一种血清中C-肽含量的化学发光法测定试剂盒及检测方法技术

本发明专利技术属于医学检测领域并公开了一种血清中C‑肽含量的化学发光法测定试剂盒及检测方法；该试剂盒包括：M试剂、R试剂、C‑P校准品、pH调节剂、反应增强剂以及化学发光底物，所述的M试剂包括2μg/mL浓度包被C肽‑生物素化抗体的磁微粒、0.2mol/L浓度的Tris缓冲液；所述的R试剂包括1μg/mL浓度的C‑P‑AP标记抗体、0.1mol/L浓度的Tris缓冲液；所述的C‑P校准品包括两种不同浓度的C‑肽样品及0.1mol/L浓度的Tris缓冲液；本发明专利技术C‑肽检测试剂盒具有特异性强、稳定性好的优点，提高了检测的灵敏度和特异性；整个体系稳定性好、操作简便，非常适合于临床全自动化学发光测定仪配套使用。

【技术实现步骤摘要】
一种血清中C-肽含量的化学发光法测定试剂盒及检测方法
本专利技术涉及医学检测
，尤其涉及一种血清中C-肽含量的化学发光法测定试剂盒及检测方法。
技术介绍
人C-肽(C-P)是胰岛素原在胰岛β细胞中经酶裂解作用与胰岛素同时产生，无生物活性，但对保证胰岛素的正常结构却是必要的。虽然C-肽和胰岛素是等分子产生，但由于C-肽的半衰期更长，因此在禁食后C肽浓度比胰岛素高5-10倍。C肽主要在肾脏中降解，部分以原形从尿液中排出。由于C肽在肝脏中的代谢不超过10％，所以与外周血胰岛素浓度相比，C-肽的浓度能更好地反映胰岛β细胞的功能。目前，C-肽的实验室检测方法有放射免疫(RIA)、酶联免疫(ELISA)、化学发光免疫(CLIA)等。RIA和ELISA出现较早，但由于污染性、灵敏度低、时间长等缺点，已不再据主体地位。目前临床上检测C-肽主要采用化学发光法和酶联免疫法，极少数还在使用放射免疫分析方法。酶联免疫法必须使用酶标仪进行检测，两种方法检测时间长(一般30分钟以上)，且检测设备复杂昂贵，必须配备专人负责操作，从而导致检测费用也较为昂贵；而放射免疫分析方法需要使用放射性标记物，不仅需配备专用放射性探测器对检测结果进行测定，也易对操作人员造成放射性污染和伤害，此外，该方法常用的I-125，I-131，P-32等放射性元素，由于其半衰期短，导致试剂保存时间也短，在临床使用上非常不便。鉴于此，如何提供一种灵敏度高、稳定性好、特异性强、动力学范围宽、适于自动化操作的血清中C-肽含量的化学发光法测定试剂盒及检测方法是本领域技术人员需要解决的技术难题。
技术实现思路
针对现有技术中C-肽检测中存在的灵敏度、稳定性不理想的不足之处，本专利技术提供了一种灵敏度高、稳定性好、特异性强、动力学范围宽、适于自动化操作的血清中C-肽含量的化学发光法测定试剂盒及检测方法。本专利技术为解决上述技术问题，采用以下技术方案来实现：设计一种血清中C-肽含量的化学发光法测定试剂盒，该试剂盒包括：M试剂、R试剂、C-P校准品、pH调节剂、反应增强剂以及化学发光底物，所述的M试剂包括2μg/mL浓度包被C肽-生物素化抗体的磁微粒、0.2mol/L浓度的Tris缓冲液；所述的R试剂包括1μg/mL浓度的C-P-AP标记抗体、0.1mol/L浓度的Tris缓冲液；所述的C-P校准品包括两种不同浓度的C-肽样品及0.1mol/L浓度的Tris缓冲液。优选的，所述的M试剂、R试剂以及C-P校准品中还均含有表面活性剂、稳定剂以及防腐剂。优选的，所述的C肽-生物素化抗体的磁微粒由C肽-生物素化抗体与链霉亲和素磁珠充分混匀所制成。