特异性结合诺如病毒GI.1基因型VP1蛋白和/或VLP的抗体及其制备方法和应用技术

本发明专利技术公开了一种特异性结合诺如病毒GI.1基因型VP1蛋白和/或VLP的抗体，包含有SEQ ID NO.1‑3所示的重链可变区的CDR1、CDR2和CDR3区域和/或SEQ ID NO.4‑6所示的轻链可变区的CDR1、CDR2和CDR3区域。本发明专利技术提供的诺如病毒GI.1基因型VP1蛋白和/或VLP的抗体或抗原结合部分与GII.4基因型别无交叉反应，特异性高，具有阻断诺如病毒GI.1基因型VP1蛋白和/或VLP与HBGA结合的特性，且亲和性高，可用于检测样品中诺如病毒GI.1基因型VP1蛋白和/或VLP的存在或水平试剂盒的研发，以及针对患者的治疗和对易感人群进行被动免疫，具有良好的应用前景。

【技术实现步骤摘要】
特异性结合诺如病毒GI.1基因型VP1蛋白和/或VLP的抗体及其制备方法和应用
本专利技术涉及生物
，更具体地，本专利技术涉及一种特异性结合诺如病毒GI.1基因型VP1蛋白和/或VLP的抗体及其制备方法和应用。
技术介绍
诺如病毒是一种全球范围内重要的食源性病毒，可感染人和动物，引起急性胃肠炎。无论是在发达国家还是发展中国家，诺如病毒流行性感染涉及到各个年龄段人群，并可造成暴发性流行，已成为影响人类日常健康的不可忽视的问题。1995年我国报道了首例诺如病毒感染，20多年来，全国各地相继暴发多起群体及散发诺如病毒感染性腹泻，尤其是在幼儿园、学校、军队、医院等半封闭环境的暴发性感染，引起一定的社会恐慌。诺如病毒主要来源于海产品，常见于牡蛎等贝类中。可经食源性途径、水源性途径及人-人直接接触(粪口途径或呕吐物的气溶胶)传播；病毒粒子具有高度传染性，约18到100个病毒粒子就可以让人感染，病毒易在小范围内迅速传播，在半封闭和人口集中场所中常出现聚集性感染及群体暴发。目前市场上没有特异性抗NoV的药物及预防和治疗性疫苗，抗生素对该病毒感染引起的腹泻几乎没有作用。诺如病毒属于人类杯状病毒科，诺如病毒属，是一组无包膜单链RNA病毒，病毒颗粒呈二十面体对称结构，直径约为26～35nm。病毒基因组全长约7.7kb，包含3个开放阅读框(Openreadingframes，ORFs)。ORF1长约5kb，编码一个多聚蛋白(蛋白前体)，病毒复制过程中经过蛋白酶解后可形成6个病毒复制所必需的非结构蛋白，包括N末端蛋白、NTPase(核苷磷酸酶)、p22(3A样蛋白)、VPg(与病毒基因组共价结合)，Pro(3C样蛋白酶)、RNA依赖的RNA聚合酶等；ORF2和ORF3编码结构蛋白，ORF2长约1.8kb，编码57kD的主要结构蛋白VP1，VP1蛋白可在体外包装成VLPs；ORF3长约0.6kb，编码22kD的次要结构蛋白VP2，VP2的功能可能与基因组包装成病毒体有关。诺如病毒的衣壳由90个VP1二聚体组成，180个VP1构成了T＝3的二十面体对称结构。VP1蛋白结构上可分为S区和P区两个相邻的区域，两者通过灵活的铰链相连。S区形成内壳，构成VP1的底座，无法与受体结合；P区二聚体结构突出于内壳外，包含受体结合区域，决定NoV的抗原性。P区可进一步分为P1和P2两个亚区，后者位于VP1的最外层，高度变异，目前认为是免疫识别和受体结合的关键部位。诺如病毒的基因和抗原性呈高度多样性，根据完整VP1序列的差异，可分为7个基因组，GⅠ～GⅦ，每个基因组可进一步划分为基因型。