一种增强型小分子抗体的构建及应用制造技术

本发明专利技术涉及生物医药技术领域，本发明专利技术具体涉及一种增强型小分子抗体的构建及应用。本发明专利技术可以提高小分子抗体功能。本发明专利技术的一种增强型小分子抗体在临床疾病上的应用具有更高的价值。

【技术实现步骤摘要】
一种增强型小分子抗体的构建及应用
本专利技术属于生物医药
，具体涉及一种增强型小分子抗体构建和应用。
技术介绍
小型化、人源化、功能化是基因工程抗体药物的三大主要发展趋势。小分子抗体多为基因工程抗体是一种小型化抗体，分子量多在20～30kDa，仅为完整抗体分子的1/6。小分子抗体多用于临床上，是一种治疗性抗体药物。抗体分为天然抗体、多克隆抗体、单克隆抗体和基因工程抗体，抗体如IgG抗体分子是有两条V区和C区组成。在用基因工程技术构建小分子抗体时，将面临着工程化改造的抗体C区片段的问题。虽抗体V区决定了主要功效作用，但其C区通过在体内对分子结构的影响，发挥抗体依赖的细胞毒性作用(ADCC)和补体依赖的细胞发挥抗体依赖的细胞毒性作用(CDC)，也同时对基因工程抗体在体内的药效学、药动学和毒理性有影响作用。小分子抗体和抗体衍生物可以分为含有抗体Fc和不含有抗体Fc。含有抗体Fc具有较好的半衰期和稳定性，Fc介导抗体的补体依赖性细胞作用。目前，小分子抗体药物种类比较多，主要包括：鼠源单抗、人－鼠嵌合抗体、人源化单抗、全人源单抗，其鼠源性蛋白质的成分从100％下降为33％乃至0％。小分子人－鼠嵌合抗体的出现使得抗体的人源化程度达到66％，临床应用会产生人抗鼠抗体(humananti-mouseantibody,HAMA)。确定了HAMA反应中最主要的免疫原性成分来自鼠源抗体的C区，约有90％抗抗体是针对抗体的C区部分的。最佳的人源化抗体不仅含有鼠源性抗体特异性抗原结合强度所需的最少的氨基酸数量(总量的5％－10％)，还具有人免疫系统的能力。有些治疗性抗体是来源于基因工程抗体，尤其是小分子抗体包括单链抗体、单域抗体、单区抗体、单价抗体、单链抗体、单特异抗体、多价抗体、多特异抗体、Fab抗体、Fc抗体、Fv抗体、超变区多肽、双特异性抗体或双功能抗体、双链抗体、三链抗体、三功能抗体、抗体融合蛋白、催化抗体、重组特异性抗体、微型抗体、纳米抗体等等，其抗体结构中不含有抗体Fc段，缺乏抗体Fc段介导的长循环效应则半衰期端和稳定性较差。小分子抗体在体内的血浆半衰期短，结构不稳定。小分子抗体也失去抗体的补体依赖性细胞毒性作用。在临床应用中，小分子抗体和抗体衍生物已广泛应用于抗恶性肿瘤或癌症治疗、免疫性疾病、器官移植和炎症性疾病的治疗。小分子抗体的特点：(1)分子量小、易于滲入组织，但半衰期短、易于清除；(2)不与Fc受体阳性细胞结合，靶向性好、具有免疫原性低，但抗体的补体依赖的细胞毒性功能丧失；(3)基因工程操作简单，易于在原核细胞表达，生产成本低。因此，如何延长小分子抗体和抗体衍生物在体内半衰期和稳定性，如何更好地发挥小分子抗体和抗体衍生物在体内治疗作用，是小分子抗体和抗体衍生物作为药物在临床治疗中必须要解决的问题。鱼精蛋白是一种存在于各种动物精巢组织中的碱性蛋白质，它是以与DNA结合的核精蛋白形式存在。目前已经从鲑鱼、鲱鱼等多种鱼类及其它水生动物中提取到鱼精蛋白。鱼精蛋白是一种富含精氨酸的、多聚阳离子的碱性蛋白质，其等电点在pH12.0～12.4。溶于水和烯酸，不易溶于乙醇、丙酮等有机溶剂，稳定性好，加热不凝固，分为单鱼精蛋白、双鱼精蛋白和三鱼精蛋白3种，不同鱼种鱼精蛋白在氨基酸组成比例上有很大的差别，但是它们存在很多相似的特征。