用于制备脐带间充质干细胞的试剂盒制造技术

本发明专利技术公开了一种用于制备脐带间充质干细胞的试剂盒，特征是盒内包括分别瓶装保存的脐带保存液、脐带洗涤液、脐带分解液、细胞洗涤液、细胞培养液、细胞消化液、细胞冻存液，利用本发明专利技术试剂盒内的试剂可在较短时间获得大量脐带间充质干细胞，使用方便、安全可靠。

Kit for preparation of umbilical cord mesenchymal stem cells

The invention discloses a kit for preparing umbilical cord mesenchymal stem cells. The kit is characterized by comprising separately bottled umbilical cord preservation solution, umbilical cord washing solution, umbilical cord decomposition solution, cell washing solution, cell culture solution, cell digestion solution and cell cryopreservation solution. Using the kit, a large number of umbilical cord mesenchymal stem cells can be obtained in a relatively short time with convenient use. Safety and reliability.

【技术实现步骤摘要】
用于制备脐带间充质干细胞的试剂盒
本专利技术属于干细胞
，涉及一种用于制备脐带间充质干细胞的试剂盒。
技术介绍
间充质干细胞来源于发育早期的中胚层和外胚层，最初在骨髓中发现，因其具有多向分化潜能、造血支持和促进干细胞植入、免疫调控和自我复制等特点而日益受到人们的关注，其在体内或体外特定的诱导条件下，可分化为脂肪、骨、软骨、肌肉、肌腱、韧带、神经、肝、心肌、内皮等多种组织细胞，连续传代培养和冷冻保存后仍具有多向分化潜能，具有非常广阔的临床应用前景。间充质干细胞主要来源于骨髓、脐带、脂肪等。因为随着年龄增长，干细胞数量和增殖能力显著下降，因此，骨髓和脂肪来源的间充质干细胞数量和活性受到一定影响，且获取骨髓和和脂肪均有创，造成供体痛苦，还可能导致感染、出血和慢性疼痛等。脐带间充质干细胞（UmbilicalCordMesenchymalStemCells，UC-MSCs）是指存在于新生儿脐带组织中的一种具有自我更新、多向分化潜能的干细胞，能分化为心脏、肝、肾、肺、胰腺、神经、骨骼、肌肉、脂肪等多种组织细胞，几乎涵盖了人体的所有组织细胞。脐带间充质干细胞的获得有组织块贴壁法和胶原酶消化法。组织块贴壁法原代培养时间为两到三周左右，培养时间较长，而采用胶原酶消化法可快速获得大量的贴壁生长的间充质干细胞，该方法简便易行，可更好地保持细胞活力，大大缩短了原代培养时间。脐带间充质干细胞具有以下功能和用途：1、修复损伤或病变的组织器官，用于治疗心脑血管疾病、肝病、骨和肌肉衰退性疾病、脑及脊髓神经损伤和老年痴呆等；2、具有较强的免疫调节作用，可用于治疗红斑狼疮和硬皮病等自身免疫性疾病，降低细胞或器官移植后的免疫排斥反应，提高细胞或器官移植的成功率；3、促进造血恢复功能，与单一造血干细胞移植比较，间充质干细胞和造血干细胞共移植能显著提高白血病和难治性贫血等疾病的治疗效果。脐带间充质干细胞具有以下优势：1、脐带中间充质干细胞含量丰富；2、脐带间充质干细胞增殖能力和分化能力更强；3、可以多次扩增，为临床治疗提供大量的种子细胞，足以满足治疗需要；4、免疫原性低；5、广泛的临床应用和巨大的医疗前景：对心肌梗死、糖尿病、肝硬化、红斑狼疮、帕金森综合症、老年痴呆、脊髓损伤等多种疾病具有一定治疗效果，随着科技进步，可用于组织和器官的修复和再造。脐带间充质干细胞具有极其广阔的临床应用前景。因此，开发简单、快速、高新、安全获得大量脐带间充质干细胞方法成为当务之急。
技术实现思路
本专利技术目的是提供一利专用于胶原酶消化法提取脐带间充质干细胞的试剂盒，利用试剂盒内的试剂可快速获得大量脐带间充质干细胞，使用方便，安全可靠。为实现上述目的，本专利技术采用的技术方案是：用于制备脐带间充质干细胞的试剂盒，包括分别瓶装保存的脐带保存液、脐带洗涤液、脐带分解液、细胞洗涤液、细胞培养液、细胞消化液、细胞冻存液。所述脐带保存液为含青霉素100～200ug/ml、链霉素100～200ug/ml、两性霉素2.5～5μg/ml、孕酮2～3ng/ml、胰岛素10～30ug/ml、维生素C2～4nmol/ml的DMEM、DMEM/F12、MEM或RPMI-1640培养基；所述脐带洗涤液为含青霉素100～200ug/ml、链霉素100～200ug/ml、两性霉素2.5～5μg/ml、孕酮2～3ng/ml、胰岛素10～30ug/ml、维生素C2～4nmol/ml的生理盐水、PBS、D-Hanks或HBS；所述脐带分解液为含胶原酶Ⅱ1～2mg/ml、脱氧核糖核酸酶Ⅰ0.1～0.2mg/ml、孕酮2～3ng/ml、胰岛素10～30ug/ml、维生素C2～4nmol/ml的DMEM、DMEM/F12、MEM或RPMI-1640培养基；所述细胞洗涤液为含孕酮2～3ng/ml、胰岛素10～30ug/ml、维生素C2～4nmol/ml的PBS、D-Hanks或HBSS；所述细胞培养液为含孕酮2～3ng/ml、胰岛素10～30ug/ml、维生素C2～4nmol/ml的间充质干细胞无血清生长培养基，该培养基化学成分限定，含L-谷氨酰胺，不含酚红和抗生素；所述细胞消化液为含Trypsin-EDTA1.25～2.5mg/ml，含孕酮2～3ng/ml、胰岛素10～30ug/ml、维生素C2～4nmol/ml的PBS、D-Hanks或HBSS溶液；所述细胞冻存液为含DMSO60～200mg/ml，含孕酮2～3ng/ml、胰岛素10～30ug/ml、维生素C2～4nmol/ml间充质干细胞无血清生长培养基。本专利技术提供的一种制备脐带间充质干细胞的试剂盒，该试剂盒中，脐带保存液的作用是保证脐带标本在采集之后的运输过程中的活性，并消灭和预防细菌、真菌。脐带洗涤液的作用是洗涤除去脐带组织的血液细胞，同时消灭和预防细菌、真菌。脐带分解液的作用是消化脐带组织，获得单细胞悬液。细胞洗涤液的作用是洗涤获得的干细胞。细胞培养液为无血清生长培养基，且化学成分限定，减少动物来源的病原体感染风险，培养脐带间充质干细胞相对于使用胎牛血清而言更安全。细胞消化液的作用是细胞传代时，消化贴壁的间充质干细胞。细胞冻存液的作用是冻存获得的脐带间充质干细胞。本专利技术的用于制备脐带间充质干细胞的试剂盒，可在较短时间（2周内）获得大量脐带间充质干细胞，细胞数量可达1010数量级，并且具有使用方便，成本低廉，无血清，减少动物来源的病原体感染风险，更安全等特点，将在干细胞临床试验及其相关研究中发挥重要作用，应用前景极为广泛。具体实施方式下述实施例中所用方法如无特别说明均为常规方法，所需试剂耗材及实验仪器等均可通过商业途径购得。实施例一用于制备脐带间充质干细胞的试剂盒的制备及应用一、用于制备脐带间充质干细胞的试剂盒的制备1、溶液配置本专利技术的用于制备脐带间充质干细胞的试剂盒包括以下试剂：（1）脐带保存液配置方法：青霉素（品牌Amresco，货号0242）200mg、链霉素（品牌Amresco，货号0382）200mg、两性霉素（品牌Amresco，货号E437）5mg、孕酮（Sigma，V900699-5g）2μg、胰岛素（Sigma，I0908）10mg、维生素C（Sigma，A5960-10mg）2mmol，溶于1000mlDMEM培养基中0.22um过滤除菌即可。（2）脐带洗涤液配置方法：青霉素200mg、链霉素200mg、两性霉素5mg、孕酮2μg、胰岛素10mg、维生素C2mmol，溶于1000ml生理盐水中0.22um过滤除菌即可。（3）脐带分解液配置方法：胶原酶Ⅱ（品牌sigma，货号C6885）1g、脱氧核糖核酸酶Ⅰ（品牌sigma，货号C4263）0.1g、孕酮2μg、胰岛素10mg、维生素C2mmol溶于1000mlDMEM培养基中，0.22um滤器过滤除菌即可。（4）细胞洗涤液配置方法：NaCl8.50g、Na2HPO4·12H2O3.58g、NaH2PO4·2H2O0.39g，加双蒸水至1000ml，调整pH至7.2-7.4之间，高压灭菌即得PBS溶液；孕酮2μg、胰岛素10mg、维生素C2mmol溶于上述配置好的1000mlPBS溶液中，0.22um滤器过滤除菌即可。（5）细胞培养液配置方法：无血清基础培养基(品牌Lonz本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.用于制备脐带间充质干细胞的试剂盒，其特征是：盒内包括分别瓶装保存的脐带保存液、脐带洗涤液、脐带分解液、细胞洗涤液、细胞培养液、细胞消化液、细胞冻存液。

