一种能够与类风湿因子高效结合的变性IgG的制备方法技术

本发明专利技术涉及医学诊断领域，具体而言，涉及一种能够与类风湿因子高效结合的变性IgG的制备方法。该方法包括：a)对IgG进行变性处理，以及b)使用蛋白交联剂聚合变性后的IgG。该方法制备得到的变性IgG与类风湿因子的反应活性高，检测范围更广、准确度更好，具有更好的临床应用价值。

【技术实现步骤摘要】
一种能够与类风湿因子高效结合的变性IgG的制备方法
本专利技术涉及医学诊断领域，具体涉及一种能够与类风湿因子高效结合的变性IgG的制备方法。
技术介绍
类风湿性关节炎(RA)是一种常见的风湿性疾病，该病常在起病后1～3年出现关节畸形，严重影响日常工作和生活，提高其早期诊断率是医务工作者所关注的问题。类风湿因子(rheumatoidfactor，简称RF)是诊断类风湿性关节炎的重要标准之一，快速高效准确地检测RF对RA的诊断及预后具有非常重要的意义。RF是由人体内的异常IgG刺激机体产生的自身抗体，主要属于IgM型。在RF的体外诊断中，变性IgG是不可或缺的，其与RF的结合能力是RF检测准确度、诊断精密度的重要保证。在现有技术中，常规变性IgG制备是先提取正常的IgG，然后经63℃、30min热变性，或是6M尿素+0.1Mβ-巯基乙醇在37度处理等手段。以这些手段制备的变性IgG与RF的结合能力有限，在临床应用上性能较差。且热处理工艺难以精确控制，热变性后样品的批间差波动比较大。有鉴于此，特提出本专利技术。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种变性IgG的制备方法，该方法制备得到的变性IgG与类风湿因子(rheumatoidfactor，RF)的反应活性高，检测范围更广、准确度更好，具有更好的临床应用价值。为了实现本专利技术的上述目的，特采用以下技术方案：本专利技术的第一方面涉及一种能够与类风湿因子高效结合的变性IgG的制备方法，包括：a)对IgG进行变性处理，以及b)使用蛋白交联剂聚合变性后的IgG。根据本专利技术的第二方面，本专利技术还涉及一种类风湿因子的检测试剂盒，其包括包被有如上所述方法制备得到的变性IgG的固相载体。与现有技术相比，本专利技术在
技术介绍
的基础上，改变了正常IgG的变性手段，制备出了与RF高效结合的变性IgG，可以在临床应用上有效改善RF检测试剂的性能。本专利技术所提供方法制备得到的变性IgG与RF结合能力强、反应活性高，在临床生化检测上检测范围宽、准确度高，表现优异。附图说明为了更清楚地说明本专利技术具体实施方式或现有技术中的技术方案，下面将对具体实施方式或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图是本专利技术的一些实施方式，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。图1为本专利技术一个实施例和比较例在进行RF检测时的反应曲线。具体实施方式本专利技术涉及一种能够与类风湿因子高效结合的变性IgG的制备方法，包括：a)对IgG进行变性处理，以及b)使用蛋白交联剂聚合变性后的IgG。在一些实施方式中，所述蛋白交联剂选自戊二醛、1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(EDC)、4-(N-马来酰亚胺甲基)环己烷羧酸-N-琥珀酰亚胺酯(SMCC)、Disuccinimidylsuberate(DSS)、DST、3-[(2-aminoethyl)dithio]propionicacid(AEDP)、MBS、N,N'-Dicyclohexylcarbodiimide(DCC)、SPDP、EGS、转谷氨酰胺酶(TG)、过氧化酶(POD)、多酚氧化酶(PPO)。在一些实施方式中，蛋白交联剂优选其指向基团为氨基和羧基的交联剂，例如EDC、AEDP以及DCC。在一些实施方式中，所述蛋白交联剂为EDC，且在进行聚合处理时，所述EDC与所述变性后的IgG的质量比为(2～3)：1。在一些实施方式中，所述蛋白交联剂为EDC，且在进行聚合处理时，所述EDC与所述变性后的IgG的质量比为2.5：1。在一些实施方式中，所述待检测样品选自细胞培养上清、全血、血浆、血清、组织或组织裂解液。本文使用的"组织裂解物"、"细胞裂解物"、"裂解物"、"裂解的样品"、"组织提取物"或"细胞提取物"表示包含裂解的组织或细胞的样品和/或生物样品材料，即其中组织或细胞的结构完整性已经被破坏。为了释放细胞或组织样品的内容物，通常用酶和/或化学试剂处理所述材料，以溶解、降解或破坏这样的组织或细胞的细胞壁和细胞膜。熟练的技术员非常熟悉用于得到裂解物的适当方法。