一种冻干保护剂、用其制备普洱茶用直投式冻干菌剂的方法与应用技术

本发明专利技术公开了一种冻干保护剂、用其制备普洱茶用直投式冻干菌剂的方法与应用,该冻干保护剂在制备普洱茶发酵用直投式冻干菌剂中使用，包括质量百分含量为5‑15wt％生茶汤、0.5‑10wt％蔗糖和余量的水；优选质量百分含量为8％‑12％生茶汤、4‑8％蔗糖和余量的水；更优选质量百分含量为10wt％生茶汤、6wt％蔗糖和余量的水。用本发明专利技术的冻干保护剂和方法制备得到的菌剂活菌含量高，存活率高，作为发酵剂时接种量小，能直接使用，避免了繁冗的扩大培养过程，既节约劳动力，缩短生产周期，又可有效地防止菌种在逐级扩培过程中污染及退化，保存管理方便，产品品质稳定，经简单复水处理后可直接作为种子菌株发酵普洱茶使用。

【技术实现步骤摘要】
一种冻干保护剂、用其制备普洱茶用直投式冻干菌剂的方法与应用
本专利技术涉及微生物制品
，特别是涉及一种冻干保护剂，用于制备普洱茶用直投式冻干菌剂、该直投式冻干菌剂的制备方法及其在发酵普洱茶中的应用。
技术介绍
目前，菌粉通常是由菌液经真空冷冻干燥的方法得到。真空冷冻干燥是将含水物料冷冻到冰点以下，使水转变为冰，然后在较高真空下将冰转变为水蒸气除去的干燥方法，该方法分为冻结和干燥脱水两个阶段。由于真空冷冻干燥具有菌粉存活率高，能保持菌种形态、色泽，且复水性好，脱水彻底，保存期长，储存运输使用方便等特点，因此菌种的保存方法中真空冷冻干燥法是最有效的方法之一，对一般活力强的微生物及其孢子以及无芽胞菌都适用，即使对一些很难保存的致病菌，如脑膜炎球菌与淋病球菌等亦能保存。然而，在实际操作中，真空冷冻干燥时由于水的结晶、细胞的失水等情况，使得菌体容易出现死亡或损伤，对于菌种的保存、生产和使用非常不利。有报道称，菌体在无任何保护措施下真空冷冻干燥，其存活率很低，甚至低至0.1％。于是在许多生物制品的真空冷冻干燥过程中，常常采用低聚糖，尤其是二糖作为保护剂。这是因为二糖既能在冻结阶段中起到低温保护剂的作用；又能在干燥脱水阶段中发挥脱水保护剂的作用。二糖可根据其还原性分为还原性二糖和非还原性二糖，就冻结阶段而言，无论还原性二糖还是非还原性二糖都具有很好的保护效果，但在生物制品真空冷冻干燥后的储存过程中，由于还原性二糖的存在会使得冻干品发生Maillard反应(蛋白质褐变反应)，最终导致冻干品发生变质。所以，在食品、药品以及生物制品的真空冷冻干燥过程中，非还原性二糖是常用的保护剂，其中又以蔗糖和海藻糖最为常用。现有的发酵菌剂分为直投式菌剂和非直投式菌剂，非直投式菌剂在使用时需临时活化、扩培后才能接种，而直投式菌剂是指一系列高度浓缩和标准化的冷冻干燥菌剂，可直接加入处理后的原料进行发酵，而无需对其进行活化、扩培等其它预处理；有固体和液体两种形式，液体直投式菌剂储存时间较固体菌剂短，且不便于运输，而固体直投式菌剂存在制备周期长的缺点。目前利用冻干技术制备和贮存各种工业菌种已有许多报道，如公开号为CN103087961A的专利申请中公开了一种直投式霉豆渣发酵剂，公开号为CN1915042A的专利申请中公开了一种直投式酸奶发酵菌剂，公开号为CN101002580A的专利申请中公开了一种高活性泡菜直投式菌剂，这三篇专利文献中公开的方法，使用到的保护剂或者为脱脂奶粉、麦芽糊精和蔗糖，或者为谷氨酸钠、乳糖、甘油、聚乙烯吡咯烷酮和Vc，或者为麦芽糊精、吐温、海藻糖和蔗糖。这些保护剂用于普洱茶的发酵会影响普洱茶的香气和滋味。