鱼精蛋白主要在鱼类(如鲑鱼、鳟鱼、鲱鱼等)成熟精子细胞核中作为和DNA结合的核精蛋白存在，这种结合使负电荷沿着DNA的磷酸二酯骨架起中和作用，使相邻的DNA分子紧密结合在一起。在哺乳动物中发现的两种鱼精蛋白P1和P2是最广泛研究的。P1包装精子DNA在所有哺乳动物中，而鱼精蛋白P2只存在于灵长类动物和啮齿动物的精子。鱼精蛋白主要生物学作用：(1)促进细胞繁殖和发育；(2)增效肝功能；(3)抑制肿瘤生长；(4)通过激活补体经典途径，通过特异性抗体与细胞膜表面相应抗原结合，发挥补体依赖的细胞毒性，所形成的攻膜复合物对靶细胞(如肿瘤细胞)发挥裂解效应。鱼精蛋白在中性和碱性介质中显示出很强的抑菌能力，并有较高的热稳定性，在210℃条件下，加热1小时仍具有活性，同时抑菌范围和食品防腐范围均较广，它对枯草杆菌、芽孢杆菌、干酪乳杆菌、胚芽乳杆菌、乳酸菌、霉菌、芽抱耐热菌和革兰氏阳性菌等均有较强的抑制作用，但对革兰氏阴性菌抑制效果不明显。鱼精蛋白是激动剂，通过Ca2+SensingReceptor(CaR)介导细胞内Ca2+的增加，增加T细胞活性。更重要的是，鱼精蛋白是市售的，已作为一种临床治疗性药物，目前的不足之处：(1)应用治疗范围非常有限；(2)剂量使用不当时，易引起不良反应。鱼精蛋白只用作用于中和肝素的抗凝活性(例如，体外循环术后)，胰岛素可用于治疗糖尿病，为了延长胰岛素在体内的持续时间，可使用与鱼精蛋白结合的鱼精蛋白胰岛素，鱼精蛋白是胰岛素的稳定剂。未发现鱼精蛋白用于与治疗性抗体融合和联合应用，也未发现用于针对免疫系统的治疗上。
技术实现思路
为进一步优化小分子抗体的功能，需要一种能提高小分子抗体的增效剂。本专利技术：鱼精蛋白就是一种具有提高小分子抗体功能的增效成分，这种增效功能成分或分子，一方面能使小分子抗体在体内半衰期延长，对小分子抗体起到稳定作用，另一方面通过介导补体依赖的细胞毒性的生物学功能，增效小分子抗体的生物学功能。具体内容：一种增强型小分子抗体，包括以下组分：抗体、鱼精蛋白。所述的抗体，所述的抗体包括：人抗体。所述的抗体，所述的抗体包括：治疗性抗体、药物性抗体、抗体药物、或其抗原结合的抗体部分或抗体片段。任选一种。所述的鱼精蛋白，所述的鱼精蛋白包括：人鱼精蛋白。所述的鱼精蛋白，所述的鱼精蛋白包括：鱼精蛋白1、鱼精蛋白2、鱼精蛋白3。任选一种。所述的小分子抗体还包括基因工程抗体、天然抗体、多克隆抗体、单克隆抗体，任选一种。任选地，所述基因工程抗体、天然抗体、多克隆抗体、单克隆抗体。任选一种。所述的增强型小分子抗体，鼠抗体人源化，包括人-鼠嵌合抗体、改型抗体或人源化抗体或重构型抗体或CDR移植抗体；小分子抗体，包括单链抗体、单域抗体、单区抗体、单价抗体、单链抗体、单特异抗体、多价抗体、多特异抗体、Fab抗体、Fc抗体、Fv抗体、超变区多肽、双特异性抗体或双功能抗体、双链抗体、三链抗体、三功能抗体、抗体融合蛋白、催化抗体、重组特异性抗体、微型抗体、纳米抗体，任选一种。所述的鱼精蛋白，所述的鱼精蛋白，鱼精蛋白1、鱼精蛋白2、鱼精蛋白3。所述鱼精蛋白具有如下特征中的一个或多个：(1)SEQIDNo.1，鱼精蛋白1包括氨基酸序列如所示的SEQIDNo.1人鱼精蛋白1的氨基酸序列(51aa)；(2)SEQIDNo.2，鱼精蛋白1包括氨基酸序列如所示的SEQIDNo.2人鱼精蛋白1的N-端氨基酸序列；(3)SEQIDNo.3，鱼精蛋白1包括氨基酸序列如所示的SEQIDNo.3人鱼精蛋白1的C-端氨基酸序列；(4)SEQIDNo.4，鱼精蛋白2包括氨基酸序列如所示的SEQIDNo.4人鱼精蛋白2的氨基酸序列(102aa)；(5)SEQIDNo.5，鱼精蛋白2包括氨基酸序列如所示的SEQIDNo.5人鱼精蛋白2的N-端氨基酸序列；(6)SEQIDNo.6，鱼精蛋白2包括氨基酸序列如所示的SEQIDNo本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种增强型小分子抗体，包括以下组分：小分子抗体、鱼精蛋白组。

