The present invention relates to a screening method and application of quorum sensing inhibitors, which is an electrophoretic mediated microanalysis technique. The method uses enzymes to catalyze one-step hydrolysis of substrates in capillary, and then directly determines the peak area of products at ultraviolet 210 nm to realize the determination of enzyme activity and the screening method of enzyme inhibitors. The method is not only fast and simple, less reagent consumption, but also easy to automate and accurate. It has the advantages of high accuracy and is suitable for the screening and analysis of quorum sensing inhibitors, especially for the screening of quorum sensing inhibitors in mixed compound samples such as crude extracts of traditional Chinese medicine, and provides theoretical basis for the food preservation strategy with interfering quorum sensing system as a new target.
【技术实现步骤摘要】
群体感应抑制剂筛选方法和应用
本专利技术属于酶抑制剂筛选方法，特别涉及的是群体感应抑制剂的筛选方法和应用，可以用于中药粗提物和合成小分子化合物的高通量筛选等方面。
技术介绍
食品腐败是一个复杂的过程，其中微生物作用是引起食品腐败变质的主要因素之一。微生物通过分解蛋白质、脂质及糖类等营养物质进行生长繁殖，进而导致食品腐败，从而导致巨大的经济损失和严重的公共卫生问题（GramL.,RavnL.,RaschM.J.FoodMicrobio.,2002,78:79-97）。群体感应(quorumsensing，QS)是细菌根据自身细菌浓度变化进行自我协调的一种群体行为，即细菌在生长繁殖过程中通过合成、分泌自诱导物作为信号分子，检测细菌浓度；当自诱导物浓度随着细菌群体密度达到一定阈值时，细菌便开启细胞密度依赖的特定基因表达机制（BasslerB.L.,GreenbergE.P.,StevensA.M.J.bacteriology,1997,179:4043-4045）。现有研究表明QS通过调控与食品腐败相关的蛋白质、脂肪、果胶、壳多糖等分解酶的活性导致食品腐败，研究人员已在...
【技术保护点】
1.一种群体感应抑制剂的筛选方法，其特征是采用电泳中介微分析技术，在毛细管中用酶催化水解底物的一步反应，然后在紫外200 nm处直接测定产物峰面积实现酶活的测定和酶抑制剂的筛选方法；所述的酶为5＇‑甲硫腺苷核苷酶（MTAN）；所述的底物为5＇‑甲硫腺苷（MTA）；所述的产物为腺嘌呤。
【技术特征摘要】
1.一种群体感应抑制剂的筛选方法，其特征是采用电泳中介微分析技术，在毛细管中用酶催化水解底物的一步反应，然后在紫外200nm处直接测定产物峰面积实现酶活的测定和酶抑制剂的筛选方法；所述的酶为5＇-甲硫腺苷核苷酶（MTAN）；所述的底物为5＇-甲硫腺苷（MTA）；所述的产物为腺嘌呤。2.根据权利要求1所述的一种群体感应抑制剂的筛选方法，其特征在于：1）将反应缓冲液、酶溶液和底物溶液分别以1-100纳升体积依次导入经过分离缓冲液处理过的毛细管，所述的酶的浓度范围为0-100μg/mL，底物的浓度范围为0-100μg/mL，所述的底物溶液含或不含待筛选化合...
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