疫苗抗体检测卡及其制备方法技术

本发明专利技术公开一种疫苗抗体检测卡及其制备方法。本发明专利技术的疫苗抗体检测卡包括卡盖、卡体和试剂条。卡盖设置有样品加样孔、观测窗和样品编号标示处，卡体设有放置试剂条的凹槽，试纸条设置有样品垫层、胶体金层、硝酸纤维素膜和吸水层，胶体金层包含结合疫苗特异性抗体的胶体金标记物，硝酸纤维素膜设置包被目标疫苗的抗原性检测线T线和包被羊抗鼠IgG抗体的质控线C线。本发明专利技术的疫苗抗体检测卡的样本用量少，具有提高的检测灵敏度，且使用方便、快速简易。

Vaccine antibody detection card and its preparation method

The invention discloses a vaccine antibody detection card and a preparation method thereof. The vaccine antibody detection card of the invention comprises a cap, a clamp body and a reagent strip. The cap is provided with a sample adding hole, an observation window and a sample number label. The card body is provided with a groove for placing a reagent strip. The test strip is provided with a sample cushion, a colloidal gold layer, a nitrocellulose membrane and a water absorbent layer. The colloidal gold layer contains colloidal gold labels binding specific antibodies to the vaccine. The nitrocellulose membrane sets up an antigenicity detection line T-line coated with the target vaccine and a sheep anti-mouse IgG antibody. The quality control line C line of the body. The vaccine antibody detection card of the invention has the advantages of less sample consumption, improved detection sensitivity, convenient use, fast and simple operation.

