咖啡因作为醛糖还原酶抑制剂的用途制造技术

本发明专利技术公开了咖啡因作为醛糖还原酶抑制剂的用途，所述用途是以咖啡因作为活性成分之一或唯一活性成分用于制备醛糖还原酶抑制剂；用于制备预防或/和治疗糖尿病并发症的药物或保健食品。本发明专利技术在研究咖啡因的生物活性过程中，发现咖啡因对醛糖还原酶具有明显的抑制作用。糖尿病并发症与糖代谢的多元醇通路有关，醛糖还原酶是该通路的关键限速酶，由糖代谢的多元醇通路激活机制发现，醛糖还原酶抑制剂能有效抑制醛糖还原酶的活性，预防和延迟糖尿病并发症的发生和发展，通过抑制该酶活性可有效改善糖尿病并发症的特点，以发现有效的预防和/或治疗糖尿病并发症的天然药物。

【技术实现步骤摘要】
咖啡因作为醛糖还原酶抑制剂的用途
本专利技术涉及咖啡因应用
，具体涉及咖啡因在医疗领域的新用途。
技术介绍
醛糖还原酶属于醛酮还原酶超家族，是烟酰胺腺嘌呤二核苷磷酸(NADPH)为辅酶催化醛类或酮类物质还原为相应的醇的单体多肽。普遍存在于神经、血红细胞、晶状体、视网膜等动物体组织器官中，是多元醇通路的关键限速酶。NADPH与氧化应激关系密切，在糖尿病并发症和多种氧化应激性疾病的发生发展中发挥重要作用。目前抑制醛糖还原酶的药物主要分天然药物提取物和化学合成药物两类。化学合成药物副作用大，限制了其临床使用，迫切需要开发新的安全有效的醛糖还原酶抑制剂。天然药物因其更易获得，副作用小，成本更低，越来越受到人们的青睐，成为人们预防和治疗糖尿病并发症的优先选择。因此将醛糖还原酶作为一个药物靶点，筛选具有抑制醛糖还原酶活性的天然药物成为研究热点。咖啡因是一类黄嘌呤生物碱化合物。咖啡因具有预防阿尔茨海默病等神经疾病、扩张血管、保护肝损伤等生理功能，其已广泛用于食品、医药和化工等领域，尤其是可乐型及含咖啡因的能量型饮料行业。但关于咖啡因作为预防和/或治疗糖尿病并发症的药物的开发还没有相关文献报道。
技术实现思路
本专利技术旨在至少在一定程度上解决上述技术中的技术问题之一，即提供咖啡因在医药领域的新用途，以充分发挥咖啡因在医药领域中的价值。为此，本专利技术的一个目的在于提出咖啡因作为醛糖还原酶抑制剂的用途。为达到上述目的，本专利技术第一方面实施例提出了咖啡因作为醛糖还原酶抑制剂的用途，其以咖啡因作为活性成分之一或唯一活性成分用于制备醛糖还原酶抑制剂。根据本专利技术的咖啡因，在研究其生物活性过程中，发现咖啡因对醛糖还原酶具有明显的抑制作用，醛糖还原酶是多元醇通路的关键限速酶，而糖尿病并发症与糖代谢的多元醇通路有关,醛糖还原酶活性的增高是导致糖尿病慢性并发症的主要原因之一。通过抑制该酶活性可有效改善糖尿病并发症的特点，以发现有效的预防和/或治疗糖尿病并发症的天然药物。另外，根据本专利技术上述实施例提出的咖啡因作为醛糖还原酶抑制剂的用途，还可以具有如下附加的技术特征：根据本专利技术实施例，所述咖啡因对醛糖还原酶具有抑制作用。根据本专利技术实施例，所述咖啡因是从茶花粉中分离纯化而制得的。