一种重组人源胶原蛋白液体制剂及纯度检测方法技术

一种重组人源胶原蛋白液体制剂，按重量百分比计，包括：重组人源胶原蛋白1.0%，1，2‑己二醇1.5‑3%，甘油20‑35%，乙二胺四乙酸二钠（EDTA‑2Na）0.1‑0.3%，PEG/PPG 17/6共聚物1‑3%和余量的水；所述1，2‑己二醇作为液体制剂的抑菌剂；所述甘油、乙二胺四乙酸二钠（EDTA‑2Na）和PEG/PPG 17/6共聚物作为液体制剂的保护剂；HPLC检测重组人源胶原蛋白纯度，蛋白稳定剂有效提高了蛋白液体在常温下保质期，本发明专利技术属于化妆品领域。

A Recombinant Human Collagen Liquid Preparation and Purity Detection Method

A liquid preparation of recombinant human collagen protein is composed of 1.0% recombinant human collagen, 1,2 hexanediol, 1.5 3%, glycerol, 20 35%, EDTA 2Na, 0.1 0.3%, PEG/PPG 17/6 copolymer, 1 3% and excess water in weight percentage. The 1,2 hexanediol is used as a bacteriostatic agent of the liquid preparation, and the glycerol, ethylenediamine tetraacetic acid disodium salt are described. (EDTA_2Na) and PEG/PPG 17/6 copolymers are used as protective agents for liquid preparations; the purity of recombinant human collagen is detected by HPLC, and the protein stabilizer effectively improves the shelf life of protein liquids at room temperature. The present invention belongs to the field of cosmetics.

