容器组件以及使用该容器组件的试样制备方法技术

容器组件包括过滤单元(10)、以及相对于过滤单元可拆装的封闭单元(30)。过滤单元具备：壳体(11)，其一端设置有试样导入开口(18)，另一端设置有液体排出开口(19)；过滤器(21)，被固定于壳体(11)。过滤单元的壳体具有第一接合部，封闭单元具有构成为可与第一接合部接合的第二接合部。第一接合部以及第二接合部构成为，在两者接合的状态下，液体排出开口在空间上被封闭。以缩短两者的距离的方式压入过滤单元与封闭单元，使得封闭单元与过滤器之间的空间相对于试样收容空间成为正压。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】容器组件以及使用该容器组件的试样制备方法
本专利技术涉及容器组件以及使用该容器组件的分析用试样的制备方法。
技术介绍
离心过滤通过将液体透过过滤器，能够使固体与液体分离，因此固液分离性优异。在离心过滤中，使用容器组件(离心过滤试剂盒)，所述容器组件组合有如下部件：过滤单元，用于装填试样；回收容器，用于回收透过过滤单元的过滤器的液体(滤液)。回收容器具有可装填于离心分离机的外部形状，在组合了过滤单元与回收容器的状态下，进行离心分离，由此能够将试样中的液体成分回收到回收容器内。例如，在液相色谱用试样的前处理中，为了从试样中去除粒子或沉淀物等的固体成分，使用注射器过滤或离心过滤。过滤后的滤液直接作为试样使用。离心过滤也能够应用于与固体表面结合的成分(结合)和不与固体表面结合的成分(游离)的分离(B/F分离)。例如，在ELISA(酶联免疫吸附测定)等的免疫测量法中，为了分离与抗体结合的抗原(结合)和不与抗体结合的抗原以及其他杂质成分(游离)，进行B/F分离。在对象试样被固定于固体表面的情况下，能够回收在离心过滤后残留在过滤器上的固体。由此，能够选择性地将对象试样固定在固体表面，而将未固定于固体的杂质成分作为滤液去除。通过适当的方法回收残留在过滤单元内的、固定有对象物质的固体成分。例如，将液体添加到过滤单元而使固体成分悬浮，通过移液管回收该悬浮液即可。作为利用B/F分离的试样的制备方法的例子，除了上述的免疫测量法以外，还能够列举通过与固定在纳米粒子表面上的蛋白酶反应，位置选择性地切割蛋白质以生成肽片段的方法(纳米表面分子导向限制性酶解；nSMOL法)(例如，专利文献1、非专利文献1以及非专利文献2)。图8是nSMOL法的试样制备以及分析的流程图。首先，准备能够选择性地固定抗体等的分析对象物质的多孔质体(S10)。例如，被蛋白A或蛋白G等包覆的多孔质体选择性地与抗体的Fc区域结合。当在多孔质体的悬浮液中添加血液等的检体时,在多孔质体的细孔内选择性地固定抗体等的分析对象物质(S11)。在多孔质体的表面，附着有膜蛋白质等的多种多样的杂质物。为了将这些夹杂物溶解去除，能够通过包含表面活性剂的溶液进行清洗(S21)。通过离心过滤，能够将清洗后的固体(多孔质体)与包含表面活性剂的溶液进行分离(S22)。然后，为了去除表面活性剂，通过PBS等的清洗液进行清洗(S23)。通过离心过滤，进行清洗后的固体与清洗液的分离(S24)。准备在纳米尺寸的微粒子的表面固定有胰蛋白酶等蛋白酶的蛋白酶固定微粒子,在液体中,使其与上述的固体接触(S31)。在表面固定有抗体等的对象物质的多孔质体与蛋白酶固定微粒子在液体中共存的状态下，例如，通过在35～60℃的温度下培养3～30小时左右，进行蛋白酶解(S32)。被蛋白酶位置选择性地切割的肽片段，游离至液体中。在微粒子的粒子直径大于多孔质体的细孔径的情况下，被固定在微粒子表面的蛋白酶能够接近多孔质体的细孔的表层附近(多孔质体与液相的界面附近)，但是不能接近细孔的深处位置。因此，蛋白酶能够选择性地接近(访问)固定在多孔质体的细孔内的蛋白质的特定的部位，并能够进行位置选择性地切割。