生姜药材的UPLC特征图谱构建方法和检测方法技术

本发明专利技术涉及一种生姜药材的UPLC特征图谱构建方法和检测方法。该特征图谱构建方法包括如下步骤：称定6‑姜辣素、6‑姜烯酚和8‑姜酚对照品，加溶剂溶解，即得对照品溶液；称定生姜药材，加入提取溶剂，加热回流提取；然后滤过，取续滤液，作为供试品溶液；取生姜标准汤剂，同法制得标准汤剂供试品溶液；超高效液相色谱检测：吸取对照品溶液、供试品溶液、标准汤剂供试品溶液，注入液相色谱仪，比较所得供试品图谱与标准汤剂供试品图谱，确定水溶性共有峰，获得UPLC特征图谱。该特征图谱能用于定性、定量分析生姜药材的质量，能够确保采用该药材制备的生姜传统汤剂的质量，也适用于检测含生姜的其它制剂。

【技术实现步骤摘要】
生姜药材的UPLC特征图谱构建方法和检测方法
本专利技术涉及中药材质量研究，特别是涉及一种生姜药材的UPLC特征图谱构建方法和检测方法。
技术介绍
生姜(ZingiberofficinaleRosc.)又称姜，属于姜科姜属多年生宿根性草本植物，是常用药食两用品种，鲜生姜入药始载于《名医别录》曰：“生姜、干姜生犍为川谷....九月采之”。其性微温、味辛，具有解表散寒，温中止呕，化痰止咳，解鱼蟹毒的功效。主要用于风寒感冒，胃寒呕吐，寒痰咳嗽，鱼蟹中毒。生姜的化学成分主要包括姜辣素类、挥发油、黄酮类、氨基酸、糖类、有机酸及无机元素等，其中姜辣素类及挥发油为主要组成，如6-姜辣素、8-姜酚、10-姜酚、α-蒎烯、α-姜烯等。生姜具有较强的临床应用价值，市场需求广阔，被开发成中药配方颗粒及相关复方制剂广泛用于临床。中药材的临床制剂多以传统汤剂为主。中药汤剂的物质基础，是中医理论指导下防治疾病的基础。现行的法定标准仅针对单一成分进行定量控制，量效关系不能全面反映制剂的整体作用。在现阶段，中药材绝大多数有效成分未明确的情况下，能够指向中药制剂，尤其是汤剂的中药材指纹图谱/特征图谱的建立能大大提高中药质量控制的技术水平及科技含量。《中国药典》2015年版将6-姜辣素、8-姜酚和10-姜酚作为生姜质量评价指标。传统方法关于生姜的指纹图谱建立多采用的是HPLC法，且均只针对生姜原药材本身，多以脂溶性成分为指标成分，或按照药典以6-姜辣素、8-姜酚和10-姜酚作为指标成分，主要用于生姜药材真伪、产地、品质差异的鉴别，较难全面反映生姜的质量特征。
技术实现思路
基于此，有必要提供一种生姜药材的UPLC特征图谱构建方法。通过该方法建立的特征图谱具有4个特征峰，其中包括极性相近的水溶性成份6-姜辣素、6-姜烯酚和8-姜酚的特征峰，能够更全面地反映生姜药材的特征，同时可以准确反映由该生姜药材制成的汤剂的质量，且方法准确可靠、重复性好、操作简便。本专利技术的目的是通过以下技术方案实现的：一种生姜药材的UPLC特征图谱构建方法，包括如下步骤：对照品溶液的制备：称定6-姜辣素、6-姜烯酚和8-姜酚对照品，分别加溶剂溶解，即得所述对照品溶液；供试品溶液的制备：称定生姜药材，加入提取溶剂，加热回流提取；然后滤过，取续滤液，即得所述供试品溶液；所述提取溶剂为乙醇、体积浓度为60％甲醇水溶液、甲醇中的一种；标准汤剂供试品溶液的制备：取生姜标准汤剂样品，加入提取溶剂，加热回流提取；然后滤过，取续滤液，即得所述标准汤剂供试品溶液；所述提取溶剂为乙醇、体积浓度为60％甲醇水溶液、甲醇中的一种；超高效液相色谱检测：分别吸取所述对照品溶液、供试品溶液、标准汤剂供试品溶液，注入超高效液相色谱仪，测定；比较所得供试品图谱与标准汤剂供试品图谱，标定水溶性共有峰，获得生姜药材的UPLC特征图谱。在其中一些实施例中，供试品溶液的制备中，所述生姜药材包含有不同产地的生姜药材。本专利技术的供试品原料来自全国生姜产量较大的5个道地或主要产区共18批次样品，具有充分的代表性。