一种华泽兰中苯并呋喃类化合物的制备方法及用途技术

本发明专利技术提供一种华泽兰中苯并呋喃类化合物的制备方法，以植物华泽兰的根为原料，经水/醇溶剂系统提取后，再经有机溶剂萃取，经进一步层析分离，可富集得到苯并呋喃类化合物有效部位及各单体化合物。将该有效部位/单体化合物通过医学上可接受的添加药用辅料，制成固体制剂和液体制剂。该类化合物经药理活性研究发现，可以促进人肌肉细胞C2C12对葡萄糖的转运，且在RAW264.7细胞模型上可明显抑制LPS诱导的NO生成，表明该类化合物在抗糖尿病及抗炎药物研制上具有较好的应用前景，可在制备治疗糖尿病及各种炎症药物中的应用。

【技术实现步骤摘要】
一种华泽兰中苯并呋喃类化合物的制备方法及用途
本专利技术属医药
，具体涉及一种中药材华泽兰提取物及其中苯并呋喃类化合物的制备以及该提取物及其中的化合物在糖尿病及抗炎药物中的应用。
技术介绍
华泽兰(Eupatoriumchinense)为菊科(Compositae)泽兰属(Eupatorium)植物，多年生草本或半灌木，常生长于山谷、林缘、草地或灌木丛中，主要分布于中国东南部至西南部各省。其干燥根，又名广东土牛膝、多须公、斑骨相思等。具有清热解毒、凉血利咽、抗炎镇痛的功效，主治白喉、蛾喉、咽喉肿痛等症，有“喉科圣药”之称，对喉部疾病疗效显著，民间使用极为广泛。在广东，民间用华泽兰治疗扁桃体炎、咽喉炎等，疗效显著[梅全喜，吴惠妃.广东土牛膝的药用历史及现代研究概况.中医药学刊，2005,23(11),1995-1997.]；在江浙一带，民间用华泽兰根切成饮片泡茶，可以有效控制血糖升高。目前，国内外对其化学成分及生物活性有过一些研究，发现其中的化学成分种类较多，有萜类化合物、苯并呋喃类化合物、酚酸类化合物、黄酮类化合物、甾体类化合物等[廖彭莹,张颖君,王一飞,王东,杨崇仁.广东土牛膝的化学成分.植物分类与资源学报,2010,32(2):183-188.]，对其抗菌、抗病毒方面也有一些报道[WangWJ,WangL,LiuZ,etal.AntiviralbenzofuransfromEupatoriumchinense.Phytochemistry,2015,122(1):238-245.；刘梦元,虞丽娟,李燕慈,田珂,李路军,吴正治.华泽兰根的化学成分及其体外抑菌活性研究.天然产物研究与开发,2015(11):1905-1909.]，但对华泽兰抗炎及抗糖尿病相关的物质基础缺乏研究。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种华泽兰中苯并呋喃类化合物的制备方法，所述华泽兰中苯并呋喃类化合物包括有效部位及其中单体化合物，通过以下制备方法获得：将华泽兰的根制成饮片或适当粉碎后，以8-16倍量水/醇溶剂系统提取2～3次，提取液经减压浓缩得浸膏，将此浸膏上反相柱层析，或用适量水将此浸膏混悬分散，继以有机溶剂萃取，浓缩得浸膏后再经反相层析，可获得含有苯并呋喃类化合物的有效部位；该部位经进一步正/反相层析后可获得各单体化合物。具体通过以下步骤实现：1.将华泽兰根切成饮片或粉碎成粗粉，以8～16倍量水/醇系统提取2～3次，所述的醇选择甲醇或乙醇，其中甲(乙)醇的浓度为50～100％，优选70％；提取方式采用加热回流或渗漉；所述的水/醇溶剂系统指甲醇或乙醇的水溶液，甲(乙)醇的含量为50～100％，优选70％。