韭菜子提取物及其制备方法和在制备保肝护肝药物方面的应用技术

本发明专利技术涉及一种韭菜子提取物的制备方法，其将粉碎后的韭菜子、炒韭菜子或盐炙韭菜子用20－50%乙醇进行闪式提取，提取液浓缩后分散在水中，然后用二氯甲烷进行萃取，萃取所得水层经大孔吸附树脂吸附后用水冲洗，最后用30－60%乙醇进行梯度洗脱，合并梯度洗脱所得的洗脱液，经浓缩、干燥即得。经实验研究发现：韭菜子提取物可以拮抗四氯化碳引起的小鼠肝组织损伤，且具有一定的保护作用，以及具有加强肝损伤小鼠机体的抗氧化功能，保护肝组织免受自由基进一步伤害的作用和功效。

Leek seed extract and its preparation method and its application in preparation of liver-protecting and liver-protecting drugs

The invention relates to a preparation method of leek seed extract. The crushed leek seed, fried leek seed or salted leek seed are extracted by flash extraction with 20-50% ethanol, the extract is concentrated and dispersed in water, and then extracted by dichloromethane. The extracted water layer is absorbed by macroporous resin and washed with water. Finally, gradient elution is carried out with 30-60% ethanol and gradient elution is combined with gradient elution. The eluent obtained is concentrated and dried. It was found that the extract of Chinese chive seed could antagonize the liver tissue damage induced by carbon tetrachloride in mice, and had a certain protective effect. It also had the effect of strengthening the Anti-oxidative Function of mice with liver injury and protecting liver tissue from further damage of free radicals.