共有30个以上基因型可以感染人类，主要包含GⅠ和GⅡ基因组，人类诺如病毒感染中，GI.1和GII.4型占据主导地位，占世界范围内流行NoV的70～80％。诺如病毒不能够体外培养，也没有适合的动物模型，因此，目前没有准确的方法评价诺如病毒疫苗免疫后血清中的中和抗体水平。病毒受体是公认的病毒感染宿主细胞的起始步骤和关键因素之一。受体对于宿主非常关键，且感染性病原体往往为了适应不同的受体表型选择性进化。2002年Hutson等首次提出诺瓦克病毒感染与ABO血型抗原有联系的假说。此后诺如病毒的受体定位一直是国际上的研究热点，经过几年的研究目前己确认肠道黏膜上的人类组织血型抗原(humanhisto-bloodgroupantigens，HBGAs)是NoV的病毒受体或协同作用物，这一发现成为诺如病毒研究的里程碑。HBGAs是红细胞、呼吸道、泌尿生殖和消化道粘膜上皮细胞表面的一类具有高度多态性的糖类抗原，在肠道上皮细胞上表现为ABO、分泌型及Lewis。HBGA在细胞表面的表达受ABO血型控制，由于单体糖之间的连接方式不同而具有多样性，包括A、B、Htype1，Htype2，Lewisy，lewisx，和leb等型别。目前对诺如病毒感染、致病机制、病毒与宿主相互作用、靶细胞受体等机理性研究相对较少，而传统的减毒疫苗和灭活疫苗的发展受到限制，另一方面，由于诺如病毒基因型别的复杂和快速变异性使疫苗研发进程缓慢，迄今为止，尚无相关疫苗上市，而基于基因工程的亚单位疫苗是诺如病毒疫苗主要的研究策略。日本武田(Takeda)公司通过昆虫细胞/杆状病毒表达系统研制的重组NoVVLPs疫苗已开展II期临床研究，美国Vaxart公司研制的口服诺如病毒疫苗以非复制型的腺病毒为载体，已开展Ⅰ期临床研究。研究发现，具有中和能力的单抗基本都识别构象表位，并且大多数识别型特异性构象表位的单克隆抗体都具有中和能力。不同中和单抗通过封闭病毒与细胞受体的结合位点，可阻止病毒感染入胞的发生，对这些单抗结合表位的研究有利于解释病毒感染入胞的关键位点。对疫苗诱发产生的中和抗体活性的测定是检测预防性疫苗免疫保护性的重要标准。中和活性抗体在诺如病毒疫苗的免疫原性检测和含量测定中具有重要的应用前景。由于目前还未出现针对诺如病毒GI.1基因型VP1蛋白的更有效的特异性抗体，因此寻找这样一种抗体，并将其应用于诺如病毒GI.1基因型感染的诊断、检测中十分必要。
技术实现思路
本专利技术要解决的技术问题是针对现有技术中缺乏更好、更有效的抗诺如病毒GI.1基因型VP1蛋白的特异性抗体，提供了一种特异性结合诺如病毒GI.1基因型VP1蛋白和/或VLP的抗体及其制备方法和应用。为了解决上述技术问题，本专利技术提供的技术方案为：一种特异性结合诺如病毒GI.1基因型VP1蛋白和/或VLP的抗体，包含有SEQIDNO.1-3所示的重链可变区的CDR1、CDR2和CDR3区域和/或SEQIDNO.4-6所示的轻链可变区的CDR1、CDR2和CDR3区域。本专利技术的另一个方面是提供一种特异性结合诺如病毒GI.1基因型VP1蛋白和/或VLP的抗体，包含有如SEQIDNO.10所示的重链可变区氨基酸序列和/或如SEQIDNO.11所示的轻链可变区氨基酸序列。