在其中一个实施例中，所述超高效液相色谱检测采用的条件包括：固定相：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱；流动相：以体积比为(3-5)：1的甲醇和乙腈的混合液为流动相A，以水为流动相B；采用梯度洗脱；所述梯度洗脱的方法包括：0-2min，保持流动相A的体积百分数为35％，流动相B的体积百分数为65％；2-5min，流动相A的体积百分数由35％上升至45％，流动相B的体积百分数由65％降低至55％；5-6.5min，保持流动相A的体积百分数为45％，流动相B的体积百分数为55％；6.5-9min，流动相A的体积百分数由45％上升至55％，流动相B的体积百分数由55％降低至45％；9-15min，保持流动相A的体积百分数为55％，流动相B的体积百分数为45％；15-25min，流动相A的体积百分数由55％上升至100％，流动相B的体积百分数由45％降低至0％；25-30min，保持流动相A的体积百分数为100％，流动相B的体积百分数为0％。在其中一个实施例中，所述供试品溶液的制备和/或所述标准汤剂供试品溶液的制备中，所述提取溶剂为甲醇，用量为每1g生姜药材加入20-30mL；提取时间为15-60min。在其中一个实施例中，所述超高效液相色谱检测的条件还包括：所述流动相的流速为0.2-0.45mL/min；柱温为25-35℃；检测波长为280nm。在其中一个实施例中，所述对照品溶液的制备中，所述溶剂为甲醇，用量为每0.1mg6-姜辣素、6-姜烯酚或8-姜酚对照品加入0.8-1.2mL。本专利技术还提供一种生姜药材的检测方法，包括如下步骤：参照物溶液的制备：称定6-姜辣素、6-姜烯酚和8-姜酚对照品，分别加溶剂溶解，即得所述参照物溶液；待测样品溶液的制备：称定待测生姜药材，加入提取溶剂，加热至回流提取；然后滤过，取续滤液，即得所述待测样品溶液；所述提取溶剂为乙醇、体积浓度为60％甲醇水溶液、甲醇中的一种；检测：分别吸取所述参照物溶液和待测样品溶液，注入超高效液相色谱仪，测定，获得所述待测生姜药材的UPLC图谱；比较所述待测生姜药材的UPLC图谱与所述构建方法获得的生姜药材的UPLC特征图谱。在其中一个实施例中，所述超高效液相色谱检测采用的条件包括：固定相：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱；流动相：以体积比为(3-5)：1的甲醇和乙腈的混合液为流动相A，以水为流动相B；采用梯度洗脱；所述梯度洗脱的方法包括：0-2min，保持流动相A的体积百分数为35％，流动相B的体积百分数为65％；2-5min，流动相A的体积百分数由35％上升至45％，流动相B的体积百分数由65％降低至55％；5-6.5min，保持流动相A的体积百分数为45％，流动相B的体积百分数为55％；6.5-9min，流动相A的体积百分数由45％上升至55％，流动相B的体积百分数由55％降低至45％；9-15min，保持流动相A的体积百分数为55％，流动相B的体积百分数为45％；15-25min，流动相A的体积百分数由55％上升至100％，流动相B的体积百分数由45％降低至0％；25-30min，保持流动相A的体积百分数为100％，流动相B的体积百分数为0％。在其中一个实施例中，所述提取溶剂为甲醇，用量为每1g生姜药材加入20-30mL；提取时间为15-60min。在其中一个实施例中，所述超高效液相色谱检测的条件还包括：所述流动相的流速为0.2-0.45mL/min；柱温为25-35℃；检测波长为280nm。在其中一个实施例中，所述参照物溶液的制备中，所述溶剂为甲醇，用量为每0.1mg的6-姜辣素、6-姜烯酚或8-姜酚对照品加入0.8-1.2mL。