用于ATP检测的分裂适配体传感器及其应用制造技术

本发明专利技术公开了用于ATP检测的分裂适配体传感器及其应用，属生物化学技术领域。本发明专利技术将富G序列修饰到两个分裂的ATP适配体片段的末端。ThT与两个富G的ATP分裂适配体相互作用，形成比完整的适配体/ThT复合物更高的荧光复合物。由于富G序列可以提高荧光信号，从而提高新方法的灵敏度。在富G序列的帮助下，本发明专利技术ATP适配体传感器的检出限为5 nM。该方法对ATP具有100nM到120μM良好线性关系。与之前报道的基于ThT取代的ATP检测的完整适配体相比，本发明专利技术适配体传感器更加灵敏，具有更广泛的动态线性范围，并明显提高了对ADP和AMP等的选择性。该适配体传感器可以用于检测复杂生物血清样品中的ATP。

【技术实现步骤摘要】
用于ATP检测的分裂适配体传感器及其应用
本专利技术涉及用于ATP检测的分裂适配体传感器及其应用，具体涉及基于荧光传感器的免标记分裂ATP适配体及其应用，属生物化学

技术介绍
核酸适配体是一种单链RNA或DNA分子，体外通过指数富集(SELEX)配体的系统进化而选择，以特异性地结合具有高亲和力的目标，它们提供了一种实用的替代抗体的方法用于核酸、蛋白质、小分子甚至整个细胞的检测。与抗体相比，核酸适配体有许多优点，例如较高的特异性、合成简单、标记相对容易、尺寸相对较小、非免疫原性、良好的稳定性、相对快速、生产廉价，具有极高的准确性和重现性。同时，在设计具有高检测灵敏度和高选择性的新型生物传感器时，随着目标物的结合适配体的构型变化具有高的灵活性。在荧光传感领域，当需要一个快速反应和快的回收率时非共价相互作用可能占主要，然而当生物分子需要固定在表面并且是稳定的，弱的超分子力是不利的，因此共价连接是更合适的。免标记法的优点是它不会破坏与目标的亲和力。它设计灵活，价格低廉，但最大的问题是灵敏度低。低灵敏度的原因之一是，适配体与目标物结合的本质是碱基与识别位点的结合，这导致了过量碱基的空本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.用于ATP检测的分裂适配体传感器，其特征在于，以硫黄素T （ThT）作为指示剂和媒介体，免标记分裂ATP结合适配体作为识别元素，连接在两条分裂适配体片末端的富G序列作为信号放大器；所述富GDNA序列为GGGTTGGG 或GGGTAGGG；分裂ATP结合适配体通过三甘醇（isp9）将富G序列与分裂型ATP适配体连接,其DNA序列为序列表中序列1和2。

【技术特征摘要】
1.用于ATP检测的分裂适配体传感器，其特征在于，以硫黄素T（ThT）作为指示剂和媒介体，免标记分裂ATP结合适配体作为识别元素，连接在两条分裂适配体片末端的富G序列作为信号放大器；所述富GDNA序列为GGGTTGGG或GGGTAGGG；分裂ATP结合适配体通过三甘醇（isp9）将富G序列与分裂型ATP适配体连接,其DNA序列为序列表中序列1和2。2.如权利要求1所述的分裂适配体传感器检测ATP，其特征在于，ThT浓度为5μM。3.如权利要求1或2所述的分裂适配体传感器检测ATP，其特征在于，序列表中序列1DNA和2DNA两个分裂适配体的比值为1:2，浓度分别为0.1μM和0.2μM。4.如权利要求1所述的分裂适配体传感器检测ATP的方法，其特征在于，采用荧光法：在含有序列表中序列1DNA和序列2DNA以及硫黄素T的Tris-HCl缓冲溶液中，加入经过处理的人血清，在激发波长450nm条件下，对其进行荧光测定：当溶液颜色由亮绿色逐渐变浅至接近无色，则该传感体系对ATP响应良好；所述Tris-HCl缓冲溶液选pH6.0，含Mg2+。5.如权利要求1所述的分裂适配体传感器检测...

【专利技术属性】
技术研发人员：王永祥，耿凤华，马雨，徐茂田，瞿鹏，张银堂，
申请(专利权)人：商丘师范学院，
类型：发明
国别省市：河南,41