优选的，所述的反应增强剂为PEG4000、PEG6000、PEG8000、PEG10000和PEG20000中的一种或多种。优选的，所述反应增强剂的浓度范围为：5-100g/L。优选的，所述试剂盒的pH值范围为7-9。优选的，所述的化学发光底物为1，2-二氧环已烷衍生物。设计一种血清中C-肽含量化学发光法测定试剂盒的制备方法，包括如下步骤：步骤一：制备M试剂：配制Tris缓冲液，将C肽-生物素化抗体与链霉亲和素磁珠充分混匀加入适量Tris缓冲液于室温下反应，得到M试剂；步骤二：制备R试剂：配制Tris缓冲液，将C-P-AP抗体加入Tris缓冲液中，充分混匀，定容后得到R试剂；步骤三：配制C-P校准品：配制Tris缓冲液，将两种不同浓度的C-肽样品加入Tris缓冲液中，充分混匀得到C-P校准品；步骤四：分别向步骤一、步骤二、步骤三制备的M试剂、R试剂、C-P校准品中加入pH调节剂和适量反应增强剂，再混合均匀。设计一种血清中C-肽含量化学发光法测定试剂盒的检测方法，包括如下步骤：步骤一：利用C-P校准品进行多点定标制作校准曲线，校准点不少于6个，校准曲线采用Spline或Logit/log方程拟合，相关系数r≥0.990；步骤二：将M试剂与R试剂按照1：1-2的比例置于反应管中混合均匀，再添加适量的待测样本溶液，在20-40℃条件下进行培育，直至形成夹心复合物为止；步骤三：将化学发光底物添加到反应管内，然后由全自动发光测定仪对反应中所产生的光进行测量，待测样本内分析物的量由校准曲线来确定。优选的，所述的全自动发光测定仪的检测波长为330nm-900nm。本专利技术提出的一种血清中C-肽含量的化学发光法测定试剂盒及检测方法，有益效果在于：(1)本专利技术C-肽检测试剂盒采用化学发光免疫夹心法测定血清中C-P水平；将样本添加到含有包被着抗人C-P单克隆抗体的顺磁性微粒粒、缓冲溶液和C-P-AP标记抗体的反应管中。C-P-AP标记抗体和人C-P分子上不同的抗原位点反应。人C-P与固定在顺磁性微粒上的单克隆抗人C-P结合，从而形成夹心复合物。在反应管内温育完成后，结合在固相上的物质置于磁场内被吸附，而未结合的物质被冲洗除去，然后将化学发光底物添加到反应管内，然后由全自动发光测定仪对反应中所产生的光进行测量。所产生光的量与样本中的人C-P的浓度成正比，样本内分析物的量由所储存的校准曲线来确定；而其中的磁微粒包被的是人C肽单克隆抗体，具有特异性强、稳定性好的优点，提高了检测的灵敏度和特异性；可广泛应用于体外定量测定人体血清中C肽的含量；(2)本专利技术C-肽检测试剂盒在测定快速灵敏、特异性高的前提下，整个体系稳定性好、操作简便，非常适合于临床全自动化学发光测定仪配套使用；(3)本专利技术C-肽检测试剂盒采用化学发光免疫技术，其具有灵敏度高、稳定性好、特异性强、动力学范围宽、适于自动化操作等优点；(4)本专利技术C-肽检测试剂盒优化了主要原材料的配比，增强了试剂的特异性、灵敏度以及稳定性，且整个体系稳定性好，操作简便，可适于临床全自动化学发光测定仪配套使用。附图说明下面结合附图中的实施例对本专利技术作进一步的详细说明，但并不构成对本专利技术的任何限制。