异戊酰紫草素及其在制备协同抗耐药金葡菌药物中的用途制造技术

本发明专利技术属医药技术领域。涉及异戊酰紫草素及其在制药中的新用途，具体涉及一种从新疆紫草中分离得到的化合物异戊酰紫草素及其在制备协同抗耐药金葡菌药物中的用途。本发明专利技术涉及的化合物结构式如式(I)所示，经体外协同抗菌测试和体内动物实验验证，所述异戊酰紫草素与诺氟沙星联用协同抑制耐药金葡菌SA1199B引起的感染；异戊酰紫草素与硫酸链霉素联用协同抑制耐药金葡菌RN4220引起的感染。

Isovanyl shikonin and its application in the preparation of synergistic anti-drug-resistant Staphylococcus aureus drugs

The invention belongs to the technical field of medicine. The invention relates to isovaleric shikonin and its new uses in pharmaceuticals, in particular to isovaleric shikonin, a compound isolated from Xinjiang shikonin, and its use in the preparation of synergistic anti-drug resistant Staphylococcus aureus drugs. The compound structure formula of the invention is shown in formula (I). After in vitro synergistic antimicrobial test and in vivo animal experiments, the combination of isovaleric shikonin and norfloxacin synergistically inhibits the infection caused by resistant Staphylococcus aureus SA1199B and the combination of isovaleric shikonin and streptomycin sulfate synergistically inhibits the infection caused by resistant Staphylococcus aureus RN4220.