【技术实现步骤摘要】
一种重组人源胶原蛋白液体制剂及纯度检测方法
本专利技术涉及医疗美容和生物
，特别涉及一种重组人源胶原蛋白液体制剂及纯度检测方法。
技术介绍
近年来，随着基因工程技术的进一步成熟，生物制品不断涌现，重组蛋白在医疗、化妆品、药品等领域取得了突飞猛进的发展。蛋白本身属于可降解材料，保持原有结构不破坏，是保持是活性的必要条件，不同重组蛋白有其不同的一级结构和空间结构，且蛋白固体制剂比液体制剂稳定性好，但是液体制剂有其使用的便捷性，比如注射液、酶制剂、护肤品的使用等都离不开液体，故本专利技术摸索重组人源胶原蛋白在液体制剂中的稳定性；在化妆品领域对重组人源胶原蛋白液体制剂使用稳定剂时，要求对人皮肤无刺激性且无刺激性气味。
技术实现思路
本专利技术目的是提供一种重组人源胶原蛋白液体制剂及纯度检测方法，解决了以上技术问题。为了实现上述技术目的，达到上述的技术要求，本专利技术所采用的技术方案是：一种重组人源胶原蛋白液体制剂，其特征在于，按重量百分比计，包括：重组人源胶原蛋白1.0%，1，2-己二醇1.5-3%，甘油20-35%，乙二胺四乙酸二钠（EDTA-2Na）0.1-0.3%，PEG/PPG17/6共聚物1-3%和余量的水；所述1，2-己二醇作为液体制剂的抑菌剂；所述甘油、乙二胺四乙酸二钠（EDTA-2Na）和PEG/PPG17/6共聚物作为液体制剂的保护剂。优选的：所述重组人源胶原蛋白是由SEQIDNO:1所示的氨基酸序列组成，含有599个氨基酸，分子量为55.0KDa。优选的：所述抑菌剂可选用重量百分比为1-3%1,2-己二醇。优选的：所述保护剂可选用重量百分比为20-35%甘油、0.1-0.3%乙二胺四乙酸二钠（EDTA-2Na）和1-3%PEG/PPG17/6共聚物中的一种或几种的组合。一种重组人源胶原蛋白液体制剂的纯度检测方法，其特征在于，包括HPLC检测方法，该方法色谱柱以适合分离分子量为5-1250KD蛋白质的色谱用凝胶为填充剂（如SEC300凝胶色谱柱或其他适宜的色谱柱），流动相为0.1mol/L磷酸盐缓冲液（含0.06mol/L磷酸氢二溶液和0.04mol/L磷酸二氢钠溶液）-乙腈（90:10）；上样量应不低于20ug，在波长220nm处检测，以重组人源胶原蛋白（RHC）色谱峰计算的理轮板数应不低于1500，按面积归一化法计算。本专利技术的有益效果；一种重组人源胶原蛋白液体制剂及纯度检测方法，与现有技术相比：抑菌剂和保护剂的增加，使得重组人源胶原蛋白制剂在常温下存储方便，不需要无菌过滤或者冷冻保存，有效地提高了重组人源胶原蛋白液体制剂在常温下的保质期，具有高稳定性；当重组人源胶原蛋白液体制剂用于化妆品时，该液体制剂具有高保湿、丝滑和降粘的作用，还具有螯合离子、辅助美白和辅助防腐的功效。附图说明图1为现有技术的具体实施示意图；图2为本专利技术实施例1的具体实施示意图；图3为本专利技术实施例2的具体实施示意图；图4为本专利技术实施例3的具体实施示意图；图5为本专利技术实施例4的具体实施示意图。具体实施方式为了使本专利技术的专利技术目的、技术方案及其有益技术效果更加清晰，以下结合附图和具体实施方式，对本专利技术进行进一步详细说明；在附图中：一种重组人源胶原蛋白液体制剂，按重量百分比计，包括：重组人源胶原蛋白1.0%，1，2-己二醇1.5-3%，甘油20-35%，乙二胺四乙酸二钠（EDTA-2Na）0.1-0.3%，PEG/PPG17/6共聚物1-3%和余量的水；所述1，2-己二醇作为液体制剂的抑菌剂；所述甘油、乙二胺四乙酸二钠（EDTA-2Na）和PEG/PPG17/6共聚物作为液体制剂的保护剂。所述重组人源胶原蛋白是由SEQIDNO:1所示的氨基酸序列组成，含有599个氨基酸，分子量为55.0KDa。所述抑菌剂可选用重量百分比为1-3%1,2-己二醇。所述保护剂可选用重量百分比为20-35%甘油、0.1-0.3%乙二胺四乙酸二钠（EDTA-2Na）和1-3%PEG/PPG17/6共聚物中的一种或几种的组合。一种重组人源胶原蛋白液体制剂的纯度检测方法，包括HPLC检测方法，该方法色谱柱以适合分离分子量为5-1250KD蛋白质的色谱用凝胶为填充剂（如SEC300凝胶色谱柱或其他适宜的色谱柱），流动相为0.1mol/L磷酸盐缓冲液（含0.06mol/L磷酸氢二溶液和0.04mol/L磷酸二氢钠溶液）-乙腈（90:10）；上样量应不低于20ug，在波长220nm处检测，以重组人源胶原蛋白（RHC）色谱峰计算的理轮板数应不低于1500，按面积归一化法计算。