与现有技术相比，本专利技术具有如下有益效果：(1)本专利技术在构建生姜药材UPLC特征图谱的过程中：对其汤剂与药材共有的水溶性成分特征成分进行研究，并作为特征图谱特征峰确定的依据，能够很好的表征药材原料到汤剂的物质传递，不仅能够很好的把控药材质量，而还能够确保汤剂的质量；(2)本专利技术通过采用超高效液相色谱(UPLC)法，并对色谱条件进行合理控制，以体积比为(3-5)：1的甲醇和乙腈的混合液为流动相A，以水为流动相B进本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种生姜药材的UPLC特征图谱构建方法，其特征在于，包括如下步骤：对照品溶液的制备：称定6‑姜辣素、6‑姜烯酚和8‑姜酚对照品，分别加溶剂溶解，即得所述对照品溶液；供试品溶液的制备：称定生姜药材，加入提取溶剂，加热回流提取；然后滤过，取续滤液，即得所述供试品溶液；所述提取溶剂为乙醇、体积浓度为60％甲醇水溶液、甲醇中的一种；标准汤剂供试品溶液的制备：取生姜标准汤剂样品，加入提取溶剂，加热回流提取；然后滤过，取续滤液，即得所述标准汤剂供试品溶液；所述提取溶剂为乙醇、体积浓度为60％甲醇水溶液、甲醇中的一种；超高效液相色谱检测：分别吸取所述对照品溶液、供试品溶液、标准汤剂供试品溶液，注入超高效液相色谱仪，测定；比较所得供试品图谱与标准汤剂供试品图谱，标定水溶性共有峰，获得生姜药材的UPLC特征图谱。

【技术特征摘要】
1.一种生姜药材的UPLC特征图谱构建方法，其特征在于，包括如下步骤：对照品溶液的制备：称定6-姜辣素、6-姜烯酚和8-姜酚对照品，分别加溶剂溶解，即得所述对照品溶液；供试品溶液的制备：称定生姜药材，加入提取溶剂，加热回流提取；然后滤过，取续滤液，即得所述供试品溶液；所述提取溶剂为乙醇、体积浓度为60％甲醇水溶液、甲醇中的一种；标准汤剂供试品溶液的制备：取生姜标准汤剂样品，加入提取溶剂，加热回流提取；然后滤过，取续滤液，即得所述标准汤剂供试品溶液；所述提取溶剂为乙醇、体积浓度为60％甲醇水溶液、甲醇中的一种；超高效液相色谱检测：分别吸取所述对照品溶液、供试品溶液、标准汤剂供试品溶液，注入超高效液相色谱仪，测定；比较所得供试品图谱与标准汤剂供试品图谱，标定水溶性共有峰，获得生姜药材的UPLC特征图谱。2.根据权利要求1所述的生姜药材的UPLC特征图谱构建方法，其特征在于，所述超高效液相色谱检测采用的条件包括：固定相：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱；流动相：以体积比为(3-5)：1的甲醇和乙腈的混合液为流动相A，以水为流动相B；采用梯度洗脱；所述梯度洗脱的方法包括：0-2min，保持流动相A的体积百分数为35％，流动相B的体积百分数为65％；2-5min，流动相A的体积百分数由35％上升至45％，流动相B的体积百分数由65％降低至55％；5-6.5min，保持流动相A的体积百分数为45％，流动相B的体积百分数为55％；6.5-9min，流动相A的体积百分数由45％上升至55％，流动相B的体积百分数由55％降低至45％；9-15min，保持流动相A的体积百分数为55％，流动相B的体积百分数为45％；15-25min，流动相A的体积百分数由55％上升至100％，流动相B的体积百分数由45％降低至0％；25-30min，保持流动相A的体积百分数为100％，流动相B的体积百分数为0％。3.根据权利要求1所述的生姜药材的UPLC特征图谱构建方法，其特征在于，所述供试品溶液的制备和/或所述标准汤剂供试品溶液的制备中，所述提取溶剂为甲醇，用量为每1g生姜药材加入20-30mL；提取时间为15-60min。4.根据权利要求1-3任一项所述的生姜药材的UPLC特征图谱构建方法，其特征在于，所述超高效液相色谱检测的条件还包括：所述流动相的流速为0.2-0.45mL/min；柱温为25-35℃；检测波长为280nm。5.根据权利要求1-3任一项所述的生姜药材的UPL...

【专利技术属性】
技术研发人员：朱德全，彭劲源，罗宇琴，官永河，陈万发，霍文杰，
申请(专利权)人：广东一方制药有限公司，
类型：发明
国别省市：广东,44