级胶原蛋白提纯设备（我公司专利设备）提纯之后得到纳米级混合粉。7）纳米级混料进行对撞：将混合的纳米级胶原蛋白粉，置于粒子对撞仪中，进行对撞，最终得到分子量比较品均的纳米级胶原蛋白。根据上述技术方案，所述的吸附过滤具体为用配置好的10MNaOH标准溶液调节消化液pH至9-9.5，静置过夜，灭活胃蛋白酶；调节pH值：消化液中加入等体积的超纯水,并用浓盐酸调节pH到4.0，搅拌2小时；清洗硅藻土：根据调节pH值后的消化液体积，按浓度为15g/L称取硅藻土，将硅藻土用10mMHCl浸泡2小时，用超纯水清洗数次；吸附过滤：加硅藻土至消化液，混匀，静置2小时；将滤纸置于过滤器中，把过滤器和循环卫生泵用硅胶管连接紧密，按过滤器和循环卫生泵的标准操作规程进行过滤，滤除硅藻土，得消化过滤液。根据上述技术方案，所述步骤5）提纯过后需要进行干燥，且干燥的方法为为冷冻干燥，干燥时间为24-36小时。根据上述技术方案，所述超纯水的制备方法为：包括一级淡化过程和二级淡化过程；所述一级淡化过程中，热媒介质由热媒进口进入，经第二换热通道的下部通道，与第二换热通道的各换热板片热交换后从热媒出口排出，待淡化的海水从冷水进水管经集流通道一分别流入第一换热通道，海水在第一换热通道内与换热板片热交换后，初步预热，经布液成膜装置在第一换热通道下部的换热板表面均匀布液成膜，并与经热媒介质加热的换热板片加热，逐渐蒸发生成水蒸汽，未蒸发的本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种吸收率达到96%的纳米级胶原蛋白提纯方法，其特征在于：包括如下步骤：1）粉碎：先对鱼皮进行精华检测，即分为抗生素检测、重金属残留检测、雌性激素检测和动物源毒素残留检测，然后将鱼皮加入超纯水浸泡，直到含有胶原蛋白的原料冻成松散的组织颗粒，用玻璃棒搅拌均匀，成糊状；将糊状的组织颗粒再加入10倍体积的超纯水，按组织捣碎机的操作规程匀浆3次，至完全悬浮；将组织颗粒绞碎均匀后加入超纯水至组织的含量为25克／升，混匀；加冰醋酸至组织悬浮液，调制溶液浓度0.5毫克/毫升；消化：称取胃蛋白酶，将胃蛋白酶溶于0.5M醋酸中制成10mg/ml的胃蛋白酶溶液，然后转入到组织悬浮液至0.1mg/ml，即每100ml匀浆中加入1ml的胃蛋白酶溶液，混匀，室温消化7‑10天；2）去除杂质：将粉碎物置于低温搅拌机中，按照粉碎物与无离子水体积比为1:3的比例进行搅拌混合30分钟；静止10分钟后除去上层浮物，然后置于过滤装置中，进行吸附过滤，收集过滤后的粉碎物；3）第一次分解：中第一次分解包括以下步骤：将步骤2)中的粉碎物与水以体积比为1:3的比例混合得混合物，并将温度调节至30℃，温度pH为7；将含有枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌的培养液以体积比2:1的比例搅拌混合5分钟，加入到混合物中；匀速搅拌，在温度30℃，pH为7下保持24小时；混合液置入高速离心机中的离心罐中，离心15分钟，静止沉淀10分钟；将上述混合物进行提纯，提取纯方法采用膜分离法，采用3000Da和1000Da的超滤膜截留离心后的上清液，分离得到3000Da‑1000Da的胶原蛋白肽组分；置于真空过滤装置中，抽滤，干燥，灭菌；4）第二次分解：将第一次分解获得的产物与水以体积比为60：40的比例混合，在35℃温度下恒温搅拌30分钟；按胶原蛋白原料重量的0.5％向混合液中加入胰蛋白酶，按胶原蛋白原料重量的5％加入聚二乙醇，继续搅拌10分钟；调节pH值为7‑8，37℃，反应8小时；迅速加热至45℃，终结酶活；混合液放入高速离心机中的离心罐中，离心15分钟；将上述混合物进行提纯，提取纯方法采用膜分离法，采用1000Da的超滤膜截留离心后的上清液，分离得到1000Da以下的胶原蛋白肽组分；5）第一次提纯：在上述步骤中得到的1000Da以下的胶原蛋白肽组分加入阴离子交换树脂，搅拌浸泡3‑3.5h,让树脂完全吸附料液的色素和腥味；用层析柱将料液和树脂分离；杀菌，杀菌后过滤，将料液通过超滤膜分离装置过滤，得超滤透析液；离心提纯：将透析后的溶液高速冷冻离心，最后通过微分子对撞工艺进行最后的提纯，所得沉淀为最后纯化的胶原蛋白；6）第二次提纯：再将最后纯化后的胶原蛋白，经过一种纳米级胶原蛋白提纯设备（我公司专利设备）提纯之后得到纳米级混合粉；7）纳米级混料进行对撞：将混合的纳米级胶原蛋白粉，置于粒子对撞仪中，进行对撞，最终得到分子量比较品均的纳米级胶原蛋白。...