根据本专利技术实施例，所述咖啡因分离纯化包括以下步骤：S1、提取：取茶花粉，加入乙醇，于水浴中浸提，共提取3次，抽滤，合并滤液，并减压浓缩成浸膏，得粗提物；S2、萃取：粗提物加入蒸馏水，搅拌溶解，依次用石油醚、乙酸乙酯和正丁醇萃取，均萃取3次，而后将它们分别减压浓缩，得石油醚相、乙酸乙酯相及正丁醇相；S3、大孔吸附树脂层析：取乙酸乙酯相，加入蒸馏水复溶，振荡离心12min，取上清液加入大孔树脂中，大孔树脂置于摇床中吸附16h，将吸附后的大孔树脂装柱，使用不同浓度的乙醇水溶液进行洗脱，洗脱体积均为5个柱体积，收集各洗脱组分，获得大孔树脂乙醇洗脱相；S4、酸解：取大孔树脂乙醇洗脱相，加入无水乙醇，而后再加入等体积4M的盐酸，于90℃水浴中酸水解90min，将酸解液减压蒸干，获得大孔树脂乙醇洗脱相酸解物；S5、HSCCC制备分离：配置正己烷-乙酸乙酯-甲醇-水溶液体系，体积比为4:6:4:6，充分震荡，静置分层，分别收集上相和下相溶液，超声脱气，上相为固定相，下相为流动相，将固定相按照一定的流速泵满色谱柱后，调节高速逆流色谱转速至850rpm，并将流动相按照一定的流速泵入色谱柱中；两相达平衡后，将样品溶液从进样环注入高速逆流色谱管路，样品溶液为步骤S4获得的大孔树脂乙醇洗脱相酸解物，同时通过紫外检测器检测流出组分，紫外检测波长设置为280nm，根据峰形收集各组分；S6、半制备型高效液相纯化：将步骤S5收集到的组分按顺序编号，以咖啡因标准品作为对照，进行高效液相色谱分析，选择与咖啡因标准品峰保留时间一致的样品作为研究对象进行半制备型高效液相纯化，其上样条件为：质量浓度为5mg/mL-20mg/mL，进样体积为10μL-200μL，根据峰形收集各组分，进行高效液相色谱分析，筛选出目标组分；S7、结构鉴定：目标组分利用高效液相色谱、核磁共振、质谱的方法进行鉴定，即可确定目标组分为咖啡因；S8、纯度测定：将S7中的目标组分利用高效液相色谱进行测定，按照峰面积归一法确定其纯度。本专利技术第二方面实施例提出了咖啡因作为醛糖还原酶抑制剂的用途，其以咖啡因作为活性成分之一或唯一活性成分用于制备预防或/和治疗糖尿病并发症的药物。本专利技术第三方面实施例提出了咖啡因作为醛糖还原酶抑制剂的用途，其以咖啡因作为活性成分之一或唯一活性成分用于制备预防或/和治疗糖尿病并发症的保健食品。附图说明图1是根据本专利技术实施例一HSCCC分离色谱图；图2是根据本专利技术实施例一分离样品peakI-peakIV的高效液相色谱图；图3是根据本专利技术实施例一咖啡因标准品的高效液相色谱图；图4是根据本专利技术实施例一分离样品compoundI的高效液相图；图5是根据本专利技术实施例一分离样品compoundI的核磁共振图；图6是根据本专利技术实施例一咖啡因标准品的核磁共振图；图7是根据本专利技术实施例一分离样品compoundI的质谱图；图8为根据本专利技术实施例的咖啡因对醛糖还原酶的抑制作用示意图。具体实施方式以下通过特定的具体实例和附图说明本专利技术的技术方案。应理解，本专利技术提到的一个或多个方法步骤并不排斥在所述组合步骤前后还存在其他方法步骤或在这些明确提到的步骤之间还可以插入其他方法步骤；还应理解，这些实施例仅用于说明本专利技术而不用于限制本专利技术的范围。而且，除非另有说明，各方法步骤的编号仅为鉴别各方法步骤的便利工具，而非为限制各方法步骤的排列次序或限定本专利技术可实施的范围，其相对关系的改变或调整，在无实质变更
技术实现思路