在培养后，对通过蛋白酶解产生的肽片段游离的液体进行回收(S41)，通过LC-MS等的分析，进行蛋白质的鉴定以及定量(S51)。在该方法中，分析对象的蛋白质被位置选择性地蛋白酶解，因此液体试样中所含的肽的种类较少。例如，在抗体与多孔质体结合的情况下，蛋白酶向抗体与多孔质体的结合部位即抗体Fc区域的接近受到限制，因此含有抗体的互补决定区域(CDR)的Fab区域被蛋白酶选择性地切割。因此，在分析用试样中，相对于生成肽片段的总量包含高浓度的肽片段，该肽片段含有对抗体的结构鉴定来说重要的互补决定区的氨基酸序列，从而能够进行高精度的分析。现有技术文献专利文献专利文献1：WO2015/033479号小册子非专利文献非专利文献1：岩本典子等,《分析方法(AnalyticalMethods)》，2015年，第21期，第9177-9183页。非专利文献2：岩本典子等,《生物分析(Bioanalysis)》,2016年,8(10),第1009-1020页。
技术实现思路
专利技术要解决的技术问题在上述的试样制备方法中，通过离心过滤进行B/F分离后，实施蛋白酶处理而使分析对象物游离在液相中，对作为分析用试样的液体进行回收。如前所述，B/F分离的清洗后的固体的回收，一般通过移液管操作进行实施。在移液管操作中，有附着在过滤单元或移液管尖端内的固体未回收而残留的情况。因此，试样的回收率因操作者的熟练度等而不同，从而成为定量分析精度降低的要因。特别是，在临床现场等同时处理多个检体的情况下，容易产生作业紊乱，操作越变得复杂，经由移液管操作等的操作者的操作对精度降低的影响越大。此外，若使试样移动到其他的容器的作业的次数增加，则除了回收损失导致的精度降低以外，产生拿错试样等的人为错误的风险也增大。因此，在临床试样等的分析用试样的制备中，优选尽可能减少容器更换的次数。通过离心过滤排出滤液，使固体残留在过滤单元内(图8的S24),如果将蛋白酶固定微粒子的悬浮液添加到过滤单元内(图8中的S31)，则能够以不通过移液管操作等使固体移动的方式，而就在过滤单元内实施蛋白酶解(图8中的S32)。然而，在过滤单元的过滤器设置有0.1μm～5μm左右的细孔，因此储存在过滤器上的液体因毛细管现象而经由介质的细孔泄漏。如果是像通常的离心过滤那样的短时间的作业，则过滤单元内的液体不会泄露，但是在像蛋白酶解那样地进行长时间的反应的情况下，因毛细血管现象导致泄漏量较大，分析精度随着试样的损失而降低。如上所述，如果通过离心过滤实施B/F分离后，进行将固体从过滤单元移动至其他容器的操作，则可能会产生分析精度降低的情况。另一方面，如果在过滤单元内长时间地持续固体与液体共存的状态，则会产生液体的泄漏。鉴于这样的技术问题，本专利技术的目的在于，提供一种容器以及试样制备方法，即使在不将固体从过滤单元移动至其他容器，而将固体与液体的混合物长时间保持在过滤单元内的情况下，也难以产生液体的泄漏。用于解决上述技术问题的方案本专利技术的容器组件构成为包括：过滤单元、以及相对于过滤单元可拆装的封闭单元，在过滤单元与封闭单元接合的状态下，过滤单元的试样收容空间变为负压。过滤单元具备：壳体、以及固定在壳体内的过滤器，在由壳体以及过滤器围成的试样收容空间，能够收容试样(液体以及固体)。在壳体的一端设置有试样导入开口，用于将固体以及液体导入至试样收容空间。试样导入开口可以封闭，也可以是，例如，在将试样导入至试样收容空间时，试样导入开口为打开状态，除此以外的时间封闭试样导入开口。在壳体的另一端设置有液体排出开口，用于将透过过滤器向试样收容空间的外部移动的液体(滤液)排出。过滤单元的壳体具有能够与封闭单元接合的第一接合部。封闭单元具有构成为能够与过滤单元的第一接合部接合的第二接合部。过滤单元的第一接合部与封闭单元的第二接合部构成为，两者接合从而处于气密状态，过滤单元的液体排出开口通过封闭单元而在空间上被封闭。