该过程被术语"裂解"包括。在一些实施方式中，所述IgG的种属选自牛、马、乳牛、猪、绵羊、山羊、大鼠、小鼠、狗、猫、兔、骆驼、驴、鹿、貂、鸡、鸭、鹅、火鸡、斗鸡或人。在一些实施方式中，所述IgG进行变性处理的方法选自热处理、酸处理、碱处理、化学修饰、破坏蛋白质的氢键、破坏蛋白质的疏水结构、氧化处理、酶切处理。在一些实施方式中，所述IgG进行变性处理的方法为使用木瓜蛋白酶或胰蛋白酶酶切处理。在一些实施方式中，所述IgG进行变性处理的方法为60℃～66℃处理20min～40min。在一些实施方式中，所述IgG进行变性处理的方法为使用SDS、尿素或β巯基乙醇中的一种或多种进行变性处理。使用SDS、尿素或β巯基乙醇进行变性处理可避免热处理工艺批间差异波动较大的缺点，且操作简便。该变性方法可很好地与后续的蛋白交联剂聚合反应配合以提高IgG与RF反应的能力。在一些实施方式中，所述IgG进行变性处理的方法为0.08w/v％～0.12w/v％SDS，35℃～39℃处理1.5h～2.5h。在一些实施方式中，所述IgG进行变性处理的方法为0.015w/v％～0.025w/v％SDS，35℃～39℃处理2h～3h。在一些实施方式中，所述IgG进行变性处理的方法为5M～7M尿素、0.08M～0.12Mβ巯基乙醇，35℃～39℃处理1.5h～2.5h。在一些实施方式中，在步骤a)之前，或者步骤a)之后、b)之前，还包括：富集IgG。在一些实施方式中，所述富集IgG的方法选自ProteinA亲和纯化、离子交换层析(DEAE柱层析)、饱和硫酸铵沉淀法、有机溶剂沉淀法(乙醇、辛酸法)、PEG置换法、聚酰胺复合膜亲和膜法。在一些实施方式中，所述离子交换层析为DEAE柱层析。在一些实施方式中，所述有机溶剂沉淀法选自乙醇沉淀或辛酸沉淀法。根据本专利技术的另一方面，本专利技术还涉及一种类风湿因子的检测试剂盒，其包括包被有如上所述方法制备得到的变性IgG的固相载体。在一些实施方式中，所述固相载体为微孔板、聚苯乙烯胶乳颗粒上、试纸条或磁性纳米颗粒。将变性IgG包被于聚苯乙烯胶乳颗粒上，此致敏乳胶与待检测样品中的RF相遇时，可发生肉眼可见的凝集。在一些实施方式中，所述微孔板为聚苯乙烯板；如待检测样品中含有RF，可与其结合，并与随后加入的酶标记热凝集IgG反应，最后加入底物呈色，根据呈色程度可以判定RF水平。在一些实施方式中，所述变性IgG标记有用于显示信号强度的指示剂。在一些实施方式中，所述显示信号强度的指示剂包括荧光物质、量子点、地高辛标记探针、生物素、放射性同位素、放射性造影剂、顺磁离子荧光微球、电子致密物质、化学发光标记物、超声造影剂、光敏剂、胶体金或酶中的任一种。在一些实施方式中，所述荧光物质包括Alexa350、Alexa405、Alexa430、Alexa488、Alexa555、Alexa647、AMCA、氨基吖啶、BODIPY630/650、BODIPY650/665、BODIPY-FL、BODIPY-R6G、BODIPY-TMR、BODIPY-TRX、5-羧基-4′，5′本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种能够与类风湿因子高效结合的变性IgG的制备方法，其特征在于，包括：a)对IgG进行变性处理，以及b)使用蛋白交联剂聚合变性后的IgG。

【技术特征摘要】
1.一种能够与类风湿因子高效结合的变性IgG的制备方法，其特征在于，包括：a)对IgG进行变性处理，以及b)使用蛋白交联剂聚合变性后的IgG。2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述蛋白交联剂选自戊二醛、EDC、SMCC、DSS、DST、AEDP、MBS、DCC、SPDP、EGS、转谷氨酰胺酶、过氧化酶、多酚氧化酶。3.根据权利要求2所述的方法，其特征在用，所述蛋白交联剂为EDC，且在进行聚合处理时，所述EDC与所述变性后的IgG的质量比为(2～3)：1。4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述待检测样品选自细胞培养上清、全血、血浆、血清、组织或组织裂解液。5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述IgG的种属选自牛、马、乳牛、猪、绵羊、山羊、大鼠、小鼠、狗、猫、兔、骆驼、驴、鹿、貂、鸡、鸭、鹅、火鸡、斗鸡或人。6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，...

【专利技术属性】
技术研发人员：柯拓，曾家骅，岑静，
申请(专利权)人：菲鹏生物股份有限公司，
类型：发明
国别省市：广东,44