的情况下，当亦视为本专利技术可实施的范畴。为了更好的理解上述技术方案，下面将参照附图更详细地描述本专利技术的示例性实施例。虽然附图中显示了本专利技术的示例性实施例，然而应当理解，可以以各种形式实现本专利技术而不应被这里阐述的实施例所限制。相反，提供这些实施例是为了能够更透彻地理解本专利技术，并且能够将本专利技术的范围完整的传达给本领域的技术人员。为了更好的理解上述技术方案，下面将结合说明书附图1-8以及具体的实施方式对上述技术方案进行详细的说明。实施例一咖啡因的制备本专利技术的咖啡因是从茶花粉中分离纯化而制得的，具体包括以下步骤：S11、提取准确称取1000g经高速万能粉碎机粉碎后，过筛(40目)后的茶花粉，按料液比1g:10mL的比例添加80％乙醇，于80℃水浴条件下浸提6h，共提取3次，抽滤获得上清液，合并上清液，并于50℃下减压浓缩成浸膏，获得粗提物，4℃冷藏备用。S12、萃取将步骤S1获得的粗提物按料液比1g:10mL加入蒸馏水，搅拌溶解，依次用石油醚、乙酸乙酯和正丁醇萃取，均萃取3次，而后将它们分别置于50℃旋转蒸发仪中减压浓缩，获得石油醚相、乙酸乙酯相及正丁醇相。S13、大孔吸附树脂层析取步骤S2中的乙酸乙酯相，按料液比1g:10mL加入蒸馏水复溶，振荡，4000r/min离心12min，取上清液加入HP-20型大孔树脂，然后将大孔树脂置于37℃下150r/min的摇床中吸附16h，将吸附后的大孔树脂装柱，依次用浓度为0％、10％、30％的乙醇水溶液进行洗脱本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.咖啡因作为醛糖还原酶抑制剂的用途，其特征在于：以咖啡因作为活性成分之一或唯一活性成分用于制备醛糖还原酶抑制剂。

【技术特征摘要】
1.咖啡因作为醛糖还原酶抑制剂的用途，其特征在于：以咖啡因作为活性成分之一或唯一活性成分用于制备醛糖还原酶抑制剂。2.如权利要求1所述的用途，其特征在于：所述咖啡因对醛糖还原酶具有抑制作用。3.如权利要求1所述的用途，其特征在于：所述咖啡因是从茶花粉中分离纯化而制得的。4.如权利要求3所述的用途，其特征在于：所述咖啡因分离纯化包括以下步骤：S1、提取：取茶花粉，加入乙醇，于水浴中浸提，共提取3次，抽滤，合并滤液，并减压浓缩成浸膏，得粗提物；S2、萃取：粗提物加入蒸馏水，搅拌溶解，依次用石油醚、乙酸乙酯和正丁醇萃取，均萃取3次，而后将它们分别减压浓缩，得石油醚相、乙酸乙酯相及正丁醇相；S3、大孔吸附树脂层析：取乙酸乙酯相，加入蒸馏水复溶，振荡离心12min，取上清液加入大孔树脂中，大孔树脂置于摇床中吸附16h，将吸附后的大孔树脂装柱，使用不同浓度的乙醇水溶液进行洗脱，洗脱体积均为5个柱体积，收集各洗脱组分，获得大孔树脂乙醇洗脱相；S4、酸解：取大孔树脂乙醇洗脱相，加入无水乙醇，而后再加入等体积4M的盐酸，于90°C水浴中酸水解90min，将酸解液减压蒸干，获得大孔树脂乙醇洗脱相酸解物；S5、HSCCC制备分离：配置正己烷-乙酸乙酯-甲醇-水溶液体系，体积比为4:6:4:6，充分震荡，静置分层，分别收集上相和...

【专利技术属性】
技术研发人员：杨远帆，孙旭，杜希萍，倪辉，姜泽东，黄高凌，李利君，朱艳冰，肖安风，杨秋明，陈艳红，伍菱，胡阳，
申请(专利权)人：集美大学，
类型：发明
国别省市：福建,35