目前大部分普洱茶的发酵仍采用自然接种微生物，也开始有专利文献采用分离自传统渥堆茶叶的微生物进行普洱茶的发酵。如：公开号为CN102550723A的专利申请中公开了传统普洱茶微生物群种子在普洱茶发酵中的应用，公开号为CN103371239A的专利申请中利用普洱茶中优势微生物进行普洱茶强化发酵，公开号为CN101427717A的专利申请中公开了一种普洱茶发酵种曲的制备方法，公开号为CN1752205A、CN1752202A、CN1752203A、CN101028023A、CN101054556A的专利申请中分别将酿酒酵母真菌、黑曲霉真菌、米曲霉真菌、绿色木霉真菌、少根根霉真菌用于普洱茶的生产中。但这些文献中多以单菌种直接活化接种，或者多菌种混合直接真空冷冻干燥制曲接种，其它菌种未见报道，且已有报道中或者未将分离得到的微生物制成直投式菌剂，或者在制备菌剂过程中未使用冻干保护剂。
技术实现思路
本专利技术的目的是针对现有技术中存在的技术缺陷，第一方面，提供一种冻干保护剂，在制备普洱茶发酵用直投式冻干菌剂中使用，包括质量百分含量为5-15wt％生茶汤、0.5-10wt％蔗糖和余量的水；优选质量百分含量为8％-12％生茶汤、4-8％蔗糖和余量的水；更优选质量百分含量为10wt％生茶汤、6wt％蔗糖和余量的水。所述生茶汤的制作过程为：按重量份数，将10份晒青毛茶浸泡于100份水中，80-100℃下浸提30-60min；浸提后冷却，取上清液灭菌，即得生茶汤；优选的，所述灭菌为高压蒸汽灭菌10-15min。所述直投式冻干菌剂含有的菌种为食腺嘌呤节孢酵母菌(Arxualadeninivorans)，优选的，为保藏号CGMCCNO.8683于2014年1月6日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物物中心的食腺嘌呤节孢酵母菌(Arxualadeninivorans)。第二方面，提供一种制备普洱茶发酵用直投式冻干菌剂的方法，包括菌种的活化、菌种的增殖培养、菌体收集、预冻、真空冷冻干燥，预冻时使用上述冻干保护剂。所述预冻为：在由菌体组成的菌泥中按质量比1:1加入冻干保护剂，混合后在-40℃预冻至固态，得到预冻菌剂。所述真空冷冻干燥为：将预冻得到的预冻菌剂在真空条件下继续-40℃干燥18-48h至含水量5％以下,即得到所述直投式冻干菌剂。所述菌种的增殖培养为：将活化的菌种接至1/2YPD液体培养基中25-45℃增殖培养12-22h，得到增殖的菌液；优选的，1/2YPD液体培养基包括大豆蛋白胨1wt％，酵母粉0.5wt％，葡萄糖1wt％和余量的水，pH4-9。包括以下步骤：(1)、菌种的活化：将食腺嘌呤节孢酵母菌(Arxualadeninivorans)接种至YPD固体平板中25-45℃活化培养36-60h，挑取单菌落活化培养至第三代，得到活化的菌种；优选的，YPD固体平板作为活化培养基，包括大豆蛋白胨2wt％，酵母粉1wt％，葡萄糖2wt％，琼脂1.5wt％和余量的水，pH4-9(pH优选5.5-8)；(2)、菌种的增殖培养：将步骤(1)活化的菌种接至1/2YPD液体培养基中,控制起始OD值为0.1-0.2OD之间，25-45℃增殖培养12-22h，得到增殖的菌液；(3)、菌体收集：将步骤(2)得到的增殖的菌液在0-4℃、6000-8000rpm离心10-20min，弃去上清液，得到菌泥；(4)、预冻：在步骤(3)的菌泥中加入冻干保护剂，混合后-40℃预冻至固体，得到预冻菌剂；冻干保护剂与菌泥的质量比为1：1；(5)、真空冷冻干燥：将步骤(4)的预冻菌剂真空条件下继续-40℃干燥18-48h至含水量5％以下，得到所述直投式冻干菌剂。