2.将提取液合并后减压浓缩，除去甲醇或乙醇得到浸膏，浸膏拌样后上反相柱层析，或用适量水将此浸膏混悬分散，继以有机溶剂萃取，浓缩得浸膏后再经反相层析，以水/醇系统洗脱后可获得含有苯并呋喃类化合物的有效部位；采用的反相层析包括大孔树脂吸附层析、MCI层析以及C18、C8、C4反相硅胶层析，其中大孔树脂选择DM301、NKA-9型、AB-8、D101、DM130、DM-18、D312、DA-201、HPD-100、HPD-300、HPD-400、HPD-500、HPD-600型弱极性或中极性大孔树脂。所述的有机溶剂选自石油醚、己烷、二氯甲烷、三氯甲烷、乙醚、乙酸乙酯、正丁醇的一种或几种。3.获得的有效部位经进一步正/反相层析后可获得苯并呋喃类化合物单体，其中正相层析采用硅胶柱层析，流动相系统采用石油醚(己烷)：乙酸乙酯(丙酮)体系，采用梯度洗脱，梯度范围为100:1→0:1；优选80:1→1:1；更优选30:1→5:1。反相层析选用大孔树脂吸附层析或MCI层析，或C18、C8、C4反相硅胶层析，溶剂系统采用水：甲醇(乙醇)体系，以水/甲(乙)醇为流动相梯度洗脱，梯度范围为90:10→0:100；优选70:30→10:90。最终获得20个苯并呋喃类化合物，其中3个化合物(2,5,10)具有促进人肌肉细胞C2C12对葡萄糖的转运作用，3个化合物(3,4,6)在RAW264.7细胞模型上具有抑制LPS诱导的NO生成作用，4个化合物(1,7,8,9)兼具二种活性，化合物2、5、7、8、9、10为新化合物。10个活性单体化合物的结构如下：本专利技术的另一个目的是提供华泽兰中苯并呋喃类化合物有效部位及各单体化合物在制备治疗糖尿病及各种炎症药物中的应用。具有促进人肌肉细胞C2C12对葡萄糖的转运作用，提示临床上可用于糖尿病的治疗。所述的华泽兰提取物及多个苯并呋喃单体，在RAW264.7细胞模型上具有抑制LPS诱导的NO生成作用，提示临床上可用于炎症的治疗。所述有效部位及单体化合物可以加入药剂学允许的赋形剂制备成药物制剂，制剂形式包括片剂、胶囊剂、丸剂、颗粒剂、喷雾剂、气雾剂、以及注射剂。本专利技术的有益之处是：(1)本专利技术对原料药材中的有效成分进行了充分的提炼、浓缩，得到的苯并呋喃类化合物有效部位仅占药材重量的1.5％左右，大大优于用原药材煎煮或者用粗提物入药，便于制成各种制剂。(2)用本专利技术方法获得的有效部位及多个苯并呋喃类化合物，具有显著的药理作用，可促进人肌肉细胞C2C12对葡萄糖的转运作用，并在RAW264.7细胞模型上具有抑制LPS诱导的NO生成作用。(3)本专利技术阐明了华泽兰具有抗糖尿病/抗炎的物质基础，为进一步开发新药奠定了坚实的理论基础。具体实施方式本专利技术结合具体实施例作进一步说明。实施例1华泽兰苯并呋喃类化合物有效部位的制备取华泽兰根200g左右粉碎，以50％乙醇1600ml回流提取2小时，过滤后滤渣再加50％乙醇1000ml回流1小时，合并两次滤液，减压回收乙醇，得到浸膏。将此浸膏拌样后，以DM301大孔树脂层析，经水洗、40％甲醇洗脱后，以80％甲醇洗脱，收集此部分洗脱液，浓缩成浸膏，得2.98g有效部位。实施例2华泽兰苯并呋喃类化合物有效部位的制备取华泽兰根200g左右粉碎，加95％乙醇渗漉提取一周，渗漉液合并后减压回收乙醇完全，得浸膏。