检测多种动物血清中弓形虫循环抗原的双抗体夹心ELISA试剂盒及制备方法和应用技术

本发明专利技术公开了一种检测多种动物血清中弓形虫循环抗原的双抗体夹心ELISA试剂盒及制备方法和应用，所述双抗体夹心ELISA试剂盒包括：捕获抗体，所述捕获抗体为弓形虫GRA1单克隆抗体，该捕获抗体的效价为5×10

Double antibody sandwich ELISA kit for detection of circulating antigens of Toxoplasma gondii in various animal sera and its preparation method and Application

The invention discloses a double-antibody sandwich ELISA kit for detecting circulating antigens of Toxoplasma gondii in various animal sera, a preparation method and application thereof. The double-antibody sandwich ELISA kit includes: capturing antibody, the capturing antibody is a monoclonal antibody of Toxoplasma gondii GRA1, and the capturing antibody has a titer of 5*10.

【技术实现步骤摘要】
检测多种动物血清中弓形虫循环抗原的双抗体夹心ELISA试剂盒及制备方法和应用
本专利技术是关于血清学检测领域，特别是关于一种检测多种动物血清中弓形虫循环抗原的双抗体夹心ELISA试剂盒及制备方法和应用。
技术介绍
龚地弓形虫(Toxoplasmagondii)是一种专性细胞内寄生原虫，在全球范围内广泛传播，据估计全球约有三分之一的人群表现弓形虫血清抗体阳性。在家畜中同样流行广泛，其中以猪的感染率较高。弓形虫感染可依据宿主发病的轻重缓急分为急性弓形虫病和慢性弓形虫病，急性弓形虫病相对而言对家畜的危害更大。猪急性弓形虫病常引起母猪流产、死胎等繁殖障碍，仔猪发热、呼吸困难甚至死亡等，给养殖业造成巨大的经济损失；而且猪作为人类重要的肉制品来源，在人弓形虫病的传播上发挥了重要作用。因此，研发一种高效、便捷的急性弓形虫病诊断方法非常必要。急性弓形虫病常见的诊断方法包括病原学、血清学、分子生物学和免疫病理学等。病原学和分子生物学诊断方法(如PCR)结果虽然直观可靠，但病原学诊断操作复杂、检出率低、周期长，易出现假阴性，分子生物学诊断方法需要使用专用设备，检测时间和费用较高。血清学诊断常用的方法有抗本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种检测多种动物血清中弓形虫循环抗原的双抗体夹心ELISA试剂盒，其特征在于，所述双抗体夹心ELISA试剂盒包括：捕获抗体，所述捕获抗体为弓形虫GRA1单克隆抗体，该捕获抗体的效价为5×106，抗体亚型为IgG1；以及HRP标记的检测抗体，所述检测抗体为鼠源弓形虫GRA1多克隆抗体，该检测抗体的效价为1.28×105。

【技术特征摘要】
1.一种检测多种动物血清中弓形虫循环抗原的双抗体夹心ELISA试剂盒，其特征在于，所述双抗体夹心ELISA试剂盒包括：捕获抗体，所述捕获抗体为弓形虫GRA1单克隆抗体，该捕获抗体的效价为5×106，抗体亚型为IgG1；以及HRP标记的检测抗体，所述检测抗体为鼠源弓形虫GRA1多克隆抗体，该检测抗体的效价为1.28×105。2.如权利要求1所述的检测多种动物血清中弓形虫循环抗原的双抗体夹心ELISA试剂盒，其特征在于，所述双抗体夹心ELISA试剂盒还包括：96孔酶标反应板；包被液，所述包被液是pH值为9.6的50mM碳酸盐缓冲液；封闭液及样品稀释液，所述封闭液及样品稀释液是5％的脱脂奶；洗涤液，所述洗涤液是含有0.5％Tween-20的磷酸盐缓冲液；TMB底物显色液；终止液，所述终止液是2mol/L的H2SO4溶液；标准阳性血清；以及标准阴性血清。3.如权利要求1或2所述的检测多种动物血清中弓形虫循环抗原的双抗体夹心ELISA试剂盒的制备方法，其特征在于，包括：(1)所述捕获抗体的制备方法为：使用弓形虫GRA1-His重组蛋白免疫小鼠，筛选出阳性杂交瘤细胞，将该阳性杂交瘤细胞给小鼠腹腔注射，连续收集腹水，纯化腹水中的弓形虫GRA1单克隆抗体，即得；(2)所述HRP标记的检测抗体的制备方法为：将弓形虫GRA1-His重组蛋白加弗氏佐剂乳化后，免疫小鼠，采集血液、分离血清，纯化血清中的弓形虫GRA1多克隆抗体，将纯化之后的弓形虫GRA1多克隆抗体使用HRP标记，即得；(3)所述包被液的制备方法为：称取Na2CO31.43g和NaHCO33.066g，溶于1000mL蒸馏水中，4℃保存备用；(4)所述封闭液及样品稀释液的制备方法为：称取5g脱脂奶粉溶于100mLPBS中，现配现用；(5)所述洗涤液的制备方法为：在1LPBS中加入0.5mLTween-20；(6)所述TMB底物显色液的制备方法为：称取TMB200mg，加入无水乙醇100mL，调pH值5.0，加双蒸水定容至1000mL，制成底物A液；另外称取柠檬酸9.33g，Na2HPO414.60g，加入6.4mLH2O2，调pH值5.0，加双蒸水定容至1000mL，制成底物B液，将所述底物A液与底物B液以1:1的体积比加入显色；(7)所述终止液的制备方法为：将浓硫酸22.2mL倒入蒸馏水178.8mL制得；(8)所述标准阳性血清是加入了100ng/mL弓形虫GRA1-His重组蛋白的FBS；以及(9)所述标准阴性血清为未加弓形虫GRA1-His重组蛋白的FBS。4.如权利要求3所述的检测多种动物血清中弓形虫循环抗原的双抗体夹心ELISA试剂盒的制备方法，其特征在于，所述捕获抗体的制备方法如下：用弓形虫GRA1-His重组蛋白免疫小鼠，三免后取小鼠的脾细胞与SP2/0细胞融合，用弓形虫GRA1-GST重组蛋白为包被物建立间接ELISA方法筛选阳性杂交瘤细胞，将该阳性杂交瘤细胞给小鼠腹腔注射，连续收集腹水，进而纯化腹水中的单克隆抗体，经过SDS-PAGE鉴定纯化效果，得到...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘晶，李祎，刘群，
申请(专利权)人：中国农业大学，
类型：发明
国别省市：北京,11