【技术实现步骤摘要】
韭菜子提取物及其制备方法和在制备保肝护肝药物方面的应用
本专利技术属于植物提取
，具体涉及一种韭菜子提取物、制备方法及其在制备保护肝损伤食品、保健品以及药物中的新应用。
技术介绍
肝脏是人体的重要器官，它是物质合成与代谢、能量产生和转换的重要枢纽。肝脏暴露于有害条件下如药物、化学试剂、辐射等均可引起急性肝损伤，长期作用可导致不可修复的损伤，并发生代偿性修复，即形成肝纤维化，进一步可发展成肝硬化或肝癌。由于山区和乡镇的卫生、饮食条件较差，所以山区和乡镇人口肝病发病率最高。中药应用于肝脏疾病的预防和治疗已有数千年的历史，其具有提高免疫力，调节肝脏功能，改善肝脏血液循环，有效修复肝脏等功效。中药有效成分可以通过抗氧自由基损伤、减少炎症和凋亡相关介质的产生、改善肝功能、改善微循环、调节免疫功能等途径达到保护肝细胞治疗肝损伤的作用。但是，目前市场上保肝药较贵，对于山区和乡镇的消费者来说负担较重。因此，开发有效预防、治疗和价位低廉的保肝功能性食品、保健品或药物具有重要意义。韭菜子（SemenAlliiTuberose）是百合科葱属多年生植物韭菜（AlliiumtuberosumRottl.ExSpreng.）的干燥成熟种子，为药食同源的中药，具有益肾、健脾提神、行气理血、润肠通便、壮阳固精等功效，用于肾亏虚，腰膝酸痛，阳痿遗精等，收载于《中国药典》第一部。研究表明韭菜子化学成分主要有甾体皂苷类、生物碱类、硫化物、黄酮类等化合物。现代药理研究证明韭菜子具有温肾壮阳、加强免疫、抗氧化、抗衰老、抑菌等作用。韭菜子为韭菜生产的附属产品，近年市场保健品行业对韭菜子需求快速增长，韭菜种植面积变得更为广泛、货源充足，使价格一直保持在平稳、合理阶段。对于开发高效、低价的保肝药，解决“看病难，看病贵”具有重要意义。目前，并未有韭菜子在保肝护肝方面应用的文献相关报道。
技术实现思路
本专利技术目的在于克服现有技术缺陷，提供一种价格低廉、制备简单的韭菜子提取物。本专利技术还提供了上述韭菜子提取物的制备方法及其在制备保护肝损伤食品、保健品以及药物中的新应用。为实现上述目的，本专利技术采用如下技术方案：一种韭菜子提取物的制备方法，将粉碎后的韭菜子、炒韭菜子或盐炙韭菜子用20－50%乙醇进行闪式提取，提取液浓缩后分散在水中，然后用二氯甲烷进行萃取，萃取所得水层部位经大孔吸附树脂吸附后用水冲洗，最后用30－60%乙醇进行梯度洗脱，合并梯度洗脱所得的洗脱液，经浓缩、干燥即得到韭菜子总甾体皂苷。上述韭菜子提取物的制备方法，具体的，闪式提取可以进行2－3次，闪式提取时每1g韭菜子、炒韭菜子或盐炙韭菜子以添加8－15mL的20－50%乙醇为宜。具体的，上述韭菜子提取物的制备方法中，每次闪式提取的时间为3－10min。具体的，上述韭菜子提取物的制备方法中，二氯甲烷萃取次数为2－3次。具体的，上述韭菜子提取物的制备方法中，所述大孔吸附树脂的型号为HPD100，HPD600，HPD400，D101，AB-8，ADS-17或DM130等。本专利技术提供了采用上述方法制备得到的韭菜子提取物，其中总甾体皂苷类化合物含量>80%。经检测发现：制备所得韭菜子提取物中主要包括五种甾体皂苷类化合物，总含量>50%，分别是：化合物1：26-O-β-D-吡喃葡萄糖基-25(R)-5α-呋甾烷-3β,22α,26-三羟基-3-O-[α-L-吡喃鼠李糖基-(1→2)-O-α-L-吡喃鼠李糖基-(1→4)]-O-β-D-吡喃葡萄糖苷（Neoprotodioscin）；化合物2：26-O-β-D-吡喃葡萄糖基-25(S)-5α-呋甾烷-2α，3β，22£，26-四羟基-3-O-[α-L-吡喃鼠李糖基-(1→2)]-O-β-D-吡喃葡萄糖苷（TrigoneosideXa）；化合物3：25(S)-螺甾烷-2α,3β-二羟基-3-O-[α-L-吡喃鼠李糖基-(1→2)-O-α-L-吡喃鼠李糖基-(1→4)]-O-β-D-吡喃葡萄糖苷(TuberosideD)；化合物4：25(S)-螺甾烷-3β，5β，6α-三羟基-3-O-α-L-吡喃鼠李糖基-(1→4)-O-β-D-吡喃葡萄糖苷；化合物5：25(S)-螺甾烷-2β,3β,5β-三羟基-3-O-β-D-吡喃葡萄糖苷(TuberosideO)。