【技术实现步骤摘要】
疫苗抗体检测卡及其制备方法
本专利技术属于免疫学检验
，具体涉及胶体金免疫层析法用于快速检测血液中疫苗抗体的试剂条及其检测卡。
技术介绍
疫苗是为了预防、控制传染病的发生、流行，用于人体预防接种的预防性生物制品。预防接种用的生物制品包括疫苗、菌苗和类毒素。其中，由病菌制成的为菌苗；由病毒、立克次体、螺旋体制成的为疫苗，统称为疫苗。疫苗是将病原微生物(如细菌、立克次氏体、病毒等)及其代谢产物，经过人工减毒、灭活或利用基因工程等方法制成的用于预防传染病的自动免疫制剂。当接种这种不具伤害力的病原菌后，免疫系统便会产生一定的保护物质，如免疫激素、活性生理物质、特殊抗体等；当机体再次接触到这种病原菌时，机体的免疫系统被迅速激活，产生特异性抗体以保护机体。因为个体体质差异或者疫苗本身及其他客观因素，疫苗注射后机体内是否产生了有效抗体，目前还没有合适的方便、简易、快捷的检测方法。其中疫苗引发机体免疫系统所产生的抗体，可以用胶体金免疫层析法来检测。胶体金免疫层析技术是以胶体金作为示踪标志物应用于抗原抗体的一种新型的免疫标记技术。优点：1、使用方便快速，不限场所，所有反应能在15分钟内完成；2、成本低，不需要特殊的仪器设备；3、应用范围广，可适应多种检测条件；4、可以进行多项检测，若样品比较难获得，多项检测可以节省样品，降低成本；5、标记物稳定，标记样品在4℃贮存两年年以上，无信号衰减现象；6、胶体金本身为红色，不需要加入发色试剂，省却了酶标的致癌性底物及终止液的步骤，对人体无毒害。目前，现有技术没有实现方便、简易、快捷且灵敏度高的检测抗体的方法。
技术实现思路
本专利技术的目的之一在于提供一种疫苗抗体检测卡，其包括卡盖、卡体和试剂条，所述卡盖设置有样品加样孔、观测窗和样品编号标示处，所述卡体设有放置试剂条的凹槽，所述试纸条设置有样品垫层、胶体金层、硝酸纤维素膜和吸水层，所述胶体金层包含结合疫苗特异性抗体的胶体金标记物，所述硝酸纤维素膜设置包被目标疫苗的抗原性检测线T线和包被羊抗鼠IgG抗体的质控线C线。优选地，本专利技术的疫苗抗体检测卡进一步包括第一过滤层和第二过滤层，其中所述第一过滤层具有允许抗体分子通过但不能允许分子团聚物通过的第一孔径，第二过滤层具有允许小分子通过但不能允许抗体分子通过的第二孔径，且所述第一过滤层设置于所述样品垫层上方，所述第二过滤层设置于所述胶体金层下方。优选地，本专利技术的疫苗抗体检测卡中，所述硝酸纤维素膜由纳米硝酸纤维素制成。优选地，本专利技术的疫苗抗体检测卡中，所述胶体金层包括玻璃纤维层。优选地，本专利技术的疫苗抗体检测卡中，所述试纸条进一步包括支承层，且在支承层的同一侧上沿其长度方向依次以相互连接的方式设置所述样品垫层、所述胶体金层、所述硝酸纤维素膜和所述吸水层。优选地，本专利技术的疫苗抗体检测卡中，所述样品加样孔对应于所述样品垫层的位置设置，所述观测窗对应于所述硝酸纤维素膜的位置设置。优选地，本专利技术的疫苗抗体检测卡中，所述卡盖和所述卡体通过卡合形成闭合密封盒。本专利技术的第二目的在于提供一种疫苗抗体检测卡的制备方法，其包括以下步骤：(1)胶体金的制备，通过氯金酸在还原剂作用下形成所需尺寸的胶体金颗粒；(2)胶体金的标记，在适于反应的条件下将步骤(1)中制备的胶体金溶液与鼠抗人免疫球蛋白抗体混合，得到胶体金标记鼠抗人免疫球蛋白抗体；(3)胶体金固相化，将胶体金标记鼠抗人免疫球蛋白抗体固定于胶体金层；(4)包被硝酸纤维素膜，将各不同疫苗抗原喷于硝酸纤维素膜的第一位置上，形成目标疫苗抗原检测线，将羊抗鼠IgG抗体喷于硝酸纤维素膜的第二位置，形成羊抗鼠IgG抗体质控线，然后使硝酸纤维素膜干燥；(5)试纸条的制备，在PVC板的中间位置粘贴所得硝酸纤维素膜，在PVC板固定硝酸纤维素膜位置的一侧粘贴吸水层，在PVC板固定硝酸纤维素膜位置的另一侧粘贴胶体金层和样品垫层；(6)将所得试纸条置于卡体的凹槽内，将卡盖和卡体扣合，得到疫苗抗体检测卡。优选地，本专利技术的制备方法中，吸水纸覆盖硝酸纤维素膜边沿的上方0.5-1.5毫米，所述胶体金层覆盖硝酸纤维素膜的上方0.5-1.5毫米。优选地，本专利技术的制备方法中，所述样品垫层、胶体金层和硝酸纤维素膜依次相临连接，且在所述样品垫层上方设置第一过滤层，在所述胶体金层下方设置第二过滤层。有益技术效果：本专利技术利用胶体金免疫层析技术，可特异的检测出不同疫苗产生的特异性抗体。由于检测卡方便，样本用量少，仅需50μL血清、血浆或全血即可实现疫苗抗体的检测，并且操作简单，检测速度快，不限场地，适用于临床及社区推广。优选地，本专利技术通过第一过滤层过滤分子团或大颗粒物等杂质，避免了杂质进入硝酸纤维素膜，从而避免了这些物质对于检测的影响。还优选地，本专利技术通过第二过滤层过滤掉未结合抗体的胶体金颗粒及其他小分子等杂质，避免了这些杂质进入硝酸纤维素膜。在传统的方法中这些杂质能够填充硝酸纤维素膜的孔隙，从而不利于所要检测的抗原抗体结合物的移动，并且未结合抗体的胶体金颗粒影响检测线位置的反应强度。还优选地，本专利技术采用纳米硝酸纤维素膜代替传统的一般硝酸纤维素膜，通过本专利技术的技术方案，纳米硝酸纤维素没有降低检测灵敏度，仍然具有优异的效果。这与本领域内的一般理解的不同。附图说明图1本专利技术一种示例性疫苗抗体检测卡的立体图。图2本专利技术一种示例性疫苗抗体检测卡的试剂条的图。图3本专利技术另一种示例性疫苗抗体检测卡的试剂条的部分结构图。附图标记说明：疫苗抗体检测卡100，卡盖110，卡体120，试剂条130，样品加样孔111，观测窗112，样品垫层121、221，胶体金层122、222，硝酸纤维素膜123、223，吸水层124，支承层125、225，第一过滤层2211，第二过滤层2221。具体实施方式现详细说明本专利技术的多种示例性实施方式，该详细说明不应认为是对本专利技术的限制，而应理解为是对本专利技术的某些方面、特性和实施方案的更详细的描述。应理解本专利技术中所述的术语仅仅是为描述特别的实施方式，并非用于限制本专利技术。另外，对于本专利技术中的数值范围，应理解为具体公开了该范围的上限和下限以及它们之间的每个中间值。在任何陈述值或陈述范围内的中间值以及任何其他陈述值或在所述范围内的中间值之间的每个较小的范围也包括在本专利技术内。这些较小范围的上限和下限可独立地包括或排除在范围内。除非另有说明，否则本文使用的所有技术和科学术语具有本专利技术所述领域的常规技术人员通常理解的相同含义。虽然本专利技术仅描述了优选的方法和材料，但是在本专利技术的实施或测试中也可以使用与本文所述相似或等同的任何方法和材料。本说明书中提到的所有文献通过引用并入，用以公开和描述与所述文献相关的方法和/或材料。在与任何并入的文献冲突时，以本说明书的内容为准。除非另有说明，否则“％”为基于重量的百分数。实施例1本实施例为示例性疫苗抗体检测卡的制备方法，其包括以下步骤：(1)胶体金的制备根据目标需检测的不同类型疫苗可选取合适大小的胶体金颗粒，15nm、18nm-20nm、30nm或50nm胶体金颗粒的制备：取0.01％HAuCl4水溶液100ml，加热煮沸。根据需要迅速加入1％枸橼酸三钠水溶液4ml、2.5ml、1ml或0.75ml，继续煮沸约5min，出现橙红色。这样制成的胶体金颗粒则分别为15nm、本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种疫苗抗体检测卡，其特征在于，包括卡盖、卡体和试剂条，所述卡盖设置有样品加样孔、观测窗和样品编号标示处，所述卡体设有放置试剂条的凹槽，所述试纸条设置有样品垫层、胶体金层、硝酸纤维素膜和吸水层，所述胶体金层包含结合疫苗特异性抗体的胶体金标记物，所述硝酸纤维素膜设置包被目标疫苗的抗原性检测线T线和包被羊抗鼠IgG抗体的质控线C线。

