The invention provides an electron microscopic diagnosis method for in situ isolation and fixation of tobacco fragile virus granules, including sampling, filament cutting and fixation, negative staining, and electron microscopic observation. The whole process only takes ten minutes, which is fast, accurate and efficient.
【技术实现步骤摘要】
一种烟草脆裂病毒粒体原位分离固定电子显微镜诊断方法
本专利技术属于植物保护领域，进一步属于植物病毒的鉴定与检测，具体涉及一种烟草脆裂病毒粒体的原位分离固定电子显微镜诊断方法。
技术介绍
烟草脆裂病毒（Tobaccorattlevirus,TRV）是烟草脆裂病毒属（Tobravirus）的典型成员，是马铃薯的重要病毒病原之一，在烟草上的病害于1898年由Behrens记述，病毒于1943年由Quanjer记述。TRV在自然条件下主要通过线虫和菟丝子传播，寄主范围广，可侵染60科400多种双子叶和单子叶植物。TRV在欧洲、北美、前苏联、日本和新西兰马铃薯产区广泛发生分布，侵染马铃薯引起块茎坏死弧茎斑驳和花芽黄斑，在北欧的挪威引起产量的严重损失，并引起块茎质量下降。中国国马铃薯生产中种苗与种薯感染TRV普遍，但对其引起的马铃薯病害与产量损失研究较少。TRV是双组分的单链正义RNA病毒，RNA分别包被与长、短两种粒体中。TRV病毒粒体为杆状，已报道的直径为20～23nm，长的病毒粒体长度为180～215nm，短的病毒粒体长度为46～115nm。TRV在马铃薯生产上以种苗、...
【技术保护点】
1.一种烟草脆裂病毒粒体原位分离固定电子显微镜诊断方法，其特征在于，包括如下步骤：（1）取1mm×2mm×6mm大小的感病组织；（2）将所述感病组织用徒手切片法切成细丝；（3） 加入固定液固定2~3min；（4）将覆盖有Formvar膜和碳膜的铜网膜面朝下吸附样品浸出液1~3 min，然后用滤纸沿铜网边缘吸附，膜面朝上放置1 min；（5）将染液滴于疏水膜上，再将所述铜网面朝下置于染液染色1~3 min，然后用滤纸沿铜网边缘吸附，膜面朝上放置1 min；（6）透射电镜上样、观察和拍照；（7）根据病毒粒体的分布与聚集特征进行判断。
【技术特征摘要】
1.一种烟草脆裂病毒粒体原位分离固定电子显微镜诊断方法，其特征在于，包括如下步骤：（1）取1mm×2mm×6mm大小的感病组织；（2）将所述感病组织用徒手切片法切成细丝；（3）加入固定液固定2~3min；（4）将覆盖有Formvar膜和碳膜的铜网膜面朝下吸附样品浸出液1~3min，然后用滤纸沿铜网边缘吸附，膜面朝上放置1min；（5）将染液滴于疏水膜上，再将所述铜网面朝下置于染液染色1~3min，然后用滤纸沿铜网边缘吸附，膜面朝上放置1min；（6）透射电镜上样、观察和拍照；（7）根据病毒粒体的分布与聚集特征进行判断。2.根据权利要求1所述烟草脆裂病毒粒体原位分离固定电子显微镜诊断方法，其特征在于，所述感病组织为叶片、茎或块茎。3.根据权利要求1所述烟草脆裂病毒粒体原位分离固定电子显微镜诊断方法，其特征在于，步骤（2）所述细丝直径为0.01~0.03mm。4.根据权利要求1所述烟草脆裂病毒粒体原位分离固定电子显微镜诊断方法，其特征在于，所述固定液为2.5%戊二醛，用量为0.2mL。5.根据权利要求1所述烟草脆裂病毒粒体原位分离固定电子显微...
【专利技术属性】
技术研发人员：张仲凯，方琦，张丽珍，
申请(专利权)人：云南省农业科学院生物技术与种质资源研究所，
类型：发明
国别省市：云南,53
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