【技术特征摘要】
1.用于制备脐带间充质干细胞的试剂盒，其特征是：盒内包括分别瓶装保存的脐带保存液、脐带洗涤液、脐带分解液、细胞洗涤液、细胞培养液、细胞消化液、细胞冻存液。2.根据根据权利要求1所述的用于制备脐带间充质干细胞的试剂盒，其特征是：所述试剂盒内各组分的量为：脐带保存液1瓶，50ml/瓶；脐带洗涤液1瓶，50ml/瓶；脐带分解液1瓶，50ml/瓶；细胞洗涤液5瓶，1000ml/瓶；细胞培养液10瓶，1000ml/瓶；细胞消化液2瓶，1000ml/瓶；细胞冻存液2瓶，1000ml/瓶。3.根据权利要求1或2所述的用于制备脐带间充质干细胞的试剂盒，其特征是：所述脐带保存液为含青霉素100～200ug/ml、链霉素100～200ug/ml、两性霉素2.5～5μg/ml、孕酮2～3ng/ml、胰岛素10～30ug/ml、维生素C2～4nmol/ml的DMEM、DMEM/F12、MEM或RPMI-1640培养基。4.根据权利要求1或2所述的用于制备脐带间充质干细胞的试剂盒，其特征是：所述脐带洗涤液为含青霉素100～200ug/ml、链霉素100～200ug/ml、两性霉素2.5～5μg/ml、孕酮2～3ng/ml、胰岛素10～30ug/ml、维生素C2～4nmol/ml的生理盐水、PBS、D-Hanks或HBS。5.根据权利要求1或2所述的用于制备脐带间充质干细胞的试剂盒，其特征是...

【专利技术属性】
技术研发人员：张炳强，
申请(专利权)人：青岛瑞思德生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：山东,37