【技术特征摘要】
1.一种疫苗抗体检测卡，其特征在于，包括卡盖、卡体和试剂条，所述卡盖设置有样品加样孔、观测窗和样品编号标示处，所述卡体设有放置试剂条的凹槽，所述试纸条设置有样品垫层、胶体金层、硝酸纤维素膜和吸水层，所述胶体金层包含结合疫苗特异性抗体的胶体金标记物，所述硝酸纤维素膜设置包被目标疫苗的抗原性检测线T线和包被羊抗鼠IgG抗体的质控线C线。2.根据权利要求1所述的疫苗抗体检测卡，其特征在于，进一步包括第一过滤层和第二过滤层，其中所述第一过滤层具有允许抗体分子通过但不能允许分子团聚物通过的第一孔径，第二过滤层具有允许小分子通过但不能允许抗体分子通过的第二孔径，且所述第一过滤层设置于所述样品垫层上方，所述第二过滤层的至少一部分设置于所述胶体金层下方。3.根据权利要求2所述的疫苗抗体检测卡，其特征在于，所述硝酸纤维素膜由纳米硝酸纤维素制成。4.根据权利要求3所述的疫苗抗体检测卡，其特征在于，所述胶体金层包括玻璃纤维层。5.根据权利要求4所述的疫苗抗体检测卡，其特征在于，所述试纸条进一步包括支承层，且在支承层的同一侧上沿其长度方向依次以相互连接的方式设置所述样品垫层、所述胶体金层、所述硝酸纤维素膜和所述吸水层。6.根据权利要求5所述的疫苗抗体检测卡，其特征在于，所述样品加样孔对应于所述样品垫层的位置设置，所述观测窗对应于所述硝酸纤维素膜的位置设置。7.根据权利要求6所述的疫苗抗体检测卡，其特征在于，所述卡盖和所述卡...

【专利技术属性】
技术研发人员：邱灵冰，
申请(专利权)人：邱灵冰，
类型：发明
国别省市：广东,44