【技术实现步骤摘要】
异戊酰紫草素及其在制备协同抗耐药金葡菌药物中的用途
本专利技术属医药
，涉及异戊酰紫草素及其在制药中的新用途，具体涉及一种从新疆紫草中分离得到的化合物异戊酰紫草素及其在制备协同抗耐药金葡菌药物中的用途。
技术介绍
半个多世纪的临床应用实践证实了抗生素是有效控制感染性疾病的药物，并且仍然是现代医学最重要的发现之一。然而，抗生素的过度和无限制使用，增强了对细菌的选择性生存压迫，导致抗生素耐药性的发生。研究显示，细菌获得和传递耐药遗传因素的能力，同时加剧了全球耐药性问题。抗生素耐药性被世界卫生组织认为是治疗感染性疾病的最大威胁。寻找克服耐药问题的新抗菌药物一直是制药工业的首要研究课题。据报道，十九世纪60年代以后新类型抗生素发现的速度显著降低，在2003-2012的九年中只有6个新的抗生素被FDA批准上市，而且这些药物在较短的时间内出现耐药性。耐药菌引起的感染成为医药领域乃至社会中日益严重问题，其已成为治疗感染性疾病的最大威胁，抗生素发现的速度已经跟不上细菌耐药发展的速度；包括中草药的植物通常为新的化学成分的重要来源，在这大量未开发的资源中发现新的治疗药物具有相当大的潜力，因此，从中药或者植物中发现抑制细菌耐药机制的活性药物，是解决耐药问题的重要方向之一。中药紫草是新疆紫草(A.euchroma)或内蒙紫草(A.guttata)的干燥根，始记载于2000年前的中医药典籍《神农本草经》。紫草是一种著名的中药，自古以来用于治疗皮疹、天花、黄疸、烫伤、湿疹以及便秘等。新疆紫草(Arnebiaeuchroma(Royle)Johnst)，是紫草属中的代表植物，药理学研究表明紫草具有杀菌、抗炎和抗肿瘤等药理作用。基于现有技术的现状，本申请的专利技术人拟提供新的中药或者植物中的抑制细菌耐药的活性药物，具体涉及一种从新疆紫草中分离得到的化合物异戊酰紫草素及其在制备协同抗耐药金葡菌药物中的用途。与本专利技术相关的现有技术有，[1].Russell,A.D.Biocideuseandantibioticresistance:therelevanceoflaboratoryfindingstoclinicalandenvironmentalsituations[J].LancetInfectiousDiseases,2003,3(12):794-803.[2].Stewart,P.S.Mechanismsofantibioticresistanceinbacterialbiofilms[J].InternationalJournalofMedicalMicrobiology,2002,292(2):107-113.[3].Oluwatuyi,M.,G.W.KaatzS.Gibbons.AntibacterialandresistancemodifyingactivityofRosmarinusofficinalis[J].Phytochemistry,2004,65(24):3249-3254.[4].Nascimento,G.G.F.,J.Locatelli,P.C.FreitasG.L.Silva.Antibacterialactivityofplantextractsandphytochemicalsonantibiotic-resistantbacteria[J].BrazilianJournalofMicrobiology,2000,31(4):247-256.[5].Alekshun,M.N.S.B.Levy.Molecularmechanismsofantibacterialmultidrugresistance[J].Cell,2007,128(6):1037-1050.[6].Chan,B.C.L.,M.Ip,C.B.S.Lau,S.L.Lui,C.Jolivalt,C.Ganem-Elbaz,M.Litaudon,N.E.Reiner,H.Gong,R.H.See,K.P.FungP.C.Leung.SynergisticeffectsofbaicaleinwithciprofloxacinagainstNorAover-expressedmethicillin-resistantStaphylococcusaureus(MRSA)andinhibitionofMRSApyruvatekinase[J].JournalofEthnopharmacology,2011,137(1):767-773.。
技术实现思路
本专利技术的目的是针对目前抗生素耐药性问题提供新的抗菌药物，涉及异戊酰紫草素及其在制药中的新用途，具体涉及一种从新疆紫草中分离得到的化合物异戊酰紫草素及其在制备协同抗耐药金葡菌药物中的用途。本专利技术对新疆紫草药材萃取得到萃取物，对所得的紫草的提取物进行协同抗耐药金葡菌菌活性测试，活性跟踪分离得到一种具有协同提高抗生素抗耐药菌活性的异戊酰紫草素。本专利技术的目的通过下述技术方案施现：1，分离纯化异戊酰紫草素1)乙醇加热提取新疆紫草药材(3.0g)，浓缩提取液得到浸膏，用水混悬，乙酸乙酯萃取，得萃取物；2)萃取物经过反复硅胶柱(石油醚-乙酸乙酯)色谱，凝胶柱色谱和中压制备色谱(乙腈/水)分离纯化，得异戊酰紫草素(100.5mg)。2，异戊酰紫草素与抗生素体外协同抗两种耐药金葡菌菌1)配制异戊酰紫草素，诺氟沙星和硫酸链霉素供试品溶液；2)棋盘法测试异戊酰紫草素与诺氟沙星联用的协同抗耐药金葡菌SA1199B活性；3)棋盘法测试异戊酰紫草素与硫酸链霉素联用的协同抗耐药金葡菌RN4220活性；4)计算部分抑菌浓度(fractionalinhibitoryconcentration，FIC)，评价抗生素和化合物的相互作用。3，异戊酰紫草素与链霉素抗小鼠感染1)建立耐药金葡菌RN4220感染的小鼠脓毒症模型；2)测试异戊酰紫草素单独作用、硫酸链霉素单独作用和异戊酰紫草素与硫酸链霉素联合使用的小鼠7天生存率曲线；3)测试异戊酰紫草素单独作用、硫酸链霉素单独作用和异戊酰紫草素与硫酸链霉素联合使用的小鼠腹腔液、脾脏和肝脏的细菌数量。更具体的，本专利技术制备分离得到紫草萘醌类化合物的化学结构式如式(I)所示：本专利技术中，化合物分离硅胶柱层析使用200-300目和300-400目，溶剂为石油醚-乙酸乙酯(98:2～9:1)和石油醚-丙酮(9:1～6:4)，分离凝胶柱层析使用SephadexLH-2葡聚糖凝胶，溶剂为氯仿/甲醇1:1；本专利技术中，制备液相色谱最高压力20bar，溶剂为乙腈：水＝75:25，得到化合物100.5mg，纯度98.0％；本专利技术中，体外协同抗耐药菌活性实验的耐药金葡菌浓度为5×105cfu/mL；本专利技术中，小鼠生存率曲线实验的耐药金葡菌浓度为5×108cfu/mL；本专利技术中，小鼠体内耐药菌数量实验的耐药金葡菌浓度为5×107cfu/mL；本专利技术中，体外协同抗菌活性实验的异戊酰紫草素浓度为2-128mg/L；硫酸链霉素的浓度为2-128mg/L；本专利技术中，小鼠生存率曲线和体内耐药菌数量实验的异戊酰紫草素的剂量为10,20和40mg/kg，给药方式为灌胃给药；小鼠生存率曲线和体内耐药菌数量实验的硫酸链霉素的剂量为10m本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.式(I)结构的异戊酰紫草素,

【技术特征摘要】
1.式(I)结构的异戊酰紫草素,2.按权利要求1所述的式(I)结构的异戊酰紫草素,其特征在于，通过下述方法制备：1)乙醇加热提取新疆紫草药材(Arnebiaeuchroma)，浓缩提取液得到浸膏，用水混悬，乙酸乙酯萃取，得萃取物；2)萃取物经过反复硅胶柱色谱，凝胶柱色谱和中压制备色谱分离纯化，得异戊酰紫草素；其中，硅胶柱层析溶剂为石油醚-乙酸乙酯97:3，凝胶柱层析溶剂为氯仿-甲醇1:1，中压制备液相色谱溶剂为乙腈：水＝75:25。3.权利要求1的异戊酰紫草素在制备抗耐药金葡菌药物中的用途。4.权利要求1的异戊酰紫草素在制备协同抗耐药金葡菌药物中的用途，其中，a)异戊酰紫草素与抗生素协同抗耐药...

【专利技术属性】
技术研发人员：何建明，穆青，孙世昶，孙仲琳，
申请(专利权)人：复旦大学，
类型：发明
国别省市：上海,31