一种提高拟南芥种子成像质量的方法技术

一种提高拟南芥种子成像质量的方法，本发明专利技术属于生物学领域，具体涉及一种提高植物种子成像质量方法的领域。本发明专利技术的目的是为了解决拟南芥种子三维图像成像质量较差，无法用于进一步分析拟南芥种子内部参数的问题。本发明专利技术的提高拟南芥种子成像质量的方法，按以下步骤进行：一、溶液的配制：配制标准固定液，配制碘化铯溶液；二、拟南芥种子的处理；三、拟南芥种子的干燥；四、拟南芥种子的微计算断层扫描仪成像；五、重构图片预处理。通过本发明专利技术提供的方法得到的拟南芥种子图像经Micro CT扫描，其结果更清晰，大幅提高图像质量，十分利用拟南芥种子三维重构的建立，也为拟南芥种子内部参数计算提供可靠数据。

【技术实现步骤摘要】
一种提高拟南芥种子成像质量的方法
本专利技术属于生物学领域，具体涉及一种提高植物种子成像质量方法的领域。
技术介绍
拟南芥是植物研究中的模式植物，属于十字花科，被子植物门，双子叶植物纲。拟南芥的种子极小，千粒重约0.02g，每株结籽数量随各植株生育期长短及植物营养条件而异，少者约结粒数百，多者可达万粒。目前对于拟南芥种子的研究主要集中在生长素、脱落酸、赤霉素等植物生长激素以及转录因子在其发育和胚胎发育过程中的重要作用等。此外在拟南芥种子结构研究中，普遍采用光学显微镜以及电子显微镜来观察拟南芥种子内部结构，无法构建完整种子的三维立体图像、获得内部各组织结构详细的参数数据。显微CT虽然能够构建拟南芥种子的三维图像，但由于其内部各组织之间、各细胞之间、细胞与周围环境之间没有明显的密度差异，重构得到的三维图像成像质量较差，无法用于进一步分析拟南芥种子内部参数。因此，提高拟南芥种子内部的成像对比度对于研究其胚胎发生、发育等机理具有重要意义。MicroCT(Micro-computedtomography，Micro-CT)，又称为微型计算机成像断层技术、X射线微断层技术，是一种高分辨率的非侵入本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种提高拟南芥种子成像质量的方法，其特征在于：该方法按以下步骤进行：一、溶液的配制：配制标准固定液，取质量分数为37％‑40％的甲醛、冰醋酸、体积分数为70％‑80％的酒精和甘油按1:(1‑2):(10‑20):(1‑2)的体积比倒入容器内，混合均匀，得到标准固定液；配制碘化铯溶液，称取8g‑12g碘化铯粉末，溶于100ml‑200ml的蒸馏水中，得到碘化铯溶液，所述碘化铯溶液现配现用；二、拟南芥种子的处理：利用移液器按体积比为1:(1‑2)分别吸取碘化铯溶液与标准固定液至离心管中，吹吸混匀；然后使用尖头镊子小心划开成熟的拟南芥果夹，将角果剥落至上述混合液中，用移液器吹打数次；放至真空泵中...

【技术特征摘要】
1.一种提高拟南芥种子成像质量的方法，其特征在于：该方法按以下步骤进行：一、溶液的配制：配制标准固定液，取质量分数为37％-40％的甲醛、冰醋酸、体积分数为70％-80％的酒精和甘油按1:(1-2):(10-20):(1-2)的体积比倒入容器内，混合均匀，得到标准固定液；配制碘化铯溶液，称取8g-12g碘化铯粉末，溶于100ml-200ml的蒸馏水中，得到碘化铯溶液，所述碘化铯溶液现配现用；二、拟南芥种子的处理：利用移液器按体积比为1:(1-2)分别吸取碘化铯溶液与标准固定液至离心管中，吹吸混匀；然后使用尖头镊子小心划开成熟的拟南芥果夹，将角果剥落至上述混合液中，用移液器吹打数次；放至真空泵中，18-20kpa真空浸染20-30min，然后4℃-8℃避光浸染7d-10d；之后将样品取出并用体积分数为70％的酒精冲洗2次，然后将样品置于梯度酒精中逐级脱水，70％酒精，20min→80％酒精，20min→90％酒精，20min→95％酒精，20min→100％酒精，然后4℃无水乙醇中保存，得到处理好的拟南芥种子；三、拟南芥种子的干燥：将步骤二处理好的拟南芥种子用擦镜纸包好，用订书机封口以防种子流出，然后放置于CO2临界点干燥仪中干燥，得到干燥后的拟南芥种子；将干燥好的样品转移至离心管中，并加入硅胶颗粒常温保存以备下一步的扫描；四、拟南芥种子的微计算断层扫描仪成像：将所得样品经高分辨率台式微计算断层扫描仪扫描，开机并启动其操控软件skyscan1172，打开样本舱门，将处理好的样本固定在石蜡台上，最多可一次性固定5个；将载有样本的石蜡台装在200μl离心管中，然后固定在载物台上，关闭舱门；设置电压33-35kV，电流90-120μA，分辨率0.5-0.8μm，...

【专利技术属性】
技术研发人员：林金星，胡子建，张曦，杨舜垚，单晓昳，
申请(专利权)人：北京林业大学，
类型：发明
国别省市：北京,11