一种曼氏无针乌贼胚胎DNA损伤的检测方法技术

本发明专利技术公开了一种曼氏无针乌贼胚胎DNA损伤的检测方法，包括如下步骤：选取游动性强、个体健康的性成熟曼氏无针乌贼，自然交配产卵，收集受精卵，挑选受精后不同发育时期的胚胎；将胚胎用PBS漂洗两次，剥去卵膜，并在室温下用含有蛋白酶K和水杨酸的消化液消化；消化完全后利用琼脂糖制成胶板，然后放入裂解液中裂解，电泳，染色，在荧光显微镜下观察，测量，即可。有益效果为：本发明专利技术检测方法具有简便、快速、低耗、灵敏性和准确性高、重复性好、成本较低等独特优点，所需样本量少，着色效果好，能获得完整清晰的图像，易分析。

【技术实现步骤摘要】
一种曼氏无针乌贼胚胎DNA损伤的检测方法
本专利技术涉及DNA损伤检测
，尤其是涉及一种曼氏无针乌贼胚胎DNA损伤的检测方法。技术背景头足类属于软体动物，是海洋生态系统中的重要组成部分，同时对海洋生态平衡有着不可或缺的作用。乌贼属于软体动物门（Mollusca）、头足纲（Cephalopoda），广泛分布在各个海域，在生物系统演化中占有重要的地位。其肉质鲜美可口，具有很好的营养价值，蛋白含量极高。除了可以食用以外，还有很高的药用价值，墨囊可以促进血液凝固并且具有抑菌功能，海螵蛸可以药用，耳石可用来分析物种的年龄和海洋环境的时空变化。另外，乌贼在海洋生态系统食物链中扮演着十分重要的角色，对维持海洋生态系的生态平衡起着非常重要的作用。但自上世纪70年代始，由于过度捕捞和环境变化，乌贼资源衰退严重。曼氏无针乌贼隶属于软体动物门，头足纲，二鳃亚纲，乌贼目，乌贼科，无针乌贼属，主要分布于我国东南沿海、俄罗斯、日本、朝鲜以及东南亚海域。由于过度捕捞与环境变化，其资源量一度遭到极大破坏，产量急剧下降，渔汛消失，临近濒危。自上个世纪80年代以来，得益于曼氏无针乌贼人工繁育和养成技术的突破，本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种曼氏无针乌贼胚胎DNA损伤的检测方法，包括不同发育时期胚胎收集和DNA损伤的检测，其特征在于：所述DNA损伤的检测：将胚胎用PBS漂洗两次，剥去卵膜，并在室温下用含有蛋白酶K和水杨酸的消化液消化；消化完全后利用琼脂糖制成胶板，然后放入裂解液中裂解，电泳，染色，在荧光显微镜下观察，测量，即可。

【技术特征摘要】
1.一种曼氏无针乌贼胚胎DNA损伤的检测方法，包括不同发育时期胚胎收集和DNA损伤的检测，其特征在于：所述DNA损伤的检测：将胚胎用PBS漂洗两次，剥去卵膜，并在室温下用含有蛋白酶K和水杨酸的消化液消化；消化完全后利用琼脂糖制成胶板，然后放入裂解液中裂解，电泳，染色，在荧光显微镜下观察，测量，即可。2.根据权利要求1所述的一种曼氏无针乌贼胚胎DNA损伤的检测方法，其特征在于：所述消化液中含8-12µg/ml蛋白酶K和1.0-1.5µg/ml水杨酸。3.根据权利要求1所述的一种曼氏无针乌贼胚胎DNA损伤的检测方法，其特征在于：所述发育≤24h的胚胎消化处理时间为5-10min，发育＞24h的胚胎消化处理15-30min。4.根据权利要求1所述的一种曼氏无针乌贼胚胎DNA损伤的检测方法，其特征在于：所述胶板制备的具体步骤为：第一层为浓度0.5-1.5%的正常熔点琼脂糖，凝固后加浓度为0.5-1.0%、含细胞悬液的低熔点琼脂糖，细胞悬液和低熔点琼脂糖的体积比为1:0.9-1.1，置于0-5℃黑暗条件下固定30-60min，即得胶板。5.根据权利要求1所述...

【专利技术属性】
技术研发人员：柳意樊，刘炳舰，张建设，景斐，夏立萍，
申请(专利权)人：浙江海洋大学，
类型：发明
国别省市：浙江,33