【技术特征摘要】
1.一种增强型小分子抗体，包括以下组分：小分子抗体、鱼精蛋白组。2.根据权利要求1所述的增强型小分子抗体，其特征在于，小分子抗体包括单链抗体、单域抗体、单区抗体、单价抗体、单链抗体、单特异抗体、多价抗体、多特异抗体、Fab抗体、Fc抗体、Fv抗体、超变区多肽、双特异性抗体或双功能抗体、双链抗体、三链抗体、三功能抗体、抗体融合蛋白、催化抗体、重组特异性抗体、微型抗体、纳米抗体中的任意一种。3.根据权利要求1所述的鱼精蛋白氨基酸序列，所述的鱼精蛋白氨基酸序列，其特征在于，包括鱼精蛋白1氨基酸序列、鱼精蛋白2氨基酸序列、鱼精蛋白3氨基酸序列，所述鱼精蛋白氨基酸序列具有如下特征中的一个或多个：(1)SEQIDNo.1，鱼精蛋白1包括氨基酸序列如所示的SEQIDNo.1人鱼精蛋白1的氨基酸序列(51aa)；(2)SEQIDNo.2，鱼精蛋白1包括氨基酸序列如所示的SEQIDNo.2人鱼精蛋白1的N-端氨基酸序列；(3)SEQIDNo.3，鱼精蛋白1包括氨基酸序列如所示的SEQIDNo.3人鱼精蛋白1的C-端氨基酸序列；(4)SEQIDNo.4，鱼精蛋白2包括氨基酸序列如所示的SEQIDNo.4人鱼精蛋白2的氨基酸序列(102aa)；(5)SEQIDNo.5，鱼精蛋白2包括氨基酸序列如所示的SEQIDNo.5人鱼精蛋白2的N-端氨基酸序列；(6)SEQIDNo.6，鱼精蛋白2包括氨基酸序列如所示的SEQIDNo.6人鱼精蛋白2的C-端氨基酸序列；(7)SEQIDNo.7，鱼精蛋白2包括氨基酸序列如所示的SEQIDNo.7鱼精蛋白2的分泌肽氨基酸序列；(8)SEQIDNo.8，鱼精蛋白2包括氨基酸序列如所示的SEQIDNo.8鱼精蛋白2成熟氨基酸序列；(9)SEQIDNo.9，鱼精蛋白2包括氨基酸序列如所示的SEQIDNo.鱼9精蛋白2的前体氨基酸序列；(10)SEQIDNo.10，鱼精蛋白3包括氨基酸序列如所示的SEQIDNo.19人鱼精蛋白3氨基酸序列(103aa)；(11)SEQIDNo.11，鱼精蛋白3包括氨基酸序列如所示的SEQIDNo.11人鱼精蛋白3的N-端氨基酸序列；(12)SEQIDNo.12，鱼精蛋白3包括氨基酸序列如所示的SEQIDNo.12人鱼精蛋白3的C-端氨基酸序列。4.根据权利要求3所述的增强型小分子抗体，其特征在于，所述的鱼精蛋白氨基酸序列SEQIDNo.1-12中任一所示的氨基酸序列与具有80％或80％以上同源性、且具有所限定的氨基酸序列功能的氨基酸序列或多肽序列。5.根据权利要求3所述的增强型小分子抗体，所述的增强型小分子抗体是小分子抗体的抗体与鱼精蛋白或鱼精蛋白片段或鱼精蛋白多肽结合形成的一种融合蛋白质，其特征在于，融合蛋白质的抗体部分的融合或结合形式包括以下：Fab与鱼精蛋白或鱼精蛋白片段或鱼精蛋白多肽、Fc与鱼精蛋白或鱼精蛋白片段或鱼精蛋白多肽、VH包括超变区第31～37、第51～68、第84～91、第1...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘东旭，
申请(专利权)人：武汉原生药谷生物医药科技有限公司，
类型：发明
国别省市：湖北,42