本专利技术的具体实施；现有技术中：重组人源胶原蛋白（RHC）液体无菌制剂，配制成10g/L，初始纯度95.85%，25℃室温下12个月，重组人源胶原蛋白（RHC）纯度为27.44%，纯度降低值68.41%；如图1，随着时间的推移，RHC保留时间与面积百分比的实施示意图。实施例1：重组人源胶原蛋白（RHC）溶液，用无菌水配制成10g/L，初始纯度95.61%，加入抑菌剂（重量百分比为2.5%的1,2-己二醇），25℃室温下12个月，重组人源胶原蛋白（RHC）纯度为58.12%，纯度降低值37.49%；本实施例中特别之处在于添加重量百分比为2.5%的1,2-己二醇，多元醇具有抑菌性，这样操作的重组人源胶原蛋白（RHC）溶液存储方便，不需要无菌过滤或冷冻保存；如图2，随着时间的推移，RHC保留时间与面积百分比的实施示意图。实施例2：重组人源胶原蛋白（RHC）溶液，用无菌水配制成10g/L，初始纯度95.61%，加入抑菌剂（重量百分比为2.5%的1,2-己二醇），加入保护剂（重量百分比为25%的甘油），25℃室温下12个月，重组人源胶原蛋白（RHC）为纯度69.28%，纯度降低值26.33%；本实施例中特别之处在于加入重量百分比为25%的甘油对重组人源胶原蛋白（RHC）有保护作用；如图3，随着时间的推移，RHC保留时间与面积百分比的实施示意图。实施例3：重组人源胶原蛋白（RHC）溶液，用无菌水配制成10g/L，初始纯度95.61%，加入抑菌剂（重量百分比为2.5%的1,2-己二醇），加入保护剂（重量百分比为25%的甘油和重量百分比为3%的PEG/PPG17/6共聚物），25℃室温下12个月，重组人源胶原蛋白（RHC）纯度为73.92%，纯度降低值14.2%；本实施例中特别之处在于加入重量百分比为3%的PEG/PPG17/6共聚物，PEG/PPG-17/6共聚物在化妆品中作非离子型表面活性剂，它结构头端没有极性亲水基团，不会破坏蛋白质与蛋白质之间的作用，不会使蛋白质变性，可以使蛋白质溶解和分离，但却可以保持蛋白质构象以及相互作用；PEG/PPG-17/6共聚物在化妆品中具有高保湿、丝滑和降粘的作用；如图4，随着时间的推移，RHC保留时间与面积百分比的实施示意图。实施例4：重组人源胶原蛋白（RHC）溶液，用无菌水配制成10g/L，初始纯度为95.61%，加入抑菌剂（重量百分比为2.5%的1,2-己二醇）,加入保护剂（重量百分比为25%的甘油，重量百分比为3%的PEG/PPG17/6共聚物，重量百分比为0.3%的乙二胺四乙酸二钠（EDTA-2Na）），25℃室温下12个月，重组人源胶原蛋白（RHC）为88.5本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种重组人源胶原蛋白液体制剂，其特征在于，按重量百分比计，包括：重组人源胶原蛋白1.0%，1，2‑己二醇1.5‑3%，甘油20‑35%，乙二胺四乙酸二钠（EDTA‑2Na）0.1‑0.3%，PEG/PPG 17/6共聚物1‑3%和余量的水；所述1，2‑己二醇作为液体制剂的抑菌剂；所述甘油、乙二胺四乙酸二钠（EDTA‑2Na）和PEG/PPG 17/6共聚物作为液体制剂的保护剂。

【技术特征摘要】
1.一种重组人源胶原蛋白液体制剂，其特征在于，按重量百分比计，包括：重组人源胶原蛋白1.0%，1，2-己二醇1.5-3%，甘油20-35%，乙二胺四乙酸二钠（EDTA-2Na）0.1-0.3%，PEG/PPG17/6共聚物1-3%和余量的水；所述1，2-己二醇作为液体制剂的抑菌剂；所述甘油、乙二胺四乙酸二钠（EDTA-2Na）和PEG/PPG17/6共聚物作为液体制剂的保护剂。2.根据权利要求1所述的一种重组人源胶原蛋白液体制剂，其特征在于，所述重组人源胶原蛋白是由SEQIDNO:1所示的氨基酸序列组成，含有599个氨基酸，分子量为55.0KDa。3.根据权利要求1所述的一种重组人源胶原蛋白液体制剂，其特征在于，所述抑菌剂可选用重量百分比为1-3%1,2-己二醇。4.根据...

【专利技术属性】
技术研发人员：冯丽萍，沈凤娟，赵健烽，季乐，黄建民，
申请(专利权)人：江苏江山聚源生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：江苏,32