一类特殊的异甾体生物碱及其衍生物的制备方法技术

本发明专利技术公开了一类特殊的异甾体生物碱及其衍生物的制备方法，包括首先用从湖北贝母粗粉中直接提取分离或者由湖贝甲素合成异甾体生物碱，然后进一步制备相应的衍生物。本发明专利技术的异甾体生物碱及其衍生物具有抗肿瘤活性，具有一定的应用前景。

【技术实现步骤摘要】
一类特殊的异甾体生物碱及其衍生物的制备方法
本专利技术设计药物化学领域，具体涉及一类特殊的异甾体生物碱及其衍生物的制备方法。
技术介绍
由于人口老龄化，环境污染，社会精神压力大，不健康的生活方式等因素，造成我国的恶性肿瘤发病率居高不下。据国家癌症中心发布的2017年的中国肿瘤的现状和趋势报告显示：目前中国肿瘤发病率居前五位的依次为：肺癌、胃癌、肝癌、食道癌和结直肠癌。肺癌、乳腺癌分别居中国男性、女性发病首位。因此癌症正在严重威胁到世界人民和中国人民的健康。湖北贝母中主要活性部分是生物碱，近几年对于其逆转癌细胞多药耐药，抗胆碱活性，胆碱酯酶抑制活性等相关研究较多，但抗肿瘤方面研究较少。先前的研究发现部分异甾体生物碱具有抗肿瘤的活性，如贝母素甲可抑制MCF-7/TAM(耐三苯氧胺人乳腺癌细胞)及AML-KG-1a(急性髓系白血病细胞)的增殖，并可诱导其凋亡。但是其活性均较低，在我们对湖北贝母的研究过程中发现了一类特殊的D/E环顺式的瑟文型异甾体生物碱成分，这类成分具有特征的C-5、C-6双键结构，它们具有明显的抗肿瘤活性，对此我们展开了研究，以其获取更多更有效的治疗肿瘤的活性物质，为临床应用提供更多有效的抗肿瘤药物。
技术实现思路
本专利技术的目在于提供一类具有抗肿瘤活性同时含有特征的C-5、C-6双键结构、特殊的D/E环顺式的瑟文型异甾体生物碱及其衍生物的制备方法。本专利技术的技术方案如下：如式I所示异甾体生物碱的制备方法，包括如下步骤：湖北贝母粗粉用溶剂提取，减压浓缩得到总浸膏，总浸膏用酸水分散后静置，上清液调节pH至大于9，用有机溶剂萃取得到萃取物，萃取物经过分离得到所述的化合物式I化合物。本专利技术还提供另一种制备式I化合物的方法，包括如下步骤：1)湖贝甲素(hupehenine)的3位羟基用硅基保护得到化合物2；2)化合物2脱水得到化合物3；3)化合物3脱保护得式I化合物作为优选，步骤1)包括：在有机碱和4-二甲氨基吡啶存在下，湖贝甲素(hupehenine)与硅基化试剂反应，得到化合物2，所述硅基化试剂选自：叔丁基二甲基氯硅烷、三异丙基氯硅烷、三乙基氯硅烷或叔丁基二苯基氯硅烷。作为优选，步骤3)包括在盐酸、氢氟酸，吡啶氢氟酸盐、四丁基氟化铵或氟化铯的存在下脱保护得式I化合物。作为优选，步骤2)包括将化合物2和4-二甲氨基吡啶溶于干燥吡啶中与三氯氧磷反应得到化合物3。本专利技术还提供式II化合物的制备方法，包括如下步骤：式I化合物与羧酸、酸酐或酰氯反应生成式II化合物，其中，R1选自：-C(O)R2或-S(O)2R3；R2选自C1-C6烷基或任选被一个或多个R4取代如下基团：C5-C10杂芳基或C6-C10芳基；R3选自C1-C6烷基或任选被一个或多个R4取代的C6-C10芳基；R4选自C1-C6烷基或卤素。作为优选，R2选自C1-C6烷基、C5-C10杂芳基或任选被一个或多个R4取代的C6-C10芳基。作为优选，R3选自任选被一个或多个R4取代的C6-C10芳基；更选优被C1-C6烷基或卤素取代的苯基。本专利技术还提供式III化合物的制备方法，包括如下步骤：式I化合物与二氯亚砜发生取代反应得到式II化合物；本专利技术还提供式V化合物的制备方法，包括如下步骤：式I化合物与对甲苯磺酰氯反应生成式IV化合物，式IV化合物与叔丁醇钾反应生成式V化合物；术语定义和解释：除非另有说明，本申请说明书和权利要求书中记载的基团和术语定义，包括其作为实例的定义、示例性的定义、优选的定义、表格中记载的定义、实施例中具体化合物的定义等，可以彼此之间任意组合和结合。这样的组合和结合后的基团定义及化合物结构，应当属于本申请说明书记载的范围内。术语“C1-C6”应理解为优选表示具有1-6个碳原子的直连或支链饱和一价烃基，例如甲基、乙基、丙基、丁基、戊基、己基、异丙基、异丁基、仲丁基、叔丁基、异戊基、2-甲基丁基、1-甲基丁基、1-乙基丙基、1,2-二甲基丙基、新戊基、1,1-二甲基丙基、4-甲基戊基、3-甲基戊基、2-甲基戊基、1-甲基戊基、2-乙基丁基、1-乙基丁基、3,3-二甲基丁基、2,2-二甲基丁基、1,1-二甲基丁基、2,3-二甲基丁基、1,3-二甲基丁基或1,2-二甲基丁基等或它们的异构体。术语“C6-C10芳基”是指含有6至10个碳原子的衍生至芳烃的基团。此类基团的实例包括但不限于苯基、苄基、萘基。术语“C5-C10杂芳基”是指在其环中含有5至10个碳原子并含有1至4个各自独立地选自O、S和N的杂原子的芳族杂环基团。条件是所述基团的环上不含两个相邻的O原子或两个相邻的S原子。该杂环基团包括苯并稠环体系。C5-C10杂芳基的实例包括但不限于吡啶基、咪唑基、呋喃基、嘧啶基、吡唑基、三唑基、吡嗪基、四唑基、呋喃基、噻吩基、噁唑基、异噁唑基、噻唑基、异噻唑基、吡咯基、喹啉基、异喹啉基、吲哚基、苯并咪唑基、苯并呋喃基、二氮杂萘基、异吲哚基、嘌呤基、苯并噻吩基、苯并噻唑基。具体实施方式实施例1：CW-1的制备1)将干燥的湖北贝母(FritillariahupehensisHsiaoetK.C.)打成粗粉后，80％乙醇加热回流提取2次，每次3h。将两次的提取液合并后减压浓缩，得到总浸膏；2)向总浸膏中先加入3％的盐酸溶液使其酸化，充分搅拌后静置，取上清液，氨水碱化至pH值大于9。用水饱和后的石油醚(10L×3)，石油醚/醋酸乙酯(1:1，10L×3)以及醋酸乙酯(10L×3)对碱液依次分段萃取；3)水饱和的石油醚萃取部分的生物碱，以环己烷/醋酸乙酯/二乙胺通过正相硅胶色谱柱反复分离纯化得到CW-1(湖贝丙素)。湖贝丙素氢碳谱数据：实施例2：CW-2的制备称取CW-1(200mg,0.5mmol)于10ml圆底烧瓶，向其中加入CH2Cl2(5ml)作溶剂，再加入三乙胺(140μL,1mmol),醋酐(66μL,0.7mmol)，4-二甲氨基吡啶(DMAP,12mg,0.1mmol)，该反应在室温下搅拌5h。TCL监测反应完全后，向反应液中加水淬灭反应。反应液加H2O2和CH2Cl2(1:1)进行萃取(2次)，合并CH2Cl2层，用1:1的NaHCO3洗两遍，再用水洗两遍，最后用无水硫酸钠干燥，过滤，减压蒸馏得到粗产品。硅胶柱色谱分离，洗脱机比例为石油醚：丙酮＝6:1，同时在洗脱剂中加入1‰的三乙胺，最终得到产物200.7mg，产率91％。ESI-MS,m/z:440.20[M+H]+实施例3：CW-3的制备称取CW-1(200mg,0.5mmol)于10ml圆底烧瓶，向其中加入无水CH2Cl2(5ml)作溶剂，再加入正丁酸(91μL,1mmol)，0℃下加入1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺盐酸盐(EDCI,575mg,3mmol)，最后加入4-二甲氨基吡啶(DMAP,12mg,0.1mmol)。反应溶液在氮气的保护下，室温下反应2h。TCL监测反应完全后，加10％的NaHCO3溶液搅拌淬灭反应。反应液加H2O2和CH2Cl2(1:1)进行萃取(2次)，合并CH2Cl2层，用1:1的饱和NaCl2洗两遍，再用H2O2洗两遍，最后用无水硫酸钠干燥，过滤，减压蒸馏得到粗产品。硅胶柱色谱分离，洗脱机比例为石油醚：丙酮＝6:1，同时在洗脱剂中本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.如式I所示异甾体生物碱的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：

