藏红花花瓣总多糖及其提取方法和应用技术

本发明专利技术提供了藏红花花瓣总多糖的提取方法，属于藏红花活性成分提取技术领域，包括以下步骤：将藏红花花瓣醇提后风干的滤渣与水以1g:(15～25)ml的比例混合置于95～105℃提取3h后，醇沉获得藏红花花瓣总多糖粗品；将所述藏红花花瓣总多糖粗品复溶经过层析柱层析纯化获得藏红花花瓣总多糖。本发明专利技术所述方法藏红花花瓣总多糖得率高，活性高，表现较高的DPPH自由基和·OH清除能力，急性毒性评价为实际无毒，可在一定程度上降低肝脏中TC、TG含量。这表明藏红花花瓣多糖能降低血脂水平，有效预防血脂水平，有效预防长期高脂饮食引起的高脂血症。

Total Polysaccharide from Saffron Petals and Its Extraction Method and Application

The invention provides a method for extracting total polysaccharides from saffron petals, which belongs to the technical field of extracting active ingredients of saffron. It includes the following steps: mixing the air-dried filter residue of saffron petals after ethanol extraction with water at a ratio of 1 g:(15-25) ml and extracting at 95-105 (?) C for 3 hours, ethanol precipitation can obtain crude saffron petal polysaccharides; and resolving the crude saffron petal polysaccharides through chromatographic column layer. Total polysaccharides from saffron petals were isolated and purified. The method has the advantages of high yield, high activity, high DPPH free radical and OH scavenging capacity, non-toxic acute toxicity evaluation, and can reduce the content of TC and TG in liver to a certain extent. This indicates that saffron petal polysaccharide can reduce blood lipid level, effectively prevent blood lipid level and effectively prevent hyperlipidemia caused by long-term high-fat diet.

