一种基于双衍生化技术的游离脂肪酸质谱定性定量分析方法技术

本发明专利技术涉及一种基于双衍生化技术的游离脂肪酸质谱定性定量分析方法,包括如下步骤：1）不饱和脂肪酸双键的光化学衍生化反应；2）脂肪酸羧基端的N，N‑二乙基乙二胺衍生化反应；3）脂肪酸精准结构的定性方法；4）脂肪酸的定量方法。本发明专利技术利用所建立的方法对实际样品中游离脂肪酸进行精准定性和定量分析，解决了不饱和脂肪酸尤其是多不饱和脂肪酸的双键位置难以鉴定，以及脂肪酸在负离子模式下电离效率低和检测灵敏度不足的困难，实现了对实际样品中游离脂肪酸高灵敏度、准确的定性定量分析。

【技术实现步骤摘要】
一种基于双衍生化技术的游离脂肪酸质谱定性定量分析方法
本专利技术涉及一种基于双衍生化技术的游离脂肪酸质谱定性定量分析方法，以及其在不同生物样本中游离脂肪酸定性定量分析中的应用。技术背景脂肪酸(Fattyacid，FA)是指一端含有一个羧基的长脂肪族碳氢链的一系列有机物，碳链长度不等(C4～C36)，按是否含有双键分为饱和和不饱和脂肪酸。FA是最简单的一类脂质化合物，是其他脂质的重要组分。哺乳动物体内脂肪酸的多样性通过以下途径在细胞功能中发挥多种关键作用：例如组成生物膜中各种不同的功能脂质分子；调节膜的流动性和信号分子之间的相互作用，以及为脂质信号分子的产生提供多种前体物质。脂肪酸结构的多样性包括不同的链长、不同的不饱和度、不同的双键位置、是否存在氧化、支链和其他修饰结构。FA组成和结构的改变对膜功能、生物能量效率和细胞信号转导有很大的影响，从而对机体的营养与健康产生影响。脂肪酸的双键位置与其功能密切相关，脂肪酸根据第一个双键距离甲基端的位置不同，可分为n-3、n-6、n-7和n-9等系列。n-3系列多不饱和脂肪酸(polyunsaturatedfattyacid，PUFAs)和n本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种基于双衍生化技术的游离脂肪酸质谱定性定量分析方法，其特征在于它包括如下步骤：1）不饱和脂肪酸的光化学衍生化反应：将待测样品中加入内标，然后提取游离脂肪酸，得到游离脂肪酸提取液；所得游离脂肪酸提取液以丙酮作为Paternò−Büchi反应试剂，在紫外光下进行光化学衍生化反应，得到初次衍生后的待测样品溶液；2）脂肪酸的N，N‑二乙基乙二胺衍生化反应：将步骤1）所得初次衍生后的待测样品溶液以N，N‑二乙基乙二胺作为衍生试剂进行衍生化反应，得到二次衍生后的待测样品溶液；3）采集数据：将步骤2）所得二次衍生后的待测样品溶液进行质谱分析，选择正离子模式电喷雾电离源，选择73Da中性丢失扫描‑增...

【技术特征摘要】
1.一种基于双衍生化技术的游离脂肪酸质谱定性定量分析方法，其特征在于它包括如下步骤：1）不饱和脂肪酸的光化学衍生化反应：将待测样品中加入内标，然后提取游离脂肪酸，得到游离脂肪酸提取液；所得游离脂肪酸提取液以丙酮作为Paternò−Büchi反应试剂，在紫外光下进行光化学衍生化反应，得到初次衍生后的待测样品溶液；2）脂肪酸的N，N-二乙基乙二胺衍生化反应：将步骤1）所得初次衍生后的待测样品溶液以N，N-二乙基乙二胺作为衍生试剂进行衍生化反应，得到二次衍生后的待测样品溶液；3）采集数据：将步骤2）所得二次衍生后的待测样品溶液进行质谱分析，选择正离子模式电喷雾电离源，选择73Da中性丢失扫描-增强离子扫描作为质谱扫描模式，采集游离脂肪酸衍生物的谱图和谱峰数据；4）定性分析：根据步骤3）所得谱图和谱峰数据，确定对应各脂肪酸衍生物的准分子离子峰；同时对于存在双键位置异构体的不饱和脂肪酸，其所含双键的位置不同，其分别对应的衍生产物在质谱碰撞诱导解离中分别产生不同特征性m/z的碎片离子，称之为诊断离子，其能确定存在双键位置异构体的不饱和脂肪酸中所含双键的位置，从而对待测样品中的游离脂肪酸实现定性分析；5）绘制标准曲线：a、选择脂肪酸标准品并用溶剂稀释成一系列浓度的标准溶液，分别加入内标后，在与步骤1）、步骤2）相同的条件下进行两次衍生化反应，得到标准样品的进样溶液；将标准样品的进样溶液按照与步骤3）相同的条件进行质谱分析，采集游离脂肪酸衍生物的谱图和谱峰数据；b、对存在双键位置异构体的不饱和脂肪酸，以标准溶液中不饱和脂肪酸双键位置异构体的浓度比值为横坐标，所对应...

【专利技术属性】
技术研发人员：魏芳，徐淑玲，吕昕，董绪燕，陈洪，黄凤洪，
申请(专利权)人：中国农业科学院油料作物研究所，
类型：发明
国别省市：湖北,42