低氧诱导因子抑制剂的用途制造技术

本发明专利技术涉及用低氧诱导因子(HIF抑制剂)治疗血液癌症。本发明专利技术还涉及用HIF抑制剂诱导急性髓细胞白血病缓解。本发明专利技术还涉及用HIF抑制剂抑制癌症干细胞(CSC)的维持或存活功能。

【技术实现步骤摘要】
低氧诱导因子抑制剂的用途专利
本专利技术涉及治疗血液癌症(hematologiccancers)。专利技术背景据估计在2009年会报道12,800例急性髓细胞白血病(acutemyeloidleukemia,AML)的新病例，有9000例死亡。尽管通过化疗大多数病例可以实现完全缓解(remission)，但是很少见长期缓解或治愈。因此，现有技术对AML缓解后(AMLpostremission)的治疗有需要。然而缓解后白血病通常会对化疗更具抗性。这背后的原因包括多药物抗性蛋白Pgp1的表达，以及可能位于药物不能到达的骨髓区域。AML已被假定为与癌症干细胞(CSC)相关。这一设想得到如下支持：在AML细胞中表型可鉴别的CSC亚群、以及在体外集落形成单位(CFU)模型和异种移植模型二者的AML模型中对CSC进行测试的有效性。除AML之外许多人类癌症也含有CSC，其被认为是推动和维持肿瘤生长以及对治疗抗性的原因。因此了解CSC的自我更新机制不仅对于了解癌症发展的基础机制是关键的，其也提供了长效癌症治疗的新途径。与正常干细胞很相似，CSC的自我更新涉及两种相关的过程。首先，干细胞必须经过增殖以产生未分化的细胞。正常干细胞和癌症干细胞已知的自我更新途径(包括Wnt和Hedgehog)调节增殖，这至少部分是通过控制Bmi-1的表达，Bmi-1是正常干细胞和癌症干细胞增殖的关键调节物。其次，CSC在肿瘤发生期间必须以未分化状态存活。CSC的存活可能是造成治疗血液癌症(如AML)时的困难的原因。此类癌症尤其对于缓解后治疗更不具妥协性(intransigent)。因此，现有技术中需要另外的靶向于CSC的血液癌症疗法，包括治疗AML的疗法。本专利技术通过公开了一种用HIF抑制剂治疗血液癌症的方法而满足了这一需要。专利技术概述本文提供了原因治疗血液癌症的方法，其可包括将HIF抑制剂施用于对其有需要的哺乳动物。HIF抑制剂可以是棘霉素、2-甲氧基雌二醇、或格尔德霉素。棘霉素可以以非毒性剂量施用，其可以是1-100mcg/m2。棘霉素可以与Hedgehog途径抑制剂共同施用，所述Hedgehog途径抑制剂可以是环杷明(cyclopamine)。HIF抑制剂还可以与第二种癌症疗法共同施用。血液癌症可以是淋巴瘤或者白血病，其可以是急性髓细胞白血病。哺乳动物可以携带细胞遗传学改变，其可以是47,XY,+21；46,XY；45,XX,-7；46,XY,t(8；21)(q22；q22)；49,XX,+8,+8,inv(16)(p13.1q22),+21；46,XX,inv(16)(p13q22)/46,XX；46,XY,inv(16)(p13q22)；46,XX,t(2；13)(p23；q12)/46,XX；45,XY,inv(3)(q21q26.2),-7/46,XY；47,XY,+4,inv(5)(p15q13)/47,sl,-4,+22；46,XX,t(11；19)(q23；p13.1)；46,XX,t(6；11)(q27；q23)/46,XX；或46,XX,t(1；17)(p13；q25),t(9；11)(p22；q23)。哺乳动物可以携带CD38-CD34+表型的白血病细胞。患者可携带癌症干细胞，其可以是多药物抗性的、化疗抗性的或者放疗抗性的。本文还提供了用于诱导急性髓细胞白血病缓解的方法，其可以包括将棘霉素施用于对其有需要的患者。棘霉素可以以非毒性剂量施用，其可以是1-100mcg/m2。本文还提供了用于抑制癌症干细胞(CSC)的维持或存活功能的方法，其可包括将CSC与HIF抑制剂接触。附图简述图1.从自发小鼠淋巴瘤中分离CSC。a.分离自脾肿大TGB转基因小鼠(enlargedspleenTGBtransgenicmice)的淋巴瘤细胞，经BDFACSAria而分选为c-Kit+Sca-1+或c-Kit-Sca-1-部分。左图显示了肿瘤表型而右图显示了分选后纯度。b.肿瘤细胞的集落形成活性位于c-Kit+Sca-1+亚群内。