一种白念珠菌生物被膜胞外基质蛋白质外组分的检测方法技术

一种白念珠菌生物被膜胞外基质蛋白质外组分的检测方法，其特征在于，活化白念珠菌并孵育流动态白念珠菌生物被膜，利用离子交换树脂提取生物被膜胞外基质，用UPLC‑TOF‑MS鉴别被膜胞外基质中除蛋白质以外的成分。本发明专利技术的样本的前处理过程去除蛋白质成分彻底，从而使得蛋白质外组分的检测效果好。

A Method for Detecting Extracellular Protein Components of Candida Albicans Biofilm Extracellular Matrix

A method for detecting extracellular matrix proteins of Candida albicans biofilm is described. The method is characterized by activating Candida albicans and incubating mobile Candida albicans biofilm, extracting extracellular matrix of biofilm by ion exchange resin, and identifying components other than proteins in extracellular matrix of biofilm by UPLC TOF MS. The sample pretreatment process of the present invention completely removes the protein component, thus making the detection effect of the protein extracomponent good.

【技术实现步骤摘要】
一种白念珠菌生物被膜胞外基质蛋白质外组分的检测方法
本专利技术属于生物检测
，具体涉及一种白念珠菌生物被膜胞外基质蛋白质外组分的检测方法。
技术介绍
白念珠菌是一种腐物寄生菌，平时生存于人体的皮肤、粘膜、消化道及其他脏器中，当机体抵抗力降低时，白色念珠菌就会繁殖，达到一定量时，人体就会发病，因而，白念珠菌是一种人类条件致病性真菌。白念珠菌可以通过形成生物被膜提高自身的耐药性。白念珠菌生物被膜分泌的胞外基质成分非常复杂，总体来说含有蛋白质(占胞外基质干重55％)、多糖(占胞外基质干重25％)、脂质(占胞外基质干重15％)及核酸(占胞外基质干重5％)等大分子物质。
技术实现思路
本专利技术目的在于提供一种白念珠菌生物被膜胞外基质蛋白质外组分的检测方法。为实现上述目的，本专利技术提供的技术方案是：一种白念珠菌生物被膜胞外基质蛋白质外组分的检测方法，包括下列步骤：第一步：白念珠菌活化将白念珠菌接种于SDB培养基中，摇床孵育20～28h；培养液离心后收集真菌细胞，用无菌PBS缓冲液清洗，然后将清洗所得真菌细胞重悬于RPMI-1640培养基中，再孵育12-18h，然后在4℃条件下，以2500～本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种白念珠菌生物被膜胞外基质蛋白质外组分的检测方法，其特征在于：包括下列步骤：第一步：白念珠菌活化将白念珠菌接种于SDB培养基中，摇床孵育20～28h；培养液离心后收集真菌细胞，用无菌PBS缓冲液清洗，然后将清洗所得真菌细胞重悬于RPMI‑1640培养基中，再孵育12‑18h，然后在4℃条件下，以2500～3500转/min离心，收集下沉的真菌细胞，添加真菌培养基调整真菌细胞浓度到0.8～1.2×106CFU/ml，得到重悬菌液；第二步：流动态白念珠菌生物被膜孵育将医用导管片在乙醇中浸泡以保持无菌，用无菌水清洗后，再将其加入到所述重悬菌液中，在摇床中孵育，使白念珠菌粘附于所述医用导管片上，...

【技术特征摘要】
1.一种白念珠菌生物被膜胞外基质蛋白质外组分的检测方法，其特征在于：包括下列步骤：第一步：白念珠菌活化将白念珠菌接种于SDB培养基中，摇床孵育20～28h；培养液离心后收集真菌细胞，用无菌PBS缓冲液清洗，然后将清洗所得真菌细胞重悬于RPMI-1640培养基中，再孵育12-18h，然后在4℃条件下，以2500～3500转/min离心，收集下沉的真菌细胞，添加真菌培养基调整真菌细胞浓度到0.8～1.2×106CFU/ml，得到重悬菌液；第二步：流动态白念珠菌生物被膜孵育将医用导管片在乙醇中浸泡以保持无菌，用无菌水清洗后，再将其加入到所述重悬菌液中，在摇床中孵育，使白念珠菌粘附于所述医用导管片上，然后对粘附在医用导管片上的白念珠菌进行流动孵育，结束后孵育得到形成有成熟生物被膜的白念珠菌；第三步：将形成有成熟生物被膜的白念珠菌加入pH值为7.8的NaH2PO4-Na2HPO4离子缓冲液中，先涡旋震荡，然后再超声处理得到悬浮液，将强酸性阳离子交换树脂与悬浮液混合，摇床孵育2～4h，接着用孔径为0.22μm的微孔滤膜过滤，以7500～8500rpm/min离心2～4min，得到上清液。2.根据权利要求1所述的白念珠菌生物被膜胞外基质蛋白质外组分的检测方法，其特征在于：每升SDB培养基含有10g蛋白胨，20g琼脂粉，40g葡萄糖和0.1g氯霉素。3.根据权利要求1所述的白念珠菌生物被膜胞外基质蛋白质外组分的检测方法，其特征在于：所述RPMI-1640培养基的原料配方包含下列质量百分比的原料：1％的甘露醇、1％的营养肉汤、0.2％的K2HPO4和1.35％的琼脂粉。4.根据权利要求1所述的白念珠菌生物被膜胞外基质蛋白质外组分的检测方法，其特征在于：每升所述真菌培养基含有400mg的氯化钾、6000mg的氯化钠、2000mg的葡萄糖、290.00mg的L-精氨酸、50mg的L-天冬酰胺、20mg的L-天冬氨酸、65.15mg的L-胱氨酸二盐酸盐、20mg的L-谷氨酸、10mg的甘氨酸、15mg的L-组氨酸、20mg的L-羟脯氨酸、50mg的L-异亮...

【专利技术属性】
技术研发人员：邵菁，汪天明，施高翔，段强军，笪文悦，李倩倩，吴大强，汪长中，
申请(专利权)人：安徽中医药大学，
类型：发明
国别省市：安徽,34