The present invention relates to a method for isolation, purification and identification of intramuscular adipocytes of Qinchuan beef cattle. The longissimus dorsi muscle of Qinchuan beef cattle is digested by type II collagenase, and the tissue pieces digested by type II collagenase are neutralized by DMEM/F12 medium containing 10% fetal bovine serum. Cells are obtained by filtration and centrifugation, and then washed and centrifuged and suspended in DMEM/F12 medium containing 10% FBS. After counting, the cells were inoculated in a culture dish, cultured in a CO2 incubator for 1.5 hours, washed with sterile phosphate buffer solution to remove non-adherent cells, and then cultured in a incubator with a concentration of 5% CO2 at 37 C. The cells were replaced every two days. After the cell convergence reached 70%-80%, the positive cells were identified by immunofluorescence labeling. The positive rate of preadipocytes in beef cattle intramuscular adipocytes obtained by this method is high, which lays a foundation for the study of improving intramuscular adipose deposition without increasing subcutaneous and visceral adipose deposition.
【技术实现步骤摘要】
一种秦川肉牛肌内脂肪细胞分离的方法
本专利技术属于细胞生物学、细胞工程
,具体涉及一种秦川肉牛肌内脂肪细胞的分离方法。
技术介绍
家畜体内有4个主要脂肪组织位置:内脏,皮下,肌肉内和肌肉间。肌肉内脂肪组织的积累是非常重要的,而脂肪组织在其他位置的过量积累是对畜牧生产的负担,大大增加生产成本,常见的表型是,某些动物比同类动物大得多,主要不是肌肉内脂肪组织的积累,而主要是皮下或内脏脂肪的积累。然而,到目前为止,导致肌内脂肪优先积累的机制仍然定义不明确。脂肪细胞,特别是肌内脂肪细胞,在胎儿肌肉发育过程中与肌原细胞拥有共同的祖细胞。探索间充质祖细胞向肌源性或脂肪纤维母细胞谱系早期分化的机制将有助于了解肌内脂肪细胞的优先形成,从而促进大理石花纹沉积的机理。与这个概念一致,越来越多的证据显示肌内脂肪细胞与皮下和内脏脂肪细胞相比表现不同,因此,探索肌内脂肪细胞的独特发育起源和性质,实现增强牛肉大理石花纹,而不提高动物的整体肥胖的目标,是申请人研究的课题之一。
技术实现思路
本专利技术的目的在于,提供一种秦川肉牛肌内脂肪细胞的分离方法,为探究肌内脂肪的沉积调控机制奠定基础。为了实现上述任务,本专利技术采取如下的技术解决方案:一种秦川肉牛肌内脂肪细胞的分离方法,其特征在于,按下列步骤实施:1)将无菌条件下分离的4日龄秦川肉牛背最长肌组织,用PBS加2%的青霉素和链霉素清洁,然后切成1mm3~2mm3的组织块;2)将组织块加入离心管中,用II型胶原酶消化,经II型胶原酶消化后的组织块用含有10%FBS的DMEM/F12培养基中和,然后用70目和200目的不锈钢筛网进行过滤, ...
【技术保护点】
1.一种秦川肉牛肌内脂肪细胞的分离方法,其特征在于,按下列步骤实施:1)将无菌条件下分离的4日龄秦川肉牛背最长肌组织,用PBS加2%的青霉素和链霉素清洁,然后切成1mm3~2mm3的组织块;2)将组织块加入离心管中,用II型胶原酶消化,经II型胶原酶消化后的组织块用含有10%FBS的DMEM/F12培养基中和,然后用70目和200目的不锈钢筛网进行过滤,将得到的滤液以1500rpm离心10分钟,弃去上清液,得到细胞;3)将得到的细胞用无血清DMEM/F12培养基重悬并以1500rpm离心10分钟,离心后洗涤两次;4)洗涤后的细胞重悬于含有10%FBS的DMEM/F12培养基中,计数后,将细胞以2.5×105个细胞的密度接种在培养皿中;将培养皿置于CO2浓度为5%的培养箱中培养1.5小时,然后用无菌PBS洗涤以除去非粘附细胞,并用新鲜的含有10%FBS的DMEM/F12培养基替换培养皿中的原培养基;5)将细胞培养在37℃、CO2浓度为5%的培养箱中,每隔2天换一次新鲜的含有10%FBS的DMEM/F12培养基,待细胞汇合度到达到70%‑80%后,使用前脂肪细胞特异性标记Pref‑1进行细 ...
【技术特征摘要】
1.一种秦川肉牛肌内脂肪细胞的分离方法,其特征在于,按下列步骤实施:1)将无菌条件下分离的4日龄秦川肉牛背最长肌组织,用PBS加2%的青霉素和链霉素清洁,然后切成1mm3~2mm3的组织块;2)将组织块加入离心管中,用II型胶原酶消化,经II型胶原酶消化后的组织块用含有10%FBS的DMEM/F12培养基中和,然后用70目和200目的不锈钢筛网进行过滤,将得到的滤液以1500rpm离心10分钟,弃去上清液,得到细胞;3)将得到的细胞用无血清DMEM/F12培养基重悬并以1500rpm离心10分钟,离心后洗涤两次;4)洗涤后的细胞重悬于含有10%FBS的DMEM/F12培养基中,计数后,将细胞以2.5×105个细胞的密度接种在培养皿中;将培养皿置于CO2浓度为5%的培养箱中培养1.5小时,然后用无菌PBS洗涤以除去非粘附细胞,并用新鲜的含有10%FBS的DMEM/F12培养基替换培养皿中的原培养基;5)将细胞培养在37℃、CO2浓度为5%的培养箱中,每隔2天换一次新鲜的含有10%FBS的DMEM/F12培养基,待细胞汇合度到达到70%-80%后,使用前脂肪细胞特异性...
【专利技术属性】
技术研发人员:王晓宇,昝林森,李安宁,张愈,杨武才,
申请(专利权)人:西北农林科技大学,
类型:发明
国别省市:陕西,61
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