本专利技术的另一个方面是提供一种特异性结合诺如病毒GI.1基因型VP1蛋白和/或VLP的抗原结合部分，包含有SEQIDNO.1-3所示的重链可变区的CDR1、CDR2和CDR3区域和/或SEQIDNO.4-6所示的轻链可变区的CDR1、CDR2和CDR3区域；其中，所述抗原结合部分选自Fab、Fab'、F(ab')2、Fd、dAb、互补决定区片段、单链抗体，人源化抗体、嵌合抗体或双抗体。所述特异性结合诺如病毒GI.1基因型VP1蛋白和/或VLP的抗原结合部分可使用本领域技术人员公知的方法获得，如利用化学试剂处理的方法，或利用蛋白酶消化的方法，如木瓜蛋白酶、胃蛋白酶等。在本专利技术中，与上述CDR氨基酸序列具有90％以上同源性(优选为95％以上)的序列，也视为包含在本专利技术的保护范围之内。同样的，上述CDR氨基酸序列的其他变异形式，例如，一个或多个氨基酸的缺失、插入和/或取代，在C末端和/或N末端增加一个或多个氨基酸等，只要其不改变上述CDR氨基酸序列的生物学功能，都视为包含在本专利技术的保护范围之内。本专利技术所述抗体可以为多克隆抗体，也可以为单克隆抗体。但作为优选，在本专利技术的一个实施方式中，本专利技术所述抗体为单克隆抗体。作为优选，在本专利技术的一个实施方式中，所述抗体是由保藏编号为CGMCCNO.15693的细胞产生的本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种特异性结合诺如病毒GI.1基因型VP1蛋白和/或VLP的抗体，其特征在于，包含有SEQ ID NO.1‑3所示的重链可变区的CDR1、CDR2和CDR3区域和/或SEQ ID NO.4‑6所示的轻链可变区的CDR1、CDR2和CDR3区域。

【技术特征摘要】
1.一种特异性结合诺如病毒GI.1基因型VP1蛋白和/或VLP的抗体，其特征在于，包含有SEQIDNO.1-3所示的重链可变区的CDR1、CDR2和CDR3区域和/或SEQIDNO.4-6所示的轻链可变区的CDR1、CDR2和CDR3区域。2.一种特异性结合诺如病毒GI.1基因型VP1蛋白和/或VLP的抗体，其特征在于，包含有如SEQIDNO.10所示的重链可变区氨基酸序列和/或如SEQIDNO.11所示的轻链可变区氨基酸序列。3.一种特异性结合诺如病毒GI.1基因型VP1蛋白和/或VLP的抗原结合部分，其特征在于，包含有SEQIDNO.1-3所示的重链可变区的CDR1、CDR2和CDR3区域和/或SEQIDNO.4-6所示的轻链可变区的CDR1、CDR2和CDR3区域；其中，所述抗原结合部分选自Fab、Fab'、F(ab')2、Fd、dAb、互补决定区片段、单链抗体，人源化抗体、嵌合抗体或双抗体。4.根据权利要求1或2所述的抗体，其特征在于，所述抗体是由保藏编号为CGMCCNO.15693的细胞产生的单克隆抗体。5.根据权利要求1或2所述的抗体，其特征在于，所述抗体是具有中和活性的单克隆抗体。6.一种多核苷酸，其特征在于，所述多核苷酸编码如权利要求2所述的重链可变区氨基酸序列或轻链可变区氨基酸序列。7.根据权利要求6所述的多核苷酸，其特征在于，编码所述重链可变区...

【专利技术属性】
技术研发人员：李启明，唐芳，张靖，马智静，陈实，靳玉琴，邵帅，雷泽华，张学峰，梁宇，侯俊伟，韩子泊，郑凡，
申请(专利权)人：国药中生生物技术研究院有限公司，北京生物制品研究所有限责任公司，
类型：发明
国别省市：北京,11