将c-Kit+Sca-1+或c-Kit-Sca-1-部分(103/孔)铺板于1％甲基纤维素培养基，在培养7天后于显微镜下对集落数进行计数。所显示的数据是一式三份平板中集落数的平均值和SD，并且代表三个独立的实验。插图显示了典型集落的形态。c.来自接受了c-Kit+Sca-1+或c-Kit-Sca-1-肿瘤细胞的小鼠的脾的照片。d.产生自c-Kit+Sca-1+细胞的淋巴瘤的表型保守性和进化。用抗CD8和Vβ8的抗体对淋巴瘤细胞染色。左图显示了具有突出的高Vβ8+转基因CD8+细胞的经培养的淋巴瘤细胞；而右图显示了来自Rag-2-/-小鼠的脾的淋巴瘤细胞，所述小鼠接受了纯化自培养的淋巴瘤细胞的c-Kit+Sca-1+细胞。注意Vb8-群体的增加。右图中放大的双阴性群体是定居的脾细胞(residentspleencells)。图2.CSC的HIF成瘾(addiction)。a.淋巴瘤CFU经棘霉素的选择性消融(ablation)。用给定剂量的药理学有效药物在培养基中将培养的淋巴瘤细胞处理24小时。洗掉药物后，在1％甲基纤维素的培养基中培养细胞，在6-7天后对集落数进行计数。所显示的数据是三份重复的平均值和SD并且经3个独立的实验所证实。b.用于TGB淋巴瘤中HIF活性的报道系统。用于HIF活性的慢病毒构建体的图解在顶部显示。Pause,消除慢病毒启动子作用的序列片段；HRE，低氧应答元件；TATA，TATA序列(TATATAAT)(顶部)。左下，报道分子的确认。用编码突变体HIF1α(P402A/P577A)的cDNA或者载体对照与HRE驱动的EGFP报道分子或者HER突变体报道分子一起瞬时转染HEK293细胞。用流式细胞术分析细胞以检测转导后36小时的EGFP表达。右下，淋巴瘤CSC中的HIF活性，这是由WTHRE中GFP表达细胞和c-Kit的共表达而非突变体HRE慢病毒报道分子所揭示的(下部中间图)。c.棘霉素在抑制淋巴瘤CSC中的HIF1α活性时的IC50。将HRE报道系统所转染的淋巴瘤细胞在不同浓度的棘霉素存在下培养12小时，将c-Kit+GFP+细胞的％针对未处理组(1.13％,其被定义为100％)而进行标准化。导致c-Kit+GFP+细胞的50％减少的剂量被定义为IC50。d.相对于来自造血祖细胞的CFU，HIF抑制剂对于淋巴瘤CSC的CFU的选择性。将来自TGB或正常骨髓的c-Kit+Sca-1+细胞用给定浓度的棘霉素处理过夜，之后铺板于含有1％甲基纤维素的培养基以用于CFU测定。所显示的数据是未经处理对照的％，并且是三份重复的平均值+/-S.D。e.低剂量棘霉素的治疗效果。将培养的淋巴瘤细胞(1X106/小鼠)i.p.注射进免疫感受态B10.BR小鼠。14天后，以两天间隔注射10μg/Kg/注射的棘霉素，总共5次。对照小鼠仅接受载剂(vehicle)。每天观察小鼠存活。图3.在常氧条件下淋巴瘤CSC中的增加的HIF活性。a&b.基因表达。用BDFACSAria分选系统将培养的淋巴瘤细胞分选为c-Kit+Sca-1+或c-Kit-Sca-1-部分。通过RT-PCR来确定HIF1α、HI本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.棘霉素在制备用于在人类中治疗缓解后急性髓细胞白血病的药物组合物中的用途，其中所述棘霉素施用于需要其的人类。

【技术特征摘要】
2009.12.04 US 61/266,8561.棘霉素在制备用于在人类中治疗缓解后急性髓细胞白血病的药物组合物中的用途，其中所述棘霉素施用于需要其的人类。2.权利要求1的用途，其中所述人类携带细胞遗传学改变。3.权利要求2的用途，其中所述细胞遗传学改变选自由以下所组成的组：47,XY,+21；46,XY；45,XX,-7；46,XY,t(8；21)(q22；q22)；49,XX,+8,+8,inv(16)(p13.1q22),+21；46,XX,inv(16)(p13q22)/46,XX；46,XY,inv(16)(p13q22)；46,...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘阳，王寅，刘彦，萨迷·N·马勒可，郑盼，
申请(专利权)人：昂科免疫有限公司，
类型：发明
国别省市：美国,US