此外，第一接合部以及第二接合部构成为，能够在维持气密状态下进一步压入，以使过滤器与封闭单元之间的距离缩短。在第一接合部与第二接合本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种容器组件,包括过滤单元以及相对于所述过滤单元可拆装的封闭单元，所述过滤单元具备：壳体，其一端设置有可封闭的试样导入开口，其另一端设置有液体排出开口；以及过滤器，固定于所述壳体，所述试样导入开口能够将固体以及液体导入至由所述壳体以及所述过滤器围成的试样收容空间，所述液体排出开口能够将透过所述过滤器的滤液排出，所述过滤单元的壳体具有第一接合部，所述封闭单元具有构成为能够与所述第一接合部接合的第二接合部，所述过滤单元的第一接合部以及所述封闭单元的第二接合部构成为，两者接合从而处于气密状态，使得所述液体排出开口在空间上由所述封闭单元封闭，且构成为在维持气密状态下能够进一步压入，使得过滤器与封闭单元之间的距离缩短，通过所述过滤单元与所述封闭单元之间的压入，使得所述封闭单元与所述过滤器之间的空间相对于所述试样收容空间变为正压。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种容器组件,包括过滤单元以及相对于所述过滤单元可拆装的封闭单元，所述过滤单元具备：壳体，其一端设置有可封闭的试样导入开口，其另一端设置有液体排出开口；以及过滤器，固定于所述壳体，所述试样导入开口能够将固体以及液体导入至由所述壳体以及所述过滤器围成的试样收容空间，所述液体排出开口能够将透过所述过滤器的滤液排出，所述过滤单元的壳体具有第一接合部，所述封闭单元具有构成为能够与所述第一接合部接合的第二接合部，所述过滤单元的第一接合部以及所述封闭单元的第二接合部构成为，两者接合从而处于气密状态，使得所述液体排出开口在空间上由所述封闭单元封闭，且构成为在维持气密状态下能够进一步压入，使得过滤器与封闭单元之间的距离缩短，通过所述过滤单元与所述封闭单元之间的压入，使得所述封闭单元与所述过滤器之间的空间相对于所述试样收容空间变为正压。2.如权利要求1所述的容器组件,其特征在于，所述过滤单元的第一接合部与所述封闭单元的第二接合部具有能够相互嵌合的形状。3.如权利要求2所述的容器组件,其特征在于，所述过滤单元的第一接合部与所述封闭单元的第二接合部均为锥形形状。4.如权利要求3所述的容器组件,其特征在于，所述过滤单元的第一接合部是朝向相对于所述封闭单元压入所述过滤单元时的压入方向缩径的外表面锥形形状，所述封闭单元的第二接合部是能够与所述第一接合部嵌合的内表面锥形形状。5.如权利要求1所述的容器组件，其特征在于，所述封闭单元具有接合用开口，能够使所述壳体的液体排出开口侧的端部通过，所述壳体贯通所述接合用开口从而插入至所述封闭单元,由此所述过滤单元的壳体的外壁面的第一接合部与所述封闭单元的内壁面的第二接合部相互地嵌合。6.如权利要求1所述的容器组件，其特征在于，所述过滤单元的所述液体排出开口的外周的壳体构成第一接合部，所述封闭单元具有能够使所述第一接合部通过的接合用开口,并以堵住所述接合用开口的方式固定有作为第二接合部的薄膜部件，所述薄膜部件具有气密密合性以及延伸性，所述壳体贯通所述接合用开口而插入至所述封闭单元,使得所述薄膜部件在维持封闭所述液体排出开口的状态下被进一步压入,所述薄膜部件发生延伸，由此使得所述薄膜部件与所述过滤介器之间的空间相对于所述试样收容空间成为正压。7.如权利要求1～6的任一项所述的容器组件，其特征在于，所述封闭单元构成为具有多个...

【专利技术属性】
技术研发人员：岩本典子，高梨惠，岛田崇史，
申请(专利权)人：株式会社岛津制作所，
类型：发明
国别省市：日本,JP