图1为本专利技术实施例实验验证时利用零浓度校准品作为样本进行检测的空白限结果图；图2为本专利技术实施例实验验证时利用公认的参考物质配制成最终浓度约为4ng/mL的准确样品的第一次检测结果示意图；图3为本专利技术实施例实验验证时利用公认的参考物质配制成最终浓度约为4ng/mL的准确样品的第二次检测结果示意图；图4为本专利技术实施例实验验证时利用公认的参考物质配制成最终浓度约为4ng/mL的准确样品的第三次检测结果示意图；图5为本专利技术实施例第一次实验验证时的线性范围内相关性测试结果图；图6为本专利技术实施例第二次实验验证时的线性范围内相关性测试结果图；图7为本专利技术实施例第三次实验验证时的线性范围内相关性测试结果图；图8为本专利技术实施例实验验证时不同区域设置为高的剂量-反应曲线图；图9为本专利技术实施例实验验证时不同区域设置为低的剂量-反应曲线图；图10为本专利技术实施例第一批次实验验证时测定浓度为10ng/mL的人胰岛素原和浓度为500μIU/mL的人胰岛素样本每批次C-P试剂特异性结果图；图11为本专利技术实施例第二批次实验验证时测定浓度为10ng/mL的人胰岛素原和浓度为500μIU/mL的人胰岛素样本每批次C-P试剂特异性结果图；图12为本专利技术实施例第三批次实验验证时测定浓度为10ng/mL的人胰岛素原和浓度为500μIU/mL的人胰岛素样本每批次C-P试剂特异性结本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种血清中C‑肽含量的化学发光法测定试剂盒，其特征在于，该试剂盒包括：M试剂、R试剂、C‑P校准品、pH调节剂、反应增强剂以及化学发光底物，所述的M试剂包括2μg/mL浓度包被C肽‑生物素化抗体的磁微粒、0.2mol/L浓度的Tris缓冲液；所述的R试剂包括1μg/mL浓度的C‑P‑AP标记抗体、0.1mol/L浓度的Tris缓冲液；所述的C‑P校准品包括两种不同浓度的C‑肽样品及0.1mol/L浓度的Tris缓冲液。

【技术特征摘要】
1.一种血清中C-肽含量的化学发光法测定试剂盒，其特征在于，该试剂盒包括：M试剂、R试剂、C-P校准品、pH调节剂、反应增强剂以及化学发光底物，所述的M试剂包括2μg/mL浓度包被C肽-生物素化抗体的磁微粒、0.2mol/L浓度的Tris缓冲液；所述的R试剂包括1μg/mL浓度的C-P-AP标记抗体、0.1mol/L浓度的Tris缓冲液；所述的C-P校准品包括两种不同浓度的C-肽样品及0.1mol/L浓度的Tris缓冲液。2.根据权利要求1所述的一种血清中C-肽含量的化学发光法测定试剂盒，其特征在于，所述的M试剂、R试剂以及C-P校准品中还均含有表面活性剂、稳定剂以及防腐剂。3.根据权利要求1所述的一种血清中C-肽含量的化学发光法测定试剂盒，其特征在于，所述的C肽-生物素化抗体的磁微粒由C肽-生物素化抗体与链霉亲和素磁珠充分混匀所制成。4.根据权利要求1所述的一种血清中C-肽含量的化学发光法测定试剂盒，其特征在于，所述的反应增强剂为PEG4000、PEG6000、PEG8000、PEG10000和PEG20000中的一种或多种。5.根据权利要求1所述的一种血清中C-肽含量的化学发光法测定试剂盒，其特征在于，所述反应增强剂的浓度范围为：5-100g/L。6.根据权利要求1所述的一种血清中C-肽含量的化学发光法测定试剂盒，其特征在于，所述试剂盒的pH值范围为7-9。7.根据权利要求1所述的一种血清中C-肽含量的化学发光法测定试剂盒，其特征在于，所述的化学发光底物为...

【专利技术属性】
技术研发人员：王保全，王文杰，谢燕霞，方洪帅，高铭凯，
申请(专利权)人：宏葵生物中国股份有限公司，
类型：发明
国别省市：山东,37