基于BIO-OSS骨粉的小鼠窦腔提升模型构建方法技术

本发明专利技术公开了基于BIO‑OSS骨粉的小鼠窦腔提升模型构建方法，小鼠鼻窦及鼻旁窦黏膜相互移行，鼻骨长且平坦，鼻腔解剖结构较为宽大，从小鼠鼻骨入路等效替代临床上广泛应用的窦腔提升模型，具有操作方便快捷、成本低，利于深入研究等重要优势。

Construction of Sinus Elevation Model in Mice Based on BIO-OSS Bone Powder

The invention discloses a method for constructing a mouse sinus lifting model based on BIO_OSS bone powder. The mouse sinus and paranasal sinus mucosa migrate mutually, the nasal bone is long and flat, the nasal cavity anatomical structure is relatively broad, and the mouse nasal bone approach is equivalent to the widely used sinus lifting model in clinic, which has the important advantages of convenient operation, low cost and is conducive to in-depth research.

【技术实现步骤摘要】
基于BIO-OSS骨粉的小鼠窦腔提升模型构建方法
本专利技术属于口腔种植学
，具体涉及基于BIO-OSS骨粉的小鼠窦腔提升模型构建方法。
技术介绍
临床上颌后牙缺失种植修复时经常存在的问题是种植可用骨高度不足。上颌窦底提升术(maxillarysinusfloorelevation)，又称为上颌窦底骨增量术(maxillarysinusaugmentation)作为一种重要的骨增量方式，通过牙槽嵴顶预备种植窝后将上颌窦黏膜抬升，或从上颌骨侧壁开窗后抬升上颌窦黏膜，在抬升起的黏膜下方植入或不植入骨增量材料，同期或延期植入种植体，随着时间推移，抬高的黏膜下方有新骨生成，其自身则形成上颌窦底的新位置。目前临床上对于严重骨高度不足的患者，一般采用一期植骨后延期种植的方法，确保二次种植手术时有充足可用骨高度。为了对成骨组织的细胞来源、详细成骨过程、机制及延期种植时长及周期等进行深入研究，引入大型动物模型如比格犬、猕猴、小型猪等，通过定位其上颌窦腔的位置，通过上颌窦侧壁开窗，抬升上颌窦底粘膜，植入BIO-OSS骨粉，观察术后局部组织的生理愈合过程，从而达到模拟临床手术愈合过程的目的。由于上颌窦腔的解剖体积小、手术位置难以掌握，导致目前研究主要采用以比格犬、猕猴、小型猪等为代表的大型动物，而采用这些动物进行研究存在如下不足之处：①动物购买及饲养成本高，手术过程复杂；②造模、取材及标本处理周期长；③配套试剂耗材如抗体等的选择性少，不利于从分子生物学角度深入探究该过程的相关机制；④目前基于大动物的基因编辑技术还有待成熟，主流的模式动物仍以小鼠作为背景，而模式动物是研究人员对基因功能挖掘及深入认识的最直接工具，大动物在该方面处于完全劣势。
技术实现思路
为克服现有技术的上述缺陷，本专利技术的目的在于提供基于BIO-OSS骨粉的小鼠窦腔提升模型构建方法，小鼠鼻窦及鼻旁窦的黏膜相互移行，其基本组织结构相似且分为三层，即表层(上皮细胞层)、中间层(疏松结缔组织层)及骨膜层，鼻骨长且平坦，鼻腔解剖结构较为宽大，从小鼠鼻骨入路等效替代临床上广泛应用的窦腔提升模型。为实现上述目的，本专利技术采用如下技术方案：基于BIO-OSS骨粉的小鼠窦腔提升模型构建方法，具体地，包括以下步骤：S1：将待建模小鼠行腹腔全身麻醉；S2：75％酒精消毒小鼠鼻中部对应表皮两次，并备皮；S3：75％酒精消毒备皮后术区皮肤两次；S4：用11号刀片沿矢状向切开鼻中部皮肤，切口长8～10mm；S5：暴露鼻骨中部骨面，用MANIFG1/4高速钨钢车针预备种植窝，钻穿局部鼻骨骨皮质；S6：用生理盐水检验局部鼻粘膜是否破裂，保证小鼠鼻粘膜的完整性；S7：从所述种植窝洞处放入BIO-OSS骨粉，重复步骤S6，再次检测小鼠鼻粘膜的完整性；S8：在所述种植窝表面覆盖BIO-OSS胶原膜，阻挡皮肤内侧纤维组织长入；S9：6-0可吸收缝线拉拢皮肤并间断缝合；S10：局部及全身运用抗生素三天，预防可能出现的局部及全身感染，即得。所述麻醉药物为1.5％戊巴比妥钠，剂量40mg/kg。所述待建模小鼠的鼻骨中点宽度为1.0～1.2mm，鼻骨厚度为0.15～0.2mm，鼻腔矢状向长度为1.0～1.2mm。