第三方面，提供由上述方法制备得到的直投式冻干菌剂，包含的菌种为食腺嘌呤节孢酵母菌(Arxualadeninivorans)，保藏号为CGMCCNO.8683。第四方面，提供由上述方法制备得到的直投式冻干菌剂在人工可控发酵过程和普洱茶液态发酵过程中的应用，所述直投式冻干菌剂在发酵过程中直接对普洱生茶进行发酵，无需对菌种进行活化、扩培等其它预处理。与现有技术相比，本专利技术的有益效果是：本专利技术首次采用真空冷冻干燥法制备直投式食腺嘌呤节孢酵母(Arxualadeninivorans)菌剂，用本专利技术的方法制备得到的直投式冻干菌剂活菌含量高，存活率高，作为发酵剂时接种量小(最低0.05％，而传统固态发酵接种量为5％-15％)，能直接使用，避免了繁冗的扩大培养过程，既节约劳动力，缩短生产周期，又可有效地防止菌种在逐级扩培过本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种冻干保护剂，其特征在于，在制备普洱茶发酵用直投式冻干菌剂中使用，包括质量百分含量为5‑15wt％生茶汤、0.5‑10wt％蔗糖和余量的水；优选质量百分含量为8％‑12％生茶汤、4‑8％蔗糖和余量的水；更优选质量百分含量为10wt％生茶汤、6wt％蔗糖和余量的水。

【技术特征摘要】
1.一种冻干保护剂，其特征在于，在制备普洱茶发酵用直投式冻干菌剂中使用，包括质量百分含量为5-15wt％生茶汤、0.5-10wt％蔗糖和余量的水；优选质量百分含量为8％-12％生茶汤、4-8％蔗糖和余量的水；更优选质量百分含量为10wt％生茶汤、6wt％蔗糖和余量的水。2.根据权利要求1所述冻干保护剂，其特征在于，所述生茶汤的制作过程为：按重量份数，将10份晒青毛茶浸泡于100份水中，80-100℃下浸提30-60min；浸提后冷却，取上清液灭菌，即得生茶汤；优选的，所述灭菌为高压蒸汽灭菌10-15min。3.根据权利要求1或2所述冻干保护剂，其特征在于，所述直投式冻干菌剂含有的菌种为食腺嘌呤节孢酵母菌(Arxualadeninivorans)，优选的，为保藏号CGMCCNO.8683于2014年1月6日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物物中心的食腺嘌呤节孢酵母菌(Arxualadeninivorans)。4.一种制备普洱茶发酵用直投式冻干菌剂的方法，包括菌种的活化、菌种的增殖培养、菌体收集、预冻、真空冷冻干燥，其特征在于，预冻时使用权利要求1-3任一所述冻干保护剂。5.根据权利要求4所述方法，其特征在于，所述预冻为：在由菌体组成的菌泥中按质量比1:1加入冻干保护剂，混合后在-40℃预冻至固态，得到预冻菌剂。6.根据权利要求4或5所述方法，其特征在于，所述真空冷冻干燥为：将预冻得到的预冻菌剂在真空条件下继续-40℃干燥18-48h至含水量5％以下,即得到所述直投式冻干菌剂。7.根据权利要求4-6任一所述方法，其特征在于，所述菌种的增殖培养为：将活化的菌种接至1/2YPD液体培养基中25-45℃增殖培养12-22h...

【专利技术属性】
技术研发人员：贾鳗，唐蜀昆，谢吉林，卢开阳，高林瑞，职晓阳，丁章贵，
申请(专利权)人：勐海茶业有限责任公司，
类型：发明
国别省市：云南,53