【技术实现步骤摘要】
一种检测microRNA-21的电化学传感器、其制备方法及应用
本专利技术属于生命健康以及医学分析领域，具体涉及癌细胞中microRNA-21的检测方法，尤其涉及一种基于DNA串联体和富G-四链体线的多分支DNA纳米组装体超灵敏检测microRNA-21的电化学传感器及检测方法。
技术介绍
microRNA是一类小的内源性非编码RNA，是基因表达，细胞周期和生物发育等各种生物过程的关键参与者。在过去二十年里，microRNA在生物学领域的研究已经广泛开展。基础研究表明microRNA的改变可能导致许多疾病的发生，特别是对于癌症，microRNA作为肿瘤抑制因子或致癌基因，可成为新型生物标志物，在肿瘤早期诊断和临床应用中发挥具有十分重要的研究价值。因此，可靠、准确的microRNA分析检测方法对于人类了解microRNA功能以及降低人类癌症的发病率和死亡率具有重要作用。对于microRNA检测，现已具有的常规方法包括定量逆转录酶-聚合酶链反应(qRT-PCR)，Northern印迹技术和微阵列。然而，这些检测策略仍存在一些不可避免的缺点。如qRT-PCR技术耗时、昂...
【技术保护点】
1.一种检测microRNA‑21的电化学传感器的制备方法，所述电化学传感器包括工作电极、参比电极和对电极，其特征在于，所述的制备方法包括：使活化处理的捕获探针与作为工作电极的金电极接触，并孵育，之后将巯基己醇施加于所述金电极上孵育封闭空白位点；采用杂交链式反应的方法构建DNA串联体，以及采用末端脱氧核糖核苷酸转移酶延伸DNA的方法制备富G‑四链体线；将DNA串联体施加于所述金电极表面孵育，并与链霉亲和素溶液相互作用；将生物素标记的富G‑四链体线施加在所述金电极表面，所述生物素能够与所述链霉亲和素特异性识别，在DNA串联体上组装富G‑四链体线作为分支结构；以及，加入G‑四链...
【技术特征摘要】
1.一种检测microRNA-21的电化学传感器的制备方法，所述电化学传感器包括工作电极、参比电极和对电极，其特征在于，所述的制备方法包括：使活化处理的捕获探针与作为工作电极的金电极接触，并孵育，之后将巯基己醇施加于所述金电极上孵育封闭空白位点；采用杂交链式反应的方法构建DNA串联体，以及采用末端脱氧核糖核苷酸转移酶延伸DNA的方法制备富G-四链体线；将DNA串联体施加于所述金电极表面孵育，并与链霉亲和素溶液相互作用；将生物素标记的富G-四链体线施加在所述金电极表面，所述生物素能够与所述链霉亲和素特异性识别，在DNA串联体上组装富G-四链体线作为分支结构；以及，加入G-四链体单体与所述富G-四链体线通过π-π堆叠结合，自组装形成多分支DNA纳米组装体，之后用氯化血红素处理，在所述金电极上形成G-四链体/氯化血红素复合物。2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于包括：在室温下，将TCEP与捕获探针孵育，获得活化处理的捕获探针；优选的，所述捕获探针的序列如SEQIDNO:1所示；和/或，所述制备方法包括：将活化处理的捕获探针滴加于金电极上，并于4～8℃孵育12～16h，之后将巯基己醇滴加于所述金电极上，并于25～37℃孵育0.5～1h，以封闭空白位点。3.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于包括：将第一探针集和第二探针集在90～95℃变性5～10min，之后冷却至25～37℃杂交自组装形成DNA串联体；优选的，所述第一探针集的序列如SEQIDNO:2所示，所述第二探针集的序列如SEQIDNO:3所示。4.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于包括：将EP探针、dNTP、TdT与缓冲液混合均匀，并在25～37℃进行延伸反应1～2h，之后在90～95℃加热3～5min终止反应，并在HEPES缓冲液中于25～37℃孵育20～40min，形成富G-四链体线；优选的，所述EP探针的序列如SEQIDNO:4所示。5.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于包括：将D...
【专利技术属性】
技术研发人员：徐建国，陈伟，闫超，秦盼柱，姚丽，
申请(专利权)人：合肥工业大学，
类型：发明
国别省市：安徽,34
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