步骤S6中所述检测方法为：若生理盐水在局部迅速漏入鼻腔并从小鼠鼻孔溢出，则鼻粘膜破裂，不可用于构建小鼠窦腔提升模型；反之则鼻粘膜完整，可用于构建小鼠窦腔提升模型。步骤S7中，所述BIO-OSS骨粉的用量为6～7颗。步骤S5中，所述种植窝位于所述小鼠鼻骨中部。本专利技术的有益效果在于：1、本专利技术将临床上颌窦提升术整合入小鼠模型中，具有操作方便快捷，成本低，利于深入研究等重要优势。2、本专利技术基于小鼠(小动物)模型中，根据小鼠鼻腔解剖特征计算BIO-OSS骨粉用量精确可靠，实现了临床广泛运用的上颌窦底提升术。3、本专利技术模拟临床上鼻黏膜是否漏液、鼻孔是否溢水的方法判断鼻粘膜是否破裂，操作简单，判断准确。附图说明图1为建模后6天局部提升组织HE染色(*为脱钙处理后BIO-OSS骨粉颗粒原位置)；图2为建模后6天局部提升组织MASSON染色(*为脱钙处理后BIO-OSS骨粉颗粒原位置)。具体实施方式下面结合附图详细说明本专利技术的技术方案，但本专利技术的保护范围不限于下述的实施例。1、试验材料8周龄C57/BL6小鼠12只，24-26g，由南京南方模式动物提供，饲养于本院动物中心的SPF级环境中，本实验得到本院伦理委员会许可；便携式牙科综合涡轮机由上海通达医疗器械有限公司提供；高速牙科手机(PANAMAX)由日本NSK公司提供；11号手术刀片及6-0可吸收缝线由上海金环医疗用品股份有限公司提供；车针(FG1/4)由日本MANI公司提供；H&E染色试剂盒及Masson染色试剂盒由南京建成生物工程研究所提供；体视显微镜及拍照系统由日本尼康公司提供。2、建立小鼠窦腔提升模型12只C57/BL6小鼠适应性喂养一周后，用1.5％戊巴比妥钠腹腔麻醉小鼠，剂量为40mg/kg；75％酒精消毒小鼠鼻中部对应表皮两次，并备皮；75％酒精消毒备皮后术区皮肤两次；用11号刀片沿矢状向切开鼻中部皮肤，切口长8-10mm；暴露鼻骨中部骨面，用MANIFG1/4高速钨钢车针预备植入位点，钻穿局部鼻骨骨皮质；生理盐水检验局部鼻粘膜是否破裂，如破裂，生理盐水在局部将迅速漏入鼻腔并从小鼠鼻孔溢出，该手术需要保证鼻粘膜的完整性；从预备种植窝洞处放入6-7颗BIO-OSS骨粉，重复步骤⑥，再次检漏；在种植预备窝表面覆盖适合尺寸的BIO-OSS胶原膜，阻挡皮肤内侧纤维组织长入；6-0可吸收缝线拉拢皮肤并间断缝合；局部及全身运用抗生素三天，预防可能出现的局部及全身感染。3、组织病理分析用4％多聚甲醛灌流固定后浸泡24小时，10％EDTA完全脱钙3周，石蜡包埋，切片，片厚4μm，进行HE染色及Masson染色。HE及Masson染色观察形成组织的成分、纤维分布及成骨矿化度。4、组织病理学染色参见附图1所示，窦腔提升组织HE染色：鼻腔黏膜保持完整，可见特异性的BIO-OSS骨粉脱钙后溶解形成的空腔，空腔周间隙局部形成纤维组织和骨样组织。参见附图2所示，窦腔提升组织Masson染色：鼻腔黏膜保持完整，可见特异性的BIO-OSS骨粉脱钙后溶解形成的空腔，空腔周间隙局部形成纤维组织和骨样组织，骨样组织呈蓝色着色，纤维组织呈红色着色。本专利技术基于BIO-OSS骨粉的小鼠窦腔提升模型构建方法中，通过对小鼠局部提升组织进行组织病理学分析，证明该方法建立的小鼠窦腔提升模型能有效形成骨组织，充分模拟临床组织病理学过程，且相较于基于小型猪、比格犬等大型动物模型，本专利技术构建的小鼠模型具有如表1所示优势，为临床研究提供新思路。表1以上所述为本专利技术的较佳实施例而已，但本专利技术不应该局限于该实施例所公开的内容。所以凡是不脱离本专利技术所公开的精神下完成的等效或修改，都落入本专利技术保护的范围。本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.基于BIO‑OSS骨粉的小鼠窦腔提升模型构建方法，其特征在于，包括以下步骤的构建方法：(ⅰ)待建模小鼠术前准备；和(ⅱ)所述小鼠鼻骨中部骨面预备种植窝；和(ⅲ)所述小鼠术后护理；构建方法包括：先将待建模小鼠行腹腔全身麻醉，用75％酒精消毒所述小鼠鼻中部对应表皮两次，并备皮，再75％酒精消毒所述小鼠备皮后术区皮肤两次；再沿所述小鼠矢状向切开鼻中部皮肤，切口长为8～10mm，暴露所述小鼠鼻骨中部骨面，用高速钨钢车针预备种植窝，钻穿局部鼻骨骨皮质，并用生理盐水检验所述小鼠局部鼻粘膜完整性，在鼻粘膜完整的情况下，从所述小鼠种植窝的洞处放入BIO‑OSS骨粉，再次检测小鼠鼻粘膜完整性；在所述种植窝的表面覆盖BIO‑OSS胶原膜阻挡皮肤内侧纤维组织长入；然后采用6‑0可吸收缝线拉拢皮肤并间断缝合，局部及全身运用抗生素至少三天，预防可能出现的局部及全身感染。