【技术特征摘要】
1.如式I所示异甾体生物碱的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：湖北贝母粗粉用溶剂提取，减压浓缩得到总浸膏，总浸膏用酸水分散后静置，上清液调节pH至大于9，用有机溶剂萃取得到萃取物，萃取物经过分离得到所述的化合物式I化合物。2.一种制备式I化合物的方法，其特征在于，包括如下步骤：1)湖贝甲素(hupehenine)的3位羟基用硅基保护得到化合物2；2)化合物2脱水得到化合物3；3)化合物3脱保护得式I化合物3.如权利要求2所述方法，其特征在于，步骤1)包括：在有机碱和4-二甲氨基吡啶存在下，湖贝甲素(hupehenine)与硅基化试剂反应，得到化合物2，所述硅基化试剂选自：叔丁基二甲基氯硅烷、三异丙基氯硅烷、三乙基氯硅烷或叔丁基二苯基氯硅烷。4.如权利要求3所述方法，其特征在于，步骤3)包括在盐酸、氢氟酸、吡啶氢氟酸盐、四丁基氟化铵或氟化铯的存在下脱保护得式I化合物。5.如权利要求2或3所述方法，其特征在于，步骤2)包括将化合物2和4-二甲氨基吡啶溶...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈东林，李燕君，王建忠，刘小宇，邹娇，
申请(专利权)人：四川大学，
类型：发明
国别省市：四川,51