【技术特征摘要】
1.一种吸收率达到96%的纳米级胶原蛋白提纯方法，其特征在于：包括如下步骤：1）粉碎：先对鱼皮进行精华检测，即分为抗生素检测、重金属残留检测、雌性激素检测和动物源毒素残留检测，然后将鱼皮加入超纯水浸泡，直到含有胶原蛋白的原料冻成松散的组织颗粒，用玻璃棒搅拌均匀，成糊状；将糊状的组织颗粒再加入10倍体积的超纯水，按组织捣碎机的操作规程匀浆3次，至完全悬浮；将组织颗粒绞碎均匀后加入超纯水至组织的含量为25克／升，混匀；加冰醋酸至组织悬浮液，调制溶液浓度0.5毫克/毫升；消化：称取胃蛋白酶，将胃蛋白酶溶于0.5M醋酸中制成10mg/ml的胃蛋白酶溶液，然后转入到组织悬浮液至0.1mg/ml，即每100ml匀浆中加入1ml的胃蛋白酶溶液，混匀，室温消化7-10天；2）去除杂质：将粉碎物置于低温搅拌机中，按照粉碎物与无离子水体积比为1:3的比例进行搅拌混合30分钟；静止10分钟后除去上层浮物，然后置于过滤装置中，进行吸附过滤，收集过滤后的粉碎物；3）第一次分解：中第一次分解包括以下步骤：将步骤2)中的粉碎物与水以体积比为1:3的比例混合得混合物，并将温度调节至30℃，温度pH为7；将含有枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌的培养液以体积比2:1的比例搅拌混合5分钟，加入到混合物中；匀速搅拌，在温度30℃，pH为7下保持24小时；混合液置入高速离心机中的离心罐中，离心15分钟，静止沉淀10分钟；将上述混合物进行提纯，提取纯方法采用膜分离法，采用3000Da和1000Da的超滤膜截留离心后的上清液，分离得到3000Da-1000Da的胶原蛋白肽组分；置于真空过滤装置中，抽滤，干燥，灭菌；4）第二次分解：将第一次分解获得的产物与水以体积比为60：40的比例混合，在35℃温度下恒温搅拌30分钟；按胶原蛋白原料重量的0.5％向混合液中加入胰蛋白酶，按胶原蛋白原料重量的5％加入聚二乙醇，继续搅拌10分钟；调节pH值为7-8，37℃，反应8小时；迅速加热至45℃，终结酶活；混合液放入高速离心机中的离心罐中，离心15分钟；将上述混合物进行提纯，提取纯方法采用膜分离法，采用1000Da的超滤膜截留离心后的上清液，分离得到1000Da以下的胶原蛋白肽组分；5）第一次提纯：在上述步骤中得到的1000Da以下的胶原蛋白肽组分加入阴离子交换树脂，搅拌浸泡3-3.5h,让树脂完全吸附料液的色素和腥味；用层析柱将料液和树脂分离；杀菌，杀菌后过滤，将料液通过超滤膜分离装置过滤，得超滤透析液；离心提纯：将透析后的溶液高速冷冻离心，最后通过微分子对撞工艺进行最后的提纯，所得沉淀为最后纯化的胶原蛋白；6）第二次提纯：再将最后纯化后的胶原蛋白，经过一种纳米级胶原蛋白提纯设备（我公司专利设备）提纯之后得到纳米级混合粉；7）纳米级混料进行对撞：将混合的纳米级胶原...

【专利技术属性】
技术研发人员：田娟，
申请(专利权)人：上海新肌生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：上海,31