化合物1至5的结构分别如下所示：化合物1；化合物2；化合物3；化合物4；化合物5。本专利技术还提供了上述韭菜子提取物在制备预防和治疗肝损伤药物、食品或保健品中的应用，尤其是预防和治疗由四氯化碳引起的肝损伤。本专利技术经试验发现：韭菜子提取物对四氯化碳诱导的小鼠肝损伤具有显著的保护作用，其保护机制与增强小鼠肝组织的抗氧化功能有关。因此，本专利技术还提供了上述韭菜子提取物在制备保护与增强肝组织抗氧化功能药物、食品或保健品中的应用。本专利技术从韭菜子中提取得到含总甾体皂苷类化合物的韭菜子提取物，并采用腹腔注射四氯化碳诱导急性肝损伤小鼠模型。经实验研究发现：韭菜子提取物可以拮抗四氯化碳引起的小鼠肝组织损伤，且具有一定的保护作用，表现为减轻肝细胞炎症和纤维化，促进肝细胞再生和降低血清中天冬氨酸转氨酶、丙氨酸转氨酶的作用，可降低小鼠肝脏中MDA、NO含量；提高肝脏中T-SOD、GSH-PX酶活力，说明本专利技术韭菜子提取物具有加强肝损伤小鼠机体的抗氧化功能，保护肝组织免受自由基进一步伤害的作用和功效。此外，本专利技术韭菜子提取物制备方法简便，提取物纯度高，并且韭菜子来源广泛，取材便利，同时开拓了韭菜子提取物作为保肝护肝的保健品、食品或药物用途。附图说明图1为本专利技术韭菜子提取物对四氯化碳引起的小鼠肝损伤组织病理变化的影响。具体实施方式以下结合实施例对本专利技术的技术方案作进一步地详细介绍，但本专利技术的保护范围并不局限于此。本专利技术中，炒韭菜子或盐炙韭菜子采用本领域常规技术制作即可，因其制作过程并非本申请的创新之所在，故此不再详述。下述实施例中，如无特殊说明，乙醇均指的是体积百分比。实施例1一种韭菜子提取物的制备方法，其包括如下步骤：将5kg干燥的盐炙韭菜子粉碎后，分别用50L体积浓度50%乙醇闪式提取3次（第一次闪式提取3min，第二次闪式提取5min，第三次闪式提取4min），闪式提取结束后过滤，合并三次提取获得的提取液，减压浓缩得到提取物。将提取物分散在水中，采用同体积二氯甲烷萃取3次，萃取所得水层经HPD100大孔吸附树脂吸附，然后用水冲洗至流出液无色（弃掉，主要用以除去杂质）；再依次用6倍柱体积的30%乙醇、6倍柱体积60%乙醇进行梯度洗脱，合并梯度洗脱收集的洗脱液，经减压浓缩（以回收溶剂）、干燥得100.4g提取物，即为韭菜子提取物。本专利技术采用分光光度法测得上述实施例1制备所得韭菜子提取物中总甾体皂苷类化合物含量为80.1%。采用HPLC分析制备得到五种甾体皂苷类化合物，分别是化合物1：Neoprotodioscin；化合物2：TrigoneosideXa；化合物3：TuberosideD；化合物4：25(S)-螺甾烷-3β，5β，6α-三羟基-3-O-α-L-吡喃鼠李糖基-(1→4)-O-β-D-吡喃葡萄糖苷；化合物5：TuberosideO。本专利技术对化合物1至5的理化性质和化学结构进行了定性鉴定，经MS、13本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种韭菜子提取物的制备方法，其特征在于，将粉碎后的韭菜子、炒韭菜子或盐炙韭菜子用20－50%乙醇进行闪式提取，提取液浓缩后分散在水中，然后用二氯甲烷进行萃取，萃取所得水层部位经大孔吸附树脂吸附后用水冲洗，最后用30－60%乙醇进行梯度洗脱，合并梯度洗脱所得的洗脱液，经浓缩、干燥即得。

【技术特征摘要】
1.一种韭菜子提取物的制备方法，其特征在于，将粉碎后的韭菜子、炒韭菜子或盐炙韭菜子用20－50%乙醇进行闪式提取，提取液浓缩后分散在水中，然后用二氯甲烷进行萃取，萃取所得水层部位经大孔吸附树脂吸附后用水冲洗，最后用30－60%乙醇进行梯度洗脱，合并梯度洗脱所得的洗脱液，经浓缩、干燥即得。2.如权利要求1所述韭菜子提取物的制备方法，其特征在于，闪式提取2－3次，闪式提取时每1g韭菜子、炒韭菜子或盐炙韭菜子添加8－15mL的20－50%乙醇。3.如权利要求2所述韭菜子提取物的制备方法，其特征在于，每次闪式...

【专利技术属性】
技术研发人员：丛悦，郭敬功，王书云，刘习平，
申请(专利权)人：河南大学，
类型：发明
国别省市：河南,41