【技术实现步骤摘要】
藏红花花瓣总多糖及其提取方法和应用
本专利技术属于藏红花活性成分提取
，尤其涉及藏红花花瓣总多糖及其提取方法和应用。
技术介绍
藏红花(Saffron，CrocussativusL.)，又名番红花、西红花、洎夫蓝、撒法即，为鸢尾科番红花属多年生草本植物，据《中华人名共和国药典》记载，其药用部位为干燥的花柱，藏红花作为传统中药其功效为:活血化瘀，凉血解毒，解郁安神。用于经闭癥瘕，产后瘀阻，温毒发斑，忧郁痞闷，惊悸发狂等。除药用外，它可用作食品添加剂、食用色素和高级香料。近年对藏红花的药理研究表明，其花柱中的主要有效成分—藏红花苷对于癌症、冠心病、动脉粥样硬化、高血脂症等多种疾病具有较好的防治作用。其花柱因产量极低同时具有神奇的药效而被世人封以“植物黄金”的称号，同时，大量的非药用部位—花瓣在藏红花的制药工业中成为副产品，造成极大的资源浪费。现有技术对藏红花花瓣的活性成分提取工艺，提取率低，提取获得的成分活性低。
技术实现思路
有鉴于此，本专利技术提供一种提取率高，活性高的藏红花花瓣总多糖的提取方法和藏红花花瓣总多糖的应用。为了实现上述目的，本专利技术提供了以下技术方案：藏红花花瓣总多糖的提取方法，包括以下步骤：1)将藏红花花瓣粉末醇提后风干的滤渣与水以1g:(15～25)ml的比例混合置于95～105℃提取2.5～3.5h后固液分离，收集液相组分，获得藏红花花瓣水提液；2)将所述藏红花花瓣水提液醇沉，收集固相组分获得藏红花花瓣水提物固体粉末；3)将所述藏红花花瓣水提物固体粉末复溶，透析后，用阴离子交换柱层析纯化、凝胶柱层析纯化获得藏红花花瓣总多糖。优选的，所述滤渣与水的比例为1g:20ml，所述提取的温度为98～102℃。优选的，所述提取的时间为2.7～3.3h。优选的，所述醇沉为将乙醇与所述藏红花花瓣水提液混合，至混合液中乙醇的体积浓度为85～95％。优选的，所述透析的截留分子量为2500～3500D；所述透析的总时间为42～54h，每6～8h换水一次。优选的，所述阴离子交换柱为DEAE-SephadexA-50柱。优选的，所述阴离子交换柱层析的上样浓度为30～40mg/ml；所述阴离子交换柱层析采用0.05～0.6mol/L的NaCl溶液梯度洗脱，所述洗脱速度为0.8～1.2ml/min。优选的，所述凝胶柱层析采用SephadexG-200，所述凝胶柱层析的洗脱液为水，洗脱流速为0.08～0.12ml/min。本专利技术还提供了所述提取方法制备获得的藏红花花瓣总多糖。本专利技术还提供了所述的藏红花花瓣总多糖在制备药品、保健品和化妆品中的应用。优选的，所述药品包括防治高血脂症的药品。本专利技术的有益效果：本专利技术中所述藏红花花瓣总多糖的提取方法，通过将藏红花花瓣粉末醇提后风干的滤渣与水以1g:(15～25)ml的比例混合置于95～105℃提取2.5～3.5h后固液分离，醇沉，透析、阴离子交换柱层析和凝胶柱层析获得的藏红花花瓣总多糖得率高，得率为32.10％，纯度为88.10％。体外抗氧化结果显示，随着藏红花花瓣多糖质量浓度的增加，对DPPH和OH自由基的清除作用逐渐增强。浓度为16mg/mL时，对DPPH自由基的清除能力为29.46％，浓度为20mg/mL时对·OH自由基清除率过半，为63.86％，表现较高的体外抗氧化能力。附图说明图1为不同浓度的PPC溶液对DPPH自由基的清除率试验结果；图2为不同浓度的PPC溶液对·OH自由基的清除率试验结果；图3～8为藏红花花瓣多糖对高脂血症小鼠脏器系数的影响；图9～11为藏红花花瓣多糖对高脂血症小鼠血清葡萄糖、高脂组血清TC、TG的影响。具体实施方式本专利技术提供了藏红花花瓣总多糖的提取方法，包括以下步骤：1)将藏红花花瓣粉末醇提后风干的滤渣与水以1g:(15～25)ml的比例混合置于95～105℃提取2.5～3.5h后固液分离，收集液相组分，获得藏红花花瓣水提液；2)将所述藏红花花瓣水提液醇沉，收集固相组分获得藏红花花瓣水提物固体粉末；3)将所述藏红花花瓣水提物固体粉末复溶，透析后，用阴离子交换柱层析纯化、凝胶柱层析纯化获得藏红花花瓣总多糖。在本专利技术中，以藏红花花瓣为原料，所述藏红花花瓣优选为去除藏红花花柱的干燥花瓣。本专利技术中，所述藏红花花瓣优选的烘干至恒重后进行粉碎获得藏红花花瓣粉末；所述藏红花花瓣粉末的粒度优选的小于30目。本专利技术中所述藏红花花瓣粉末优选的采用石油醚脱脂后，烘干备用。本专利技术中所述烘干的温度优选为50～60℃，更优选为56℃。本专利技术中，所述藏红花花瓣粉末优选的密封避光保存。本专利技术中所述的醇提优选的包括以下步骤：将上述藏红花花瓣粉末与体积分数为55～65％的乙醇以1g:(15～25)ml的比例混合置于65～75℃提取1.5～2.5h后固液分离，收集固相组分风干后即得到所述滤渣。本专利技术将所述滤渣与水以1g:(15～25)ml的比例混合置于95～105℃提取2.5～3.5h后固液分离，收集液相组分，获得藏红花花瓣水提液。在本专利技术中，所述滤渣与水的比例优选为1g:(18～22)ml，更优选为1g:20ml。本专利技术中所述提取的温度优选为98～102℃，更优选为100℃；所述提取的时间优选为2.7～3.3h，更优选为3h。本专利技术在所述提取后进行固液分离，收集液相组分；本专利技术中，所述固液分离的方法优选为过滤，本专利技术对所述过滤没有特殊要求，采用本领域常规的纱布过滤、滤纸过滤或膜过滤均可。本专利技术在获得所述藏红花花瓣水提液后，将所述藏红花花瓣水提液醇沉。本专利技术中所述醇沉为将乙醇与所述藏红花花瓣水提液混合，至混合液中乙醇的体积浓度为85～95％，优选为90％。本专利技术中，所述醇沉的温度优选为4℃，所述醇沉的时间优选为10～16h，更优选为12～14h；本专利技术在所述醇沉后，进行固液分离，收集固相组分。将固体组分至于30～50℃，真空干燥10～14小时，即得藏红花花瓣水提物固体粉末。本专利技术中，所述固液分离的方式优选为离心或过滤；本专利技术对所述离心或过滤的具体条件没有特殊限定，只要能够实现固液分离即可；本专利技术中，所述干燥温度优选为40℃，干燥时间为12小时。本专利技术在获得所述藏红花花瓣水提物固体粉末进行复溶后透析。在本专利技术中，所述复溶优选的用蒸馏水进行。在本专利技术中所述透析的截留分子量优选为2500～3500D，更优选为3000D；所述透析的总时间优选为42～54h，更优选为46～50h，最优选为48h；本专利技术在所述透析过程中优选的每6～8h换水一次。本专利技术在所述透析后，再次浓缩，干燥(方法与藏红花花瓣水提物干燥方法相同)即得藏红花花瓣粗多糖。得到藏红花花瓣粗多糖后，取100mg样品，超纯水复溶，用阴离子交换柱层析纯化。在本专利技术中，所述阴离子交换柱优选为DEAE-SephadexA-50柱。在本专利技术中，所述DEAE-SephadexA-50柱的制备采用本领域常规的手段进行，无其他特殊要求。本专利技术中所述阴离子交换柱层析的上样浓度优选为30～40mg/ml，更优选为31～35mg/ml；本专利技术中所述阴离子交换柱层析采用0.05～0.6mol/L的NaCl溶液梯度洗脱，本专利技术中，所述梯度洗脱NaCl溶液的浓度梯度优选为0.05、0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6mol/L；所述洗脱速本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.藏红花花瓣总多糖的提取方法，包括以下步骤：1)将藏红花花瓣粉末醇提后的滤渣风干，得到风干滤渣与水以1g:(15～25)ml的比例混合置于95～105℃提取2.5～3.5h后固液分离，收集液相组分，获得藏红花花瓣水提液；2)将所述藏红花花瓣水提液醇沉，收集固相组分获得藏红花花瓣水提物固体粉末；3)将所述藏红花花瓣水提物固体粉末复溶，透析后，用阴离子交换柱层析纯化、凝胶柱层析纯化获得藏红花花瓣总多糖。