【技术特征摘要】
1.基于BIO-OSS骨粉的小鼠窦腔提升模型构建方法，其特征在于，包括以下步骤的构建方法：(ⅰ)待建模小鼠术前准备；和(ⅱ)所述小鼠鼻骨中部骨面预备种植窝；和(ⅲ)所述小鼠术后护理；构建方法包括：先将待建模小鼠行腹腔全身麻醉，用75％酒精消毒所述小鼠鼻中部对应表皮两次，并备皮，再75％酒精消毒所述小鼠备皮后术区皮肤两次；再沿所述小鼠矢状向切开鼻中部皮肤，切口长为8～10mm，暴露所述小鼠鼻骨中部骨面，用高速钨钢车针预备种植窝，钻穿局部鼻骨骨皮质，并用生理盐水检验所述小鼠局部鼻粘膜完整性，在鼻粘膜完整的情况下，从所述小鼠种植窝的洞处放入BIO-OSS骨粉，再次检测小鼠鼻粘膜完整性；在所述种植窝的表面覆盖BIO-OSS胶原膜阻挡皮肤内侧纤维组织长入；然后采用6-0可吸收缝线拉拢皮肤并间断缝合，局部及全身运用抗生素至少三天，预防可能...

【专利技术属性】
技术研发人员：翁雨藤，冯妍慧芝，吴迪，王佐林，
申请(专利权)人：同济大学，
类型：发明
国别省市：上海,31