将此浸膏以水混悬分散，水相以正己烷：乙酸乙酯1:1萃取三遍，萃取液浓缩得到浸膏，拌样后上AB-8大孔树脂，以水洗、30％乙醇洗脱3个柱体积后，再以90％乙醇洗脱至流出液近无色，收集此部分洗脱液，减压浓缩回收乙醇完全后喷雾干燥，得3.13g有效部位。实施例3华泽兰苯并呋喃类化合物有效部位的制备取华泽兰根200g左右粉碎，加2000ml甲醇，回流提取2小时，过滤后滤渣再加1000ml甲醇回流1小时，合并两次滤液，减压回收甲醇，得到浸膏。将此浸膏用200ml水混悬后以三氯甲烷萃取三遍，合并萃取液浓缩成浸膏，拌样后以NKA-9大孔树脂层析，经水洗、50％甲醇洗脱3个柱体积后，再以甲醇洗脱至流出液近无色，收集此部分洗脱液，减压浓缩回收甲醇完全后真空干燥，得3.16g有效部位。实施例4华泽兰苯并呋喃类化合物有效部位的制备取华泽兰根200g左右粉碎，加90％甲醇3200ml回流提取2次，提取液合并后减压回收甲醇完全，剩余水相以石油醚：乙醚1:1萃取三遍，合并萃取液浓缩成浸膏，拌样后以D312大孔树脂层析，经水洗、50％乙醇洗脱3个柱体积后，以无水乙醇洗脱至流出液近无色，收集此部分洗脱液，减压浓缩回本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种富含苯并呋喃类化合物的华泽兰提取物，其特征在于，通过以下制备方法获得：将华泽兰的根制成饮片或适当粉碎后，以8‑16倍量水/醇溶剂系统提取2～3次，提取液经减压浓缩得浸膏，将此浸膏上反相柱层析，或用水将此浸膏混悬分散，继以有机溶剂萃取，浓缩得浸膏后再经反相层析，获得含有苯并呋喃类化合物的有效部位；该部位经进一步正/反相层析后获得10个单体化合物。

【技术特征摘要】
1.一种富含苯并呋喃类化合物的华泽兰提取物，其特征在于，通过以下制备方法获得：将华泽兰的根制成饮片或适当粉碎后，以8-16倍量水/醇溶剂系统提取2～3次，提取液经减压浓缩得浸膏，将此浸膏上反相柱层析，或用水将此浸膏混悬分散，继以有机溶剂萃取，浓缩得浸膏后再经反相层析，获得含有苯并呋喃类化合物的有效部位；该部位经进一步正/反相层析后获得10个单体化合物。2.根据权利要求1所述的一种富含苯并呋喃类化合物的华泽兰提取物，其特征在于，具体通过以下步骤实现：(1)将华泽兰根切成饮片或粉碎成粗粉，以8～16倍量水/醇系统提取2～3次，所述的醇选择甲醇或乙醇，其中甲或乙醇的浓度为50～100％；提取方式采用加热回流或渗漉；(2)将提取液合并后减压浓缩，除去甲醇或乙醇得到浸膏，浸膏拌样后上反相柱层析，或用水将此浸膏混悬分散，继以有机溶剂萃取，浓缩得浸膏后再经反相层析，以水/醇系统洗脱后获得含有苯并呋喃类化合物的有效部位；(3)获得的有效部位再经正/反相层析，其中正相层析采用硅胶柱层析，流动相系统采用石油醚或己烷：乙酸乙酯或丙酮体系，采用梯度洗脱，梯度范围为100:1→0:1；反相层析选用大孔树脂吸附层析或MCI层析，或C18、C8、C4反相硅胶层析，溶剂系统采用水：甲醇或乙醇体系，以水/甲或乙醇为流动相梯度洗脱，梯度范围为90:10→0:100；最终获得10个苯并呋喃类化合物单体，10个活性单体化合物的结构如下：3.根据权利要求2所述的一种富含苯并呋喃类化合物的华泽兰提取物，其特征在于，步骤(1)所述的水/...

【专利技术属性】
技术研发人员：周长新，甘礼社，张丽莎，盛荣，吴昊姝，林理根，莫建霞，
申请(专利权)人：浙江大学，
类型：发明
国别省市：浙江,33