【技术特征摘要】
1.藏红花花瓣总多糖的提取方法，包括以下步骤：1)将藏红花花瓣粉末醇提后的滤渣风干，得到风干滤渣与水以1g:(15～25)ml的比例混合置于95～105℃提取2.5～3.5h后固液分离，收集液相组分，获得藏红花花瓣水提液；2)将所述藏红花花瓣水提液醇沉，收集固相组分获得藏红花花瓣水提物固体粉末；3)将所述藏红花花瓣水提物固体粉末复溶，透析后，用阴离子交换柱层析纯化、凝胶柱层析纯化获得藏红花花瓣总多糖。2.根据权利要求1所述的提取方法，其特征在于，所述滤渣与水的比例为1g:20ml，所述提取的温度为98～102℃，所述提取的时间为2.7～3.3h。3.根据权利要求1所述的提取方法，其特征在于，所述醇沉为将乙醇与所述藏红花花瓣水提液混合，至混合液中乙醇的体积浓度为85～95％。4.根据权利要求1所述的提取方法，其特征在于，所述透析的截留分子量为2500～...

【专利技术属性】
技术研发人员：李振宇，王晓彤，胡凌娟，钱华，李明焱，
申请(专利权)人：金华寿仙谷药业有限公司，浙江寿仙谷